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流感嗜血杆菌外膜蛋白P6分子生物学及免疫学研究进展 被引量:2
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作者 何多姣 李双霞 +1 位作者 贾天军 张玉妥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第14期2680-2681,共2页
流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)根据有无荚膜分为荚膜型和无荚膜型(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)两类,荚膜型又可分为a~f六个血清型。以往认为只有荚膜型菌株可以致病,以b型(Hib)侵袭力最强,但近来... 流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)根据有无荚膜分为荚膜型和无荚膜型(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)两类,荚膜型又可分为a~f六个血清型。以往认为只有荚膜型菌株可以致病,以b型(Hib)侵袭力最强,但近来研究显示,随着Hib荚膜多糖疫苗的应用.目前在Hi引起的感染中最多见的是NTHi.占70%以上,尤其是在呼吸道的感染中NTHi已成为主要致病菌,由其引起的呼吸道继发感染加重了感染症状, 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 分子生物学 外膜蛋白 免疫学 荚膜多糖疫苗 NTHI 感染症状 继发感染
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微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备
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作者 陈恒鑫 贾晓晖 +3 位作者 李雅惠 周艳 贾天军 李萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1011-1017,共7页
目的对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析,进而构建其重组表达载体,并制备单克隆抗体(mAb)。方法利用生物信息学分析软件,对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导... 目的对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析,进而构建其重组表达载体,并制备单克隆抗体(mAb)。方法利用生物信息学分析软件,对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导并纯化蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗UP3-RS02445 mAb,分别使用Western blot法和ELISA方法检测mAb的特异性和效价。使用mAb亚型测定试纸条检测mAb的重链亚型和轻链亚型。结果生物信息学分析表明,UP3-RS02445蛋白由201个氨基酸组成,无跨膜结构域和信号肽,属于非分泌蛋白。成功构建UP3-RS02445重组表达载体并能够诱导重组蛋白的大量表达,细胞融合后经ELISA和Western blot法筛选获得两株分泌UP3-RS02445 mAb的杂交瘤细胞(A1H5和A4E2)。ELISA结果显示mAb的效价为1∶2560,Western blot法和免疫荧光技术结果均表明mAb可与UP3-RS02445蛋白特异性结合。两株mAb的重链亚型为IgG1,轻链亚型为Kappa型。结论成功制备了特异性强、效价高的UP3-RS02445 mAb,为后续UP诊断试剂的开发及蛋白功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 微小脲原体(UP) 生物信息学 原核表达 蛋白纯化 单克隆抗体
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的保护性研究 被引量:3
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作者 何多姣 张彦霞 +3 位作者 刘雪晴 李双霞 贾天军 张玉妥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期2118-2121,共4页
目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小... 目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平;CCK-8法分析脾淋巴细胞增殖情况,并建立小鼠NTHi感染模型,检测小鼠鼻咽部灌洗液NTHi数目变化;HE染色法分析鼻黏膜病理变化。结果:pcDNA3.1/HisA-P6在HeLa细胞中有目的蛋白的表达,免疫后pcDNA3.1/HisA-P6组小鼠脾淋巴细胞产生的IFN-γ及刺激指数均高于pcDNA3.1/HisA、PBS对照组(P<0.05),而IL-4的表达无差异;P6组鼻咽部NTHi清除率也显著高于对照组(P<0.01);病理显示P6组小鼠鼻黏膜组织结构基本正常,而对照组鼻黏膜紊乱、脱落。讨论:P6核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗NTHi保护效应,其可能的保护机制包括细胞免疫、体液免疫及黏膜免疫。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 核酸疫苗 保护性免疫
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流感嗜血杆菌生物膜形成对抗生素的耐药性变化 被引量:3
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作者 高雪 尚小领 +3 位作者 乔海霞 张彦霞 张存晖 张玉妥 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期682-685,共4页
目的体外建立流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)生物膜(BF),观察细菌形成BF后对抗生素敏感性的变化。方法从腺样体肥大患儿的离体腺样体组织中分离30株流感嗜血杆菌,并以96微孔板培养,采用结晶紫染色和扫描电镜(SEM)鉴定BF形成;分... 目的体外建立流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)生物膜(BF),观察细菌形成BF后对抗生素敏感性的变化。方法从腺样体肥大患儿的离体腺样体组织中分离30株流感嗜血杆菌,并以96微孔板培养,采用结晶紫染色和扫描电镜(SEM)鉴定BF形成;分别测定氨苄西林(AMP)、头孢曲松(CRO)、左氧沙星(LVFX)和阿奇霉素(AZM)4种抗菌药物浮游菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)以及生物膜菌最低生物膜清除浓度(MBEC)。结果 30株流感嗜血杆菌体外都有不同程度BF形成。当BF形成后,不同抗生素的MBEC较其MIC、MBC增高程度大小不一,差异有统计学意义(MBEC/MBC:H=91.54,MBEC/MIC:H=87.91;P均<0.001)。AMP的MBEC最高,可高达MBC和MIC的100多倍;CRO的MBEC较MBC和MIC可增高数十倍,LVFX和AZM对BF的MBEC最接近于MBC和MIC。结论 BF形成后,流感嗜血杆菌耐药性增强;氟喹诺酮类LVFX和大环内酯类AZM对流感嗜血杆菌BF作用相对良好。 展开更多
关键词 流感嗜血杆菌 生物膜 最低生物膜清除浓度 抗生素
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刚地弓形虫棒状体蛋白18及其作为基因工程疫苗候选分子研究进展 被引量:1
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作者 刘荣荣 张晓磊 张进顺 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期104-107,共4页
刚地弓形虫棒状体蛋白18(rhoptry protein18,ROP18)是由棒状体分泌的、属于棒状体蛋白2家族的一员,具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,在虫体入侵和毒力的发挥方面起着重要作用。论文就ROP18蛋白的结构、毒力和作用机制及其作为基因疫苗候选分... 刚地弓形虫棒状体蛋白18(rhoptry protein18,ROP18)是由棒状体分泌的、属于棒状体蛋白2家族的一员,具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,在虫体入侵和毒力的发挥方面起着重要作用。论文就ROP18蛋白的结构、毒力和作用机制及其作为基因疫苗候选分子的研究现状进行综述。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 棒状体蛋白18 毒力 作用机制 基因疫苗
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甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)在HeLa细胞的表达
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作者 李婷 李萍 +3 位作者 贾天军 贾晓晖 赵霞 程永婷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期49-53,共5页
目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染H... 目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染He La细胞,并采用G418筛选已获得整合有pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在He La细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平。结果构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的He La细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白。结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19 真核表达 转染 筛选
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