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白头翁素对腹泻小鼠肠黏膜修复因子EGFR和TGFβ1的影响 被引量:14
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作者 刘颖 徐倩倩 +4 位作者 薛晓阳 褚军 肖静静 陈立功 董世山 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期475-480,共6页
白头翁素是白头翁的主要成分,对腹泻具有显著的防治效果。本试验利用猪轮状病毒和大肠杆菌混合感染建立腹泻模型,通过免疫组织化学方法和RT-PCR方法研究白头翁素对腹泻小鼠肠黏膜修复因子EGFR和TGFβ1表达的影响,揭示白头翁素防治腹泻... 白头翁素是白头翁的主要成分,对腹泻具有显著的防治效果。本试验利用猪轮状病毒和大肠杆菌混合感染建立腹泻模型,通过免疫组织化学方法和RT-PCR方法研究白头翁素对腹泻小鼠肠黏膜修复因子EGFR和TGFβ1表达的影响,揭示白头翁素防治腹泻的肠黏膜修复机制。结果显示:小鼠腹泻初期,自愈组、治疗组和预防组黏膜修复因子EGFR和TGFβ1的蛋白表达量均有所升高,其中预防组较空白对照组差异显著(P<0.05),EGFR和TGFβ1的mRNA表达量较空白对照组也显著升高,且差异极显著(P<0.01)。腹泻后期,表达量逐渐下降直至正常。试验结果表明:白头翁素对轮状病毒和大肠杆菌混合感染性腹泻良好的预防效果可能与其调节黏膜修复因子EGFR和TGFβ1的表达有关,从而促进肠黏膜的修复。 展开更多
关键词 白头翁素 小鼠 腹泻 黏膜修复 表皮生长因子受体 转化生长因子Β1
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截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性 被引量:6
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作者 朱卫霞 袁万哲 +3 位作者 李丽敏 宋勤叶 孙泰然 李潭清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1561-1566,共6页
应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表... 应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并探讨其抗原活性。通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性。结果应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体。本研究应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 可溶性原核表达 抗原活性
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猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫猪脾脏转移因子的制备及其活性分析 被引量:2
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作者 郭海勇 袁洪兴 +4 位作者 孙泰然 曹静 宋勤叶 李潭清 逯纪成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1467-1474,共8页
从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反... 从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反应和硝酸-钼酸铵试验等方法检测TF的主要成分,经高效液相色谱法测定TF中氨基酸种类及其含量;通过鸡红细胞吞噬试验和MTT法,检测TF对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血淋巴细胞增殖活性的调节作用。进而将9头4周龄健康仔猪随机分为A、B和C组,每组3头。A组每头猪左、右侧耳后分别肌内注射1头份PRRSV疫苗和1mL TF;B组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL TF的混合液;C组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL生理盐水混合液。免疫后20d,通过MTT法检测每组猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖活性。制备的TF内无蛋白质成分,含有核酸和18种氨基酸,每毫升TF含核酸21.5μg、总氨基酸3.479mg。TF能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力和PBLC增殖活性。当TF与PRRSV疫苗分开或混合注射给4周龄仔猪后,能够显著提高仔猪PBLC的增殖能力。从PRRS弱毒活疫苗免疫猪的脾制备了TF,其能显著提高巨噬细胞的吞噬功能和外周血淋巴细胞的增殖活性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 转移因子 免疫活性
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PrP106-126对星形胶质细胞层黏连蛋白和纤黏连蛋白表达的影响
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作者 李玉荣 武现军 +3 位作者 吴浩 陈立功 霍书英 高玉红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期38-42,共5页
星形胶质细胞增生是朊病毒病早期的主要病理学特征。PrP106-126(prion protein peptide106-126)具神经毒性,导致星形胶质细胞增生。层黏连蛋白(laminin,LN)和纤黏连蛋白(fibronectin,FN)是星形胶质细胞胞外基质的主要成分。利用PrP106-... 星形胶质细胞增生是朊病毒病早期的主要病理学特征。PrP106-126(prion protein peptide106-126)具神经毒性,导致星形胶质细胞增生。层黏连蛋白(laminin,LN)和纤黏连蛋白(fibronectin,FN)是星形胶质细胞胞外基质的主要成分。利用PrP106-126和PrP106-126制备的小胶质条件培养基(conditioned medium from microglia,MiCM)分别作用于体外培养的星形胶质细胞,应用RT-PCR和Westernblot技术探讨PrP106-126对星形胶质细胞的增殖及其胞内LN、FN表达的影响。试验分为5个处理(空白对照、Scr对照、PrP106-126、MiCM、MiCMPrP106-126)。结果表明,PrP106-126可促进星形胶质细胞增殖、LN和FN的表达,但促增殖和FN表达作用有赖于活化小胶质细胞细胞因子的共同参与。 展开更多
关键词 PrP106—126 星形胶质细胞 小胶质细胞BV-2 层黏连蛋白 纤黏连蛋白
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一株分离自免疫猪场的伪狂犬病病毒的鉴定与变异分析 被引量:12
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作者 王一鹏 王亚文 +3 位作者 徐瑞涛 林依丹 李潭清 宋勤叶 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2070-2078,共9页
为了明确河北某伪狂犬病疫苗免疫猪场的哺乳仔猪出现神经症状和死亡的病因,作者对发病仔猪进行研究时从脑组织中分离到1株病毒,通过PCR、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、动物试验以及基因序列分析等试验,证明所分离的病毒为伪狂犬病病毒... 为了明确河北某伪狂犬病疫苗免疫猪场的哺乳仔猪出现神经症状和死亡的病因,作者对发病仔猪进行研究时从脑组织中分离到1株病毒,通过PCR、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、动物试验以及基因序列分析等试验,证明所分离的病毒为伪狂犬病病毒(PRV),命名为HBXT-2018株。皮下接种该病毒后24h,家兔开始啃咬病毒接种部位皮肤,在44~68h内全部死亡。抗PRVBartha-K61株的血清对分离株的中和抗体效价低于1∶8,而抗PRV变异株血清的中和抗体效价为1∶58.9。与Bartha株比较,HBXT-2018株的gB和gC的核苷酸和氨基酸序列多处发生单个或连续几个碱基(或氨基酸)置换、插入和缺失突变,预测的gB和gC上的潜在抗原表位也发生了改变。基于gB、gC和TK的系统进化分析表明,HBXT-2018株与国内流行毒株尤其与2011年之后的流行毒株处于同一个进化分支,而与Bartha株及其他欧美毒株处于不同的进化分支。上述结果表明,分离的PRVHBXT-2018株为致病毒株,其与当前国内流行的PRV变异株具有相同的遗传特征,与Bartha株为代表的欧美流行株的遗传关系远。Bartha-K61株抗血清对分离株的中和作用不明显,提示gB与gC的突变可能与该毒株免疫逃逸、继而导致仔猪发病有关。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Bartha-K61 HBXT-2018 血清中和作用 变异分析
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检测猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗体的间接ELISA方法 被引量:4
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作者 姚作俊 郝达仁 +4 位作者 白云 颜国华 王海敏 宋勤叶 李潭清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1085-1091,共7页
为了建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体的间接ELISA方法,初步分析PED灭活疫苗免疫母猪所产仔猪的血清母源特异抗体动态,笔者应用重组PEDV部分纤突(spike,S)蛋白作为检测抗原,建立了基于PEDV S1蛋白... 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体的间接ELISA方法,初步分析PED灭活疫苗免疫母猪所产仔猪的血清母源特异抗体动态,笔者应用重组PEDV部分纤突(spike,S)蛋白作为检测抗原,建立了基于PEDV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了产前4周用PED灭活疫苗免疫母猪的初乳、分娩当天血清及其仔猪1、7、14、21、28和35日龄(d)时血清中的PEDV抗体。结果显示:建立的间接ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的抗血清无交叉反应;敏感性高于免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),与IPMA检测结果的符合率为97.14%;批内和批间重复性试验的变异系数小于10%。免疫母猪初乳、分娩当天血清中的PEDV抗体阳性率为100%,初乳比血清中的平均抗体水平低;1d仔猪血清PEDV抗体阳性率为50%,平均抗体水平低,与初乳中的抗体水平接近,7d以后所有仔猪血清全部转为PEDV抗体阴性。建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法;产前用PEDV灭活疫苗给怀孕母猪免疫1次时,其所产仔猪血清中的母源特异抗体阳性率和抗体水平低,且维持时间短暂。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组PEDV S1蛋白 间接ELISA 初生仔猪 母源抗体
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