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猪流行性腹泻病毒经典毒株与变异毒株双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 苏金辉 邓云贵 夏冰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期89-97,共9页
建立一种可以快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株和变异毒株的TaqMan双重实时荧光定量PCR。参照GenBank中收录的36株经典毒株和变异毒株的基因序列,设计特异性引物和探针优化反应条件。进行双重实时荧光定量PCR的特异性试验、... 建立一种可以快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株和变异毒株的TaqMan双重实时荧光定量PCR。参照GenBank中收录的36株经典毒株和变异毒株的基因序列,设计特异性引物和探针优化反应条件。进行双重实时荧光定量PCR的特异性试验、灵敏性试验和重复性试验,并绘制标准曲线。本研究建立的方法和国家标准方法同时对临床收集的样品进行检测。通过条件优化,该方法的最佳退火温度是60℃,最佳引物浓度为0.5μmol/L,最佳探针浓度为0.5μmol/L。本方法对猪场常见疫病病毒PRRSV、ASFV、CSFV、PCV2、PCV3、PRV、PPV、TGEV均无交叉反应,特异性强。对N基因和S基因的检测下限分别为1 copies/μL和10 copies/μL。以N基因和S基因重组质粒构建的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数(R^(2))均为0.999。组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。临床样品检测结果为阳性率17.09%,与国标推荐的检测方法阳性率一致;变异毒株阳性率80%,经典毒株阳性率20%,与扩增S基因测序比对后结果一致。本研究建立一种具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点的双重实时荧光定量PCR方法,对PED风险预警及毒株分型具有重要意义。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 变异毒株 实时荧光定量PCR
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高职畜牧兽医专业学生典型就业案例分析 被引量:2
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作者 王洪芳 王俊萍 +2 位作者 张殿新 冀建军 杜超 《山东畜牧兽医》 2018年第2期67-68,共2页
我国是农业大国,党和政府十分关心农业,农村和农民问题,中国的强盛离不开农村的发展,大力发展畜牧业是农村三大出路之一.发展畜牧业,可以带动加工业,促进种植业,解决农村劳动力就业.现代畜牧业是一个朝阳产业,
关键词 劳动力就业 畜牧兽医专业 案例分析 现代畜牧业 学生 高职 农民问题 朝阳产业
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猪流行性腹泻病毒HB/HEBEU/2020株全基因组遗传变异与重组分析 被引量:2
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作者 翟新国 郑培培 +4 位作者 苏金辉 李庆阳 焦贺静 张若冰 李朋辉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3140-3150,共11页
【目的】了解猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的基因组特征及变异规律。【方法】以3只发病仔猪小肠病料作为模板,采用RT-PCR技术检测病原。以检测阳性的肝脏组织RNA为模板,进行RT-PCR,分段扩增PEDV全基因组,使... 【目的】了解猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的基因组特征及变异规律。【方法】以3只发病仔猪小肠病料作为模板,采用RT-PCR技术检测病原。以检测阳性的肝脏组织RNA为模板,进行RT-PCR,分段扩增PEDV全基因组,使用DNAStar软件对PEDV基因组测序结果进行剪辑、拼接和相似性分析,利用Mega X 10.0.5软件对PEDV基因组和S基因进行遗传进化分析;利用RDP4软件对PEDV基因组进行重组分析。【结果】PCR检测结果表明,3只病仔猪的小肠组织均检测到PEDV阳性。采用RT-PCR分段扩增成功获得1株PEDV全基因组序列,命名为HB/HEBEU/2020株,基因组大小为28038 bp,含有7个开放阅读框,从5′到3′依次为复制酶1a基因、复制酶1b基因、S基因、ORF3基因、E基因、M基因和N基因。相似性分析结果显示,HB/HEBEU/2020与SNJ-P、USA/Colorado/2013和HB2018等变异毒株全基因组和S基因的相似性均较高,分别为97.8%~99.3%和95.7%~98.8%,在所有市售疫苗株中,与变异型疫苗株AJ1102毒株全基因组和S基因的相似性分别为98.3%和97.3%;遗传进化分析结果显示,21株PEDV可划分为G1群和G2群2个分支,G1群进一步分化为G1a亚群和G1b亚群,G2群进一步分化为G2a亚群和G2b亚群,HB/HEBEU/2020属于G2a亚群。在G2群内,所有流行株均为2010年后出现,HB/HEBEU/2020与市售疫苗株AJ1102遗传距离较近,其次是LW/L,与CV777和attenuated CV777株遗传距离较远;经重组分析,HB/HEBEU/2020基因组可能为重组毒株,存在3个潜在的重组事件,重组事件1~3的断点分别为15918—22119、100—734和2214—2729 bp,其中重组事件1和2发生概率较大。【结论】HB/HEBEU/2020为1株变异型PEDV,与以CV777为代表的经典毒株亲缘关系较远,与2010年后中国发生的变异型毒株亲缘性较近,并且存在潜在重组事件。本研究结果可为调研中国当前PEDV进化和变异提供重要资料,为遏制PEDV蔓延与进化、制定合理防控方案提供理论和现实依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 全基因组 遗传变异 重组分析
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