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VIGS技术在棉花全生长周期中的应用拓展研究
1
作者
丁若羲
豆硕
+6 位作者
安叶芝
孔文慧
郭文静
张冬梅
王省芬
马峙英
吴立柱
《生物技术通报》
北大核心
2025年第2期58-64,共7页
【目的】突破棉花VIGS技术仅应用于棉花子叶期的时间限制瓶颈,弥补棉花生殖生长时期VIGS技术的应用缺陷。【方法】以农大棉8号为材料,以GhCLA1为验证基因,对4日龄棉苗(子叶未展开)进行茎注射,对7日龄棉苗(子叶完全展开)进行子叶注射,对...
【目的】突破棉花VIGS技术仅应用于棉花子叶期的时间限制瓶颈,弥补棉花生殖生长时期VIGS技术的应用缺陷。【方法】以农大棉8号为材料,以GhCLA1为验证基因,对4日龄棉苗(子叶未展开)进行茎注射,对7日龄棉苗(子叶完全展开)进行子叶注射,对开花期和结铃期的棉花植株分别在茎节间、新生果枝基部、新生叶片等组织部位进行VIGS注射,利用表型观察和RT-PCR技术验证目的基因的沉默效率和持续时间。【结果】4日龄棉花幼苗经茎VIGS注射后叶片白化率为80%,7日龄棉花幼苗经子叶VIGS注射后叶片白化率为100%,开花期和结铃期的棉花植株经新生果枝基部VIGS注射后白化率分别为90%和68.75%。【结论】获得了稳定的棉花全生长周期的VIGS应用技术体系。
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关键词
基因沉默
棉花
子叶
茎
生长期
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职称材料
陆地棉抗黄萎病基因GhENODL6互作蛋白筛选
2
作者
郑鑫鑫
张艳
+4 位作者
解美霞
张冬梅
吴立强
王省芬
杨君
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第3期173-178,共6页
研究发现陆地棉ENODL6基因具有抗黄萎病功能。为进一步揭示其在棉花抗黄萎病过程中发挥的作用,通过Nimble Cloning技术将GhENODL6插入酵母表达载体pNC-GBKT7,构建了重组质粒pNC-GBKT7-ENODL6。重组质粒转入酵母菌Y2HGold后可在DDO培养...
研究发现陆地棉ENODL6基因具有抗黄萎病功能。为进一步揭示其在棉花抗黄萎病过程中发挥的作用,通过Nimble Cloning技术将GhENODL6插入酵母表达载体pNC-GBKT7,构建了重组质粒pNC-GBKT7-ENODL6。重组质粒转入酵母菌Y2HGold后可在DDO培养基上正常生长,但不能生长于QDO/X/A培养基,表明GhENODL6蛋白对酵母宿主无毒害作用,没有自激活活性。将携带pNC-GBKT7-ENODL6诱饵载体的Y2HGold酵母菌与cDNA文库进行杂交筛选,结果获得一个能够显示蓝色的菌落。通过PCR扩增,在蓝色酵母菌中获得一段526 bp的非载体插入片段,与陆地棉基因组内基因WRKY47序列高度一致。通过同源扩增,从陆地棉中克隆到WRKY47开放读码框,全长1 587 bp,编码528个氨基酸残基。再次利用酵母双杂交技术确认了WRKY47与GhENODL6之间存在互作关系。综上,构建了重组载体pNC-GBKT7-ENODL6,并鉴定到与GhENODL6互作的蛋白WRKY47。
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关键词
陆地棉
黄萎病
酵母双杂交
互作蛋白
筛选
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职称材料
陆地棉CRK基因家族抗黄萎病功能分析
3
作者
裴洪伟
索佳慧
+3 位作者
武海娜
孙正文
张艳
杨君
《北方农业学报》
2024年第6期1-12,共12页
【目的】鉴定分析陆地棉(Gossypium hirsutum)富含半胱氨酸类受体激酶(CRK)基因家族成员,为棉花抗黄萎病育种提供基因资源和理论依据。【方法】根据全基因组测序结果,利用生物信息学技术在陆地棉农大棉8号基因组中鉴定GhCRK基因家族,并...
【目的】鉴定分析陆地棉(Gossypium hirsutum)富含半胱氨酸类受体激酶(CRK)基因家族成员,为棉花抗黄萎病育种提供基因资源和理论依据。【方法】根据全基因组测序结果,利用生物信息学技术在陆地棉农大棉8号基因组中鉴定GhCRK基因家族,并进行蛋白理化性质、染色体定位和遗传进化分析。基于基因表达数据挖掘潜在的黄萎病抗性基因,并通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术对候选基因进行抗病功能鉴定。【结果】在陆地棉农大棉8号基因组中共鉴定到50个GhCRKs,分布在14条染色体上,编码蛋白长度为390~1 774个氨基酸残基,分子量为43.15~196.66 kDa,平均等电点为6.94,大多定位在细胞质膜。蛋白结构域分析显示,90%的GhCRKs(45个)含有2个Stress-antifung结构域。在GhCRKs启动子区鉴定到植物激素顺式响应元件茉莉酸甲酯、脱落酸、水杨酸等7类。筛选出14个受大丽轮枝菌诱导发生显著上调表达的GhCRKs,且GhCRK08和GhCRK33沉默后,陆地棉黄萎病症状更严重、病情指数显著增高。【结论】陆地棉农大棉8号基因组中存在大量的CRKs,其中14个为潜在重要的黄萎病抗性候选基因,进一步明确了GhCRK08和GhCRK33的抗病功能。
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关键词
陆地棉
富含半胱氨酸类受体激酶(CRK)基因家族
黄萎病
生物信息学
基因功能
基因表达
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职称材料
题名
VIGS技术在棉花全生长周期中的应用拓展研究
1
作者
丁若羲
豆硕
安叶芝
孔文慧
郭文静
张冬梅
王省芬
马峙英
吴立柱
机构
河北农业大学河北省棉花产业协同创新中心
华北作物改良与调控国家重点实验室
出处
《生物技术通报》
北大核心
2025年第2期58-64,共7页
基金
国家自然科学基金项目(32072109)
河北省中央引导地方科技发展资金项目(236Z2908G)。
文摘
【目的】突破棉花VIGS技术仅应用于棉花子叶期的时间限制瓶颈,弥补棉花生殖生长时期VIGS技术的应用缺陷。【方法】以农大棉8号为材料,以GhCLA1为验证基因,对4日龄棉苗(子叶未展开)进行茎注射,对7日龄棉苗(子叶完全展开)进行子叶注射,对开花期和结铃期的棉花植株分别在茎节间、新生果枝基部、新生叶片等组织部位进行VIGS注射,利用表型观察和RT-PCR技术验证目的基因的沉默效率和持续时间。【结果】4日龄棉花幼苗经茎VIGS注射后叶片白化率为80%,7日龄棉花幼苗经子叶VIGS注射后叶片白化率为100%,开花期和结铃期的棉花植株经新生果枝基部VIGS注射后白化率分别为90%和68.75%。【结论】获得了稳定的棉花全生长周期的VIGS应用技术体系。
关键词
基因沉默
棉花
子叶
茎
生长期
Keywords
VIGS
cotton
cotyledon
stem
growing period
分类号
S562 [农业科学—作物学]
在线阅读
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职称材料
题名
陆地棉抗黄萎病基因GhENODL6互作蛋白筛选
2
作者
郑鑫鑫
张艳
解美霞
张冬梅
吴立强
王省芬
杨君
机构
河北农业大学
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024年第3期173-178,共6页
基金
河北省自然科学基金项目(C2022204001)
河北省现代农业产业技术体系专项资金(HBCT2024100201)。
文摘
研究发现陆地棉ENODL6基因具有抗黄萎病功能。为进一步揭示其在棉花抗黄萎病过程中发挥的作用,通过Nimble Cloning技术将GhENODL6插入酵母表达载体pNC-GBKT7,构建了重组质粒pNC-GBKT7-ENODL6。重组质粒转入酵母菌Y2HGold后可在DDO培养基上正常生长,但不能生长于QDO/X/A培养基,表明GhENODL6蛋白对酵母宿主无毒害作用,没有自激活活性。将携带pNC-GBKT7-ENODL6诱饵载体的Y2HGold酵母菌与cDNA文库进行杂交筛选,结果获得一个能够显示蓝色的菌落。通过PCR扩增,在蓝色酵母菌中获得一段526 bp的非载体插入片段,与陆地棉基因组内基因WRKY47序列高度一致。通过同源扩增,从陆地棉中克隆到WRKY47开放读码框,全长1 587 bp,编码528个氨基酸残基。再次利用酵母双杂交技术确认了WRKY47与GhENODL6之间存在互作关系。综上,构建了重组载体pNC-GBKT7-ENODL6,并鉴定到与GhENODL6互作的蛋白WRKY47。
关键词
陆地棉
黄萎病
酵母双杂交
互作蛋白
筛选
Keywords
Gossypium hirsutum
Verticillium wilt
Yeast two-hybrid
Interaction protein
Screen
分类号
S435.62 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
陆地棉CRK基因家族抗黄萎病功能分析
3
作者
裴洪伟
索佳慧
武海娜
孙正文
张艳
杨君
机构
河北农业大学河北省棉花产业协同创新中心
出处
《北方农业学报》
2024年第6期1-12,共12页
基金
国家重点研发计划项目(2022YFF1001403)
河北省自然科学基金项目(C2022204001)
+1 种基金
河北省现代农业产业技术体系专项资金(HBCT2024100201)
河北农业大学大学生创新创业训练基金项目(2022196)。
文摘
【目的】鉴定分析陆地棉(Gossypium hirsutum)富含半胱氨酸类受体激酶(CRK)基因家族成员,为棉花抗黄萎病育种提供基因资源和理论依据。【方法】根据全基因组测序结果,利用生物信息学技术在陆地棉农大棉8号基因组中鉴定GhCRK基因家族,并进行蛋白理化性质、染色体定位和遗传进化分析。基于基因表达数据挖掘潜在的黄萎病抗性基因,并通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术对候选基因进行抗病功能鉴定。【结果】在陆地棉农大棉8号基因组中共鉴定到50个GhCRKs,分布在14条染色体上,编码蛋白长度为390~1 774个氨基酸残基,分子量为43.15~196.66 kDa,平均等电点为6.94,大多定位在细胞质膜。蛋白结构域分析显示,90%的GhCRKs(45个)含有2个Stress-antifung结构域。在GhCRKs启动子区鉴定到植物激素顺式响应元件茉莉酸甲酯、脱落酸、水杨酸等7类。筛选出14个受大丽轮枝菌诱导发生显著上调表达的GhCRKs,且GhCRK08和GhCRK33沉默后,陆地棉黄萎病症状更严重、病情指数显著增高。【结论】陆地棉农大棉8号基因组中存在大量的CRKs,其中14个为潜在重要的黄萎病抗性候选基因,进一步明确了GhCRK08和GhCRK33的抗病功能。
关键词
陆地棉
富含半胱氨酸类受体激酶(CRK)基因家族
黄萎病
生物信息学
基因功能
基因表达
Keywords
Gossypium hirsutum
Cysteine-rich receptor-like kinase(CRK)gene family
Verticillium wilt
Bioinformatics
Gene function
Gene expression
分类号
S562 [农业科学—作物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
VIGS技术在棉花全生长周期中的应用拓展研究
丁若羲
豆硕
安叶芝
孔文慧
郭文静
张冬梅
王省芬
马峙英
吴立柱
《生物技术通报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
陆地棉抗黄萎病基因GhENODL6互作蛋白筛选
郑鑫鑫
张艳
解美霞
张冬梅
吴立强
王省芬
杨君
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2024
0
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下载PDF
职称材料
3
陆地棉CRK基因家族抗黄萎病功能分析
裴洪伟
索佳慧
武海娜
孙正文
张艳
杨君
《北方农业学报》
2024
0
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