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补肾法调控小鼠卵母细胞自噬促进其成熟的分子机制研究
1
作者 吴忠玉 刘雪平 +5 位作者 唐思玲 张新苗 郗红燕 何文娟 吴莉园 段彦苍 《世界中医药》 北大核心 2025年第11期1898-1905,共8页
目的:研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其对丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路和自噬的影响。方法:150只雌性美国癌症研究所(ICR)小鼠随机分为5组,空白对照组和自噬抑制剂组小鼠蒸馏水灌... 目的:研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其对丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路和自噬的影响。方法:150只雌性美国癌症研究所(ICR)小鼠随机分为5组,空白对照组和自噬抑制剂组小鼠蒸馏水灌胃,补肾组、补肾加自噬抑制剂组、补肾加MEK抑制剂组小鼠补肾调经Ⅱ、Ⅲ号方灌胃。剥离卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测卵母细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)、螯合体1(p62)、MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达情况;免疫荧光法检测卵母细胞LC3、p62、MEK1/2、ERK1/2、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,补肾组卵母细胞第一极体排出率升高,胞质中皮质颗粒密度降低,卵母细胞中LC3、MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达升高,p62 mRNA和蛋白表达降低,LC3、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);自噬抑制剂组卵母细胞第一极体排出率降低,胞质中皮质颗粒密度升高,卵母细胞中LC3 mRNA和蛋白表达降低,p62 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与自噬抑制剂组比较,补肾加自噬抑制剂组卵母细胞第一极体排出率升高,胞质中皮质颗粒密度降低,LC3 mRNA和蛋白表达升高,p62 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与补肾组比较,补肾加MEK抑制剂组卵母细胞第一极体排出率降低,胞质中皮质颗粒密度升高,卵母细胞中LC3、MEK、ERK mRNA表达降低,p62 mRNA和蛋白表达升高,LC3、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾调经系列方可通过激活MEK/ERK信号通路提高卵母细胞自噬水平从而促进小鼠卵母细胞成熟。 展开更多
关键词 补肾调经系列方 小鼠 卵母细胞 自噬 丝裂原细胞外信号调节激酶 细胞外信号调节激酶 信号通路 分子生物学
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基于HIF2α介导途径探讨补肾调经方对控制性超排卵小鼠子宫内膜腔上皮脱离和胚胎植入的影响
2
作者 张鑫铭 郝延芝 +6 位作者 杨海军 潘威 刘章铭 徐华洲 杜惠兰 马惠荣 宋翠淼 《中成药》 北大核心 2025年第9期3079-3084,共6页
目的探讨补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠子宫内膜腔上皮脱离和胚胎植入的影响。方法将雌性小鼠随机分为正常组、模型组和补肾组,模型组和补肾组小鼠采用促性腺激素释放激素激动剂/人绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素(GnRH-a/H... 目的探讨补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠子宫内膜腔上皮脱离和胚胎植入的影响。方法将雌性小鼠随机分为正常组、模型组和补肾组,模型组和补肾组小鼠采用促性腺激素释放激素激动剂/人绝经期促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素(GnRH-a/HMG/hCG)方案进行造模,补肾组小鼠注射GnRH-a、HMG同时灌胃给予补肾调经方至注射hCG日,正常组为自然排卵小鼠。注射hCG日将3组雌鼠与雄鼠合笼,观察各组小鼠孕5、6 d胚胎植入、子宫内膜腔上皮排列和基底膜情况;孕5 d免疫荧光、Western blot、免疫组化和RT-qPCR法检测子宫内膜HIF2α及下游分子RAB27B、MMP-9、LOX、MT2-MMP蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组小鼠胚胎着床数减少,妊娠率降低(P<0.01),子宫内膜腔上皮排列整齐,基底膜连续,阻断胚胎和基质的接触,HIF2α、RAB27B、MMP-9、LOX、MT2-MMP蛋白及mRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾组小鼠胚胎着床数增加,妊娠率升高(P<0.01),子宫内膜腔上皮脱离,基底膜破坏,滋养细胞入侵基质,HIF2α、RAB27B、MMP-9、LOX、MT2-MMP蛋白及mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论补肾调经方可能通过HIF2α介导途径调控COH小鼠子宫内膜腔上皮脱离,促进胚胎植入。 展开更多
关键词 补肾调经方 控制性超排卵 HIF2α介导途径 子宫内膜腔上皮脱离 胚胎植入
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控制性超促排卵对子宫内膜的影响 被引量：1
3
作者 马玉聪 焦元清 +3 位作者 张拴成 高星 杨海军 宋翠淼 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第1期86-90,共5页
控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)是辅助生殖技术的重要组成部分,可显著提高体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的妊娠率。尽管COH在促进卵泡发育和获取卵母细胞数量方面可获... 控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)是辅助生殖技术的重要组成部分,可显著提高体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的妊娠率。尽管COH在促进卵泡发育和获取卵母细胞数量方面可获得明显的益处,并能够选择高质量的胚胎进行移植,但COH可能涉及种植窗、子宫内膜容受性、孕酮和雌二醇以及子宫收缩功能的改变,影响不孕患者的胚胎种植率和IVF妊娠率。本文就COH后子宫内膜变化的病理生理机制进行综述,以更好地解决不孕症临床治疗的瓶颈问题。 展开更多
关键词 控制性超促排卵 子宫内膜 体外受精 胚胎移植
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资癸益冲方通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路对卵巢颗粒细胞线粒体能量代谢的改善作用 被引量：2
4
作者 刘雪平 唐思玲 +5 位作者 宿滋 李荣霞 郗红燕 张新苗 吴忠玉 段彦苍 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期3271-3277,共7页
目的探讨资癸益冲方对早发性卵巢功能不全(POI)体外模型线粒体能量代谢的影响。方法应用丙烯醛(ACR)干预人卵巢颗粒细胞KGN构建POI体外模型,给予资癸益冲方含药血清干预,设置对照组、ACR组、资癸益冲方组、EX527(SIRT1抑制剂)组、EX527... 目的探讨资癸益冲方对早发性卵巢功能不全(POI)体外模型线粒体能量代谢的影响。方法应用丙烯醛(ACR)干预人卵巢颗粒细胞KGN构建POI体外模型,给予资癸益冲方含药血清干预,设置对照组、ACR组、资癸益冲方组、EX527(SIRT1抑制剂)组、EX527+资癸益冲方组。流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA法检测细胞ROS水平,Mito-Trakine荧光标记法检测细胞线粒体数量,Seahorse法检测细胞线粒体氧化磷酸化水平,比色法检测细胞ATP水平,RT-qPCR法检测细胞mtDNA拷贝数和SIRT1、PGC-1α、Nrf1、TFAM mRNA表达,Western blot法检测细胞SIRT1、PGC-1α、Ac-PGC-1α、Nrf1、TFAM蛋白表达。结果与对照组比较,ACR组KGN细胞凋亡率和ROS水平升高(P<0.05,P<0.01),线粒体数量和mtDNA拷贝数减少(P<0.01),线粒体有氧呼吸基础值、呼吸最大值、储备值和ATP水平降低(P<0.05,P<0.01),SIRT1、PGC-1α、Nrf1、TFAM mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Ac-PGC-1α蛋白表达升高(P<0.01);与ACR组比较,资癸益冲方组以上指标均改善(P<0.05,P<0.01)。资癸益冲方与EX527联用后,逆转了前者对KGN细胞的上述作用(P<0.05,P<0.01)。结论资癸益冲方可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,改善ACR诱导的KGN细胞线粒体能量代谢障碍。 展开更多
关键词 资癸益冲方 含药血清 卵巢颗粒细胞 线粒体生物合成 线粒体能量代谢 SIRT1/PGC-1α信号通路
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卵母细胞体内外核质成熟同步研究进展 被引量：2
5
作者 吕金梦 耿静然 杜惠兰 《生理科学进展》 2021年第6期471-474,共4页
卵母细胞成熟是一个复杂的过程,包括了细胞核成熟和细胞质成熟。卵母细胞在体内成熟时,由于卵泡对核成熟所提供的抑制影响,使得细胞核与细胞质可以同步成熟;而在体外成熟的卵母细胞,脱离了卵泡的微环境,导致了细胞质成熟滞后于细胞核成... 卵母细胞成熟是一个复杂的过程,包括了细胞核成熟和细胞质成熟。卵母细胞在体内成熟时,由于卵泡对核成熟所提供的抑制影响,使得细胞核与细胞质可以同步成熟;而在体外成熟的卵母细胞,脱离了卵泡的微环境,导致了细胞质成熟滞后于细胞核成熟。目前在治疗方面虽然可以通过卵母细胞成熟抑制剂来促进卵母细胞核质成熟同步和发育能力,但仍有些不理想;中药在促进核质成熟同步方面尚未见相关研究,本文将对此进行综述。 展开更多
关键词 卵母细胞 核质同步 缝隙连接
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资癸益冲方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢及凋亡的影响 被引量：7
6
作者 李建茹 舒蒙蒙 +3 位作者 方育恩 倪萌 马惠荣 宋翠淼 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期399-405,共7页
目的 探讨资癸益冲方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢调节蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法 将动情周期正常的大鼠随机分为正常组、模型组、资癸益冲方组和辅酶Q10组,每组10只,采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)法建立卵巢储备功能下降大... 目的 探讨资癸益冲方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢调节蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法 将动情周期正常的大鼠随机分为正常组、模型组、资癸益冲方组和辅酶Q10组,每组10只,采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)法建立卵巢储备功能下降大鼠模型,各组灌胃给予相应药物。ELISA法检测血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织各级卵泡数量,普鲁士蓝染色观察卵巢组织铁沉积,TUNEL法检测卵巢组织细胞凋亡,Western blot法检测卵巢组织铁代谢调节蛋白转铁蛋白受体1(TFR1)、二价金属离子转运蛋白1(DMT1)及膜铁转运蛋白1(FPN1)的表达。结果 资癸益冲方可改善卵巢储备功能下降大鼠血清性激素水平,促进卵巢组织各级卵泡生长,减少卵泡闭锁,减轻卵巢组织铁沉积及细胞凋亡程度,降低卵巢组织铁代谢调节蛋白TFR1、DMT1蛋白表达,增强FPN1蛋白表达(P<0.05)。结论 资癸益冲方可通过影响卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢调节蛋白的表达,减轻铁沉积和细胞凋亡,进而改善卵巢储备功能。 展开更多
关键词 资癸益冲方 卵巢储备功能下降 铁代谢 凋亡
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补肾助孕方对超促排卵小鼠着床窗口子宫内膜免疫因素的影响 被引量：4
7
作者 郝延芝 焦元清 +4 位作者 刘章铭 马惠荣 杜惠兰 马玉聪 宋翠淼 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第10期865-870,共6页
目的研究补肾助孕方对超促排卵小鼠着床窗口(WOI)子宫内膜胎盘蛋白14(PP14)及子宫自然杀伤(uNK)细胞的影响,探讨其改善胚胎着床的免疫作用机制。方法将60只动情周期规律的雌性昆明小鼠随机分为正常组、模型组和补肾组。观察小鼠孕第8天... 目的研究补肾助孕方对超促排卵小鼠着床窗口(WOI)子宫内膜胎盘蛋白14(PP14)及子宫自然杀伤(uNK)细胞的影响,探讨其改善胚胎着床的免疫作用机制。方法将60只动情周期规律的雌性昆明小鼠随机分为正常组、模型组和补肾组。观察小鼠孕第8天胚胎发育和着床情况;HE染色观察小鼠WOI子宫内膜厚度和腺体变化,流式细胞术检测子宫内膜uNK细胞标志物CD49b+及外周血CD4+T、CD8+T细胞水平,放射免疫法检测血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,免疫组织化学法检测子宫内膜PP14的表达。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠率和平均胚胎着床数降低(P<0.05),子宫内膜厚度及腺体数量下降,CD49b+uNK细胞及PP14表达降低,血清E2和P水平及外周血CD8+T细胞水平降低(P<0.05)。与模型组比较,补肾组小鼠妊娠率和平均胚胎着床数增加(P<0.05);子宫内膜组织结构改善,厚度及腺体数量增加,CD49b+uNK细胞及PP14表达增加,血清E2和P水平及外周血CD8+T细胞水平升高(P<0.05)。各组小鼠阴栓率和外周血CD4+T细胞水平无统计学差异(P>0.05)。结论补肾助孕方通过调控WOI子宫内膜免疫因素及容受性改善超促排卵小鼠胚胎发育和着床。 展开更多
关键词 补肾助孕方 超促排卵 子宫内膜 免疫 胚胎植入
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