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甜菜夜蛾羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及序列分析
被引量：
7
1
作者
张霞
郭巍
+1 位作者
李国勋
宋水山
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期681-688,共8页
羧酸酯酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一,与昆虫抗药性产生相关。利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni(Hübner)肠粘蛋白多克隆抗体免疫筛选甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)中肠cDNA表达文库,得到编码羧酸酯酶的全长cDNA克隆。该cDN...
羧酸酯酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一,与昆虫抗药性产生相关。利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni(Hübner)肠粘蛋白多克隆抗体免疫筛选甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)中肠cDNA表达文库,得到编码羧酸酯酶的全长cDNA克隆。该cDNA克隆全长1812bp(GenBank登录号EF580101),开放阅读框长1605bp,编码535个氨基酸。该蛋白活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser186,Glu319和His443,3个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族(EC:3.1.1.-)。将该基因与pQE30载体重组,经IPTG诱导,spot-blot鉴定,蛋白获得了表达;以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为1.3nmol/100μL酶液。
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关键词
甜菜夜蛾
CDNA表达文库
羧酸酯酶
表达
spot-blot鉴定
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职称材料
美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定
被引量：
5
2
作者
闫晓平
赵丹
+3 位作者
孙晓彤
郭巍
李少雅
李景
《中国生物防治学报》
CSCD
北大核心
2015年第3期423-427,共5页
利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因Hc CDA1。将该基因分别在大肠杆菌BL21和毕赤酵母细胞Pichia pastoris GS115表达。经诱导表达后,Western blot分析表明Hc CDA1在大肠杆菌中成功表达61.8...
利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因Hc CDA1。将该基因分别在大肠杆菌BL21和毕赤酵母细胞Pichia pastoris GS115表达。经诱导表达后,Western blot分析表明Hc CDA1在大肠杆菌中成功表达61.8 k D的蛋白,符合预期大小;在毕赤酵母GS115中成功表达80 k D蛋白。酶活性试验显示酵母细胞中表达的重组蛋白酶活力为1.685 U/m L。本研究利用毕赤酵母成功表达具有酶活力的重组Hc CDA1蛋白,为进一步明确该蛋白的生理功能提供条件。
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关键词
美国白蛾
几丁质脱乙酰酶
表达
几丁质脱乙酰酶活性
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职称材料
题名
甜菜夜蛾羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及序列分析
被引量：
7
1
作者
张霞
郭巍
李国勋
宋水山
机构
河北农业大学生命科学学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心
河北省
生物
研究所
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期681-688,共8页
基金
国家重点基础研究发展规划(“973”计划)项目(2003CB114201)
河北省自然科学基金项目(C2007000542)
文摘
羧酸酯酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一,与昆虫抗药性产生相关。利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni(Hübner)肠粘蛋白多克隆抗体免疫筛选甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)中肠cDNA表达文库,得到编码羧酸酯酶的全长cDNA克隆。该cDNA克隆全长1812bp(GenBank登录号EF580101),开放阅读框长1605bp,编码535个氨基酸。该蛋白活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser186,Glu319和His443,3个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族(EC:3.1.1.-)。将该基因与pQE30载体重组,经IPTG诱导,spot-blot鉴定,蛋白获得了表达;以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为1.3nmol/100μL酶液。
关键词
甜菜夜蛾
CDNA表达文库
羧酸酯酶
表达
spot-blot鉴定
Keywords
Spodoptera exigua
cDNA expression library
carboxylesterase
expression
spot-blot analysis
分类号
Q965.9 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定
被引量：
5
2
作者
闫晓平
赵丹
孙晓彤
郭巍
李少雅
李景
机构
河北农业大学生命科学学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心
北京农
学院
植物
科学
技术
学院
出处
《中国生物防治学报》
CSCD
北大核心
2015年第3期423-427,共5页
基金
国家自然科学基金(31471775)
现代农业产业技术体系(CARS-14)
北京农学院促进人才培养综合改革专项计划(BNRC&CC201404)
文摘
利用RACE-PCR方法,扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury几丁质脱乙酰酶基因Hc CDA1。将该基因分别在大肠杆菌BL21和毕赤酵母细胞Pichia pastoris GS115表达。经诱导表达后,Western blot分析表明Hc CDA1在大肠杆菌中成功表达61.8 k D的蛋白,符合预期大小;在毕赤酵母GS115中成功表达80 k D蛋白。酶活性试验显示酵母细胞中表达的重组蛋白酶活力为1.685 U/m L。本研究利用毕赤酵母成功表达具有酶活力的重组Hc CDA1蛋白,为进一步明确该蛋白的生理功能提供条件。
关键词
美国白蛾
几丁质脱乙酰酶
表达
几丁质脱乙酰酶活性
Keywords
Hyphantria cunea
chitin deacetylase
expression
chitin deacetylase activity
分类号
S433.4 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甜菜夜蛾羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及序列分析
张霞
郭巍
李国勋
宋水山
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
7
在线阅读
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职称材料
2
美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定
闫晓平
赵丹
孙晓彤
郭巍
李少雅
李景
《中国生物防治学报》
CSCD
北大核心
2015
5
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职称材料
已选择
0
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