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叶锈菌与小麦互作过程中β-1,3-葡聚糖酶基因的表达分析 被引量:5
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作者 高琳 栗小英 +2 位作者 张艳俊 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期7-12,共6页
β-1,3-葡聚糖酶是一类以基因家族形式存在的重要病程相关蛋白(Pathogenesis-related proteins,PR),即PR2。本研究采用RT-PCR方法在小麦抗叶锈病近等基因系材料TcLr19中获得11个PR2基因,暂命名为TcLr19PR2-1~11,其中具有完整开放阅... β-1,3-葡聚糖酶是一类以基因家族形式存在的重要病程相关蛋白(Pathogenesis-related proteins,PR),即PR2。本研究采用RT-PCR方法在小麦抗叶锈病近等基因系材料TcLr19中获得11个PR2基因,暂命名为TcLr19PR2-1~11,其中具有完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)的基因包含1 005bp,编码334个氨基酸残基。Blast分析显示,TcLr19PR2属于糖基水解酶第17家族(GHF17),且均为碱性蛋白。半定量RTPCR分析表明,该基因表达明显受小麦叶锈菌诱导,在非亲和组合中表达量高于亲和组合,同时明确其表达受脱落酸(Abscisic acid,ABA)和水杨酸(Salicylic acid,SA)逆境信号分子的诱导。本研究构建了TcLr19PR2基因的原核表达载pEASY-PR2,在大肠杆菌中高效表达分子量约为30kDa的融合蛋白,最佳诱导条件为:28℃,0.3mmol/L IPTG。说明TcLr19PR2基因可能在小麦抗叶锈病防御反应中发挥作用。为明确PR2基因在叶锈菌与TcLr19小麦互作体系中的功能奠定了基础,为培育抗叶锈病小麦品种提供了理论和实践基础。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 病程相关蛋白 表达分析 原核表达
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TcLr19PR1、TcLr19PR2和TaLr19TLP1的酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 王菲 张艳俊 +3 位作者 梁芳 张家瑞 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期47-51,共5页
在前期研究的基础上,将成功克隆得到3个病程相关蛋白PR1、PR2和PR5的序列,分别命名为TcLr19PR1、TcLr19PR2和TaLr19TLP1。将这3个基因分别连接到酵母双杂交诱饵载体pGBKT-7上,并转化到感受态菌株Y2HGold中,检测其毒性和自激活性。结果显... 在前期研究的基础上,将成功克隆得到3个病程相关蛋白PR1、PR2和PR5的序列,分别命名为TcLr19PR1、TcLr19PR2和TaLr19TLP1。将这3个基因分别连接到酵母双杂交诱饵载体pGBKT-7上,并转化到感受态菌株Y2HGold中,检测其毒性和自激活性。结果显示,成功构建了包含目的基因的诱饵重组载体pGBKT-7-TcLr19PR1、pGBKT-7-TcLr19PR2和pGBKT-7-TaLr19TLP1;将转化产物涂布于SD/-Trp/X平板上,生长良好,并出现阳性克隆;毒性检测中,将3个诱饵重组载体与空载体在SD/-Trp液体培养基中的生长情况进行对比,发现诱饵无毒性;自激活检测试验中,重组载体无法在二缺、三缺和四缺培养基中正常生长,证明诱饵无自激活性。因此,本研究成功构建的3个诱饵重组载体可用于3个PR蛋白互作蛋白的筛选,为进一步研究其在小麦与叶锈菌互作中的分子机理奠定基础。 展开更多
关键词 病程相关蛋白 酵母双杂交 诱饵载体 自激活检测 毒性检测
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