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小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究
1
作者
杨建岭
姚智燕
+1 位作者
杨艺红
魏林
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期120-123,共4页
目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-mIL-23上分别扩增获得IL-23的两亚基p19和p40,并通...
目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-mIL-23上分别扩增获得IL-23的两亚基p19和p40,并通过重叠PCR(over-lap PCR)技术获得含有连接子的p1940,构建pPICZαA-IL-23重组质粒;采用甲醇诱导毕赤酵母表达重组蛋白,MTT方法检测诱导表达蛋白的促淋巴细胞增殖情况。结果:SDS-PAGE分析显示在诱导24小时和36小时后的上清及24～96小时的沉淀中均可以检测到约70 kD的诱导条带。Western blot印迹法证实了重组蛋白为特异性蛋白。上清和沉淀中表达的重组蛋白IL-23能促进外周血单个核细胞的增殖,OD570 nm分别达到(0.235±0.029)和(0.216±0.035),而未刺激的对照组只有(0.135±0.008)和(0.164±0.017)。结论:成功构建出mIL-23的酵母表达载体,诱导产生的蛋白可以明显地促进外周血单个核细胞的增殖。
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关键词
白细胞介素23
克隆表达
毕赤酵母
生物活性
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题名
小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究
1
作者
杨建岭
姚智燕
杨艺红
魏林
机构
河北
医科
大学
免疫学教研室
河北师范大学生命科学学院分子细胞研究室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期120-123,共4页
文摘
目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-mIL-23上分别扩增获得IL-23的两亚基p19和p40,并通过重叠PCR(over-lap PCR)技术获得含有连接子的p1940,构建pPICZαA-IL-23重组质粒;采用甲醇诱导毕赤酵母表达重组蛋白,MTT方法检测诱导表达蛋白的促淋巴细胞增殖情况。结果:SDS-PAGE分析显示在诱导24小时和36小时后的上清及24～96小时的沉淀中均可以检测到约70 kD的诱导条带。Western blot印迹法证实了重组蛋白为特异性蛋白。上清和沉淀中表达的重组蛋白IL-23能促进外周血单个核细胞的增殖,OD570 nm分别达到(0.235±0.029)和(0.216±0.035),而未刺激的对照组只有(0.135±0.008)和(0.164±0.017)。结论:成功构建出mIL-23的酵母表达载体,诱导产生的蛋白可以明显地促进外周血单个核细胞的增殖。
关键词
白细胞介素23
克隆表达
毕赤酵母
生物活性
Keywords
IL-23
Gene clone and exprssion
Pichia
Bioactivity
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究
杨建岭
姚智燕
杨艺红
魏林
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
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