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题名谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因强启动子的鉴定
被引量：2
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作者
张献
张玮祎
李川敏
牛树启
臧卫平
徐大庆
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机构
河北农业大学生命科学学院
河北省保定市竞秀公园管理处
河北省保定市龙潭公园管理处
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出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期69-75,共7页
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基金
国家自然科学基金(31370141)
河北省留学回国人员择优资助项目(Z2018065).
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文摘
鉴定强启动子可为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)代谢工程育种及重组蛋白生产提供高效的基因表达调控元件,但谷氨酸棒杆菌内源性强启动子的鉴定鲜有报道。本试验进行谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株细胞全蛋白二维电泳并对高表达蛋白质斑点进行质谱分析,选取分子量大小约为30 kDa、等电点约为4.6的斑点作为研究对象,分析其所对应蛋白编码基因的启动子。启动子预测结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864转录活性强。将强启动子Ptac-M和启动子P0864分别插入启动子探测载体pDXW-11,转化ATCC13032菌株感受态细胞,获得工程菌株C. glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C. glutamicum/pDXW-11-P0864。氯霉素耐受性试验结果显示,菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864的氯霉素耐受性分别为30和40μg/mL;报告蛋白CAT氯霉素酰基转移酶活性检测结果显示,C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864菌株细胞抽提物上清液CAT蛋白氯霉素酰基转移酶比活力分别为4.50和6.12 U/mg;氯霉素乙酰基转移酶基因cat转录水平的荧光定量PCR试验检测结果显示,cat基因在启动子P0864的控制下,其转录水平是在Ptac-M控制下转录水平的1.84倍。以上结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864是强启动子。
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关键词
谷氨酸棒杆菌
二维电泳
强启动子
实时荧光定量PCR
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Keywords
Corynebacterium glutamicum
two-dimensional electrophoresis
strong promoter
quantitative real-time PCR
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分类号
Q71
[生物学—分子生物学]
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