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猪IL-15单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
1
作者
王飞燕
刘超凡
+5 位作者
张亚楠
周晓甜
任静
袁晨
李潭清
宋勤叶
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第7期3442-3452,共11页
旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小...
旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小鼠脾细胞,将脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,并对其分泌的IL-15单克隆抗体进行鉴定;然后基于单克隆抗体建立IL-15夹心ELISA方法。结果显示:获得9株分泌抗IL-15 McAb的杂交瘤细胞(1E8、1F4、2D3、2C10、2F3、2D10、3F4、3D4、3D5),分泌的抗体均为IgG2bκ型。以制备的单抗2D10和2C10分别为捕获抗体及酶标抗体建立的夹心ELISA最低可检测31.25 ng·mL^(-1)的IL-15蛋白,与其它细胞因子或蛋白(IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、Gzms-B、IFN-γ、TNF-α)无交叉反应,批内和批间重复的变异系数分别为2.56%和3.39%。该夹心ELISA可定量检测血清、组织液和细胞培养物等样品中的IL-15。综上,成功制备了猪IL-15单克隆抗体,建立了定量检测IL-15的双抗体夹心ELISA方法,为IL-15相关研究提供了重要工具。
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关键词
猪IL-15
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
定量检测
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职称材料
非洲猪瘟病毒全长与截短p72蛋白的抗原性比较
被引量：
2
2
作者
张文燕
王亚文
+6 位作者
冯亚文
滕召剑
李潭清
董炜
刘涛
宋勤叶
任玉红
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期1182-1191,共10页
比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)全长p72与截短p72蛋白(p72s)的抗原性,为ASFV特异性抗体检测技术研究提供试验依据。应用大肠杆菌表达系统表达p72和p72s蛋白,应用Western blot和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定...
比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)全长p72与截短p72蛋白(p72s)的抗原性,为ASFV特异性抗体检测技术研究提供试验依据。应用大肠杆菌表达系统表达p72和p72s蛋白,应用Western blot和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定表达的蛋白,分析蛋白的抗原表位;用纯化的重组全长和截短p72蛋白分别免疫小鼠,比较其免疫原性;通过ELISA和Western blot,评价重组p72和p72s蛋白与ASFV阳性血清的免疫反应性。结果:重组p72和p72s蛋白均以包涵体形式表达,相对分子质量分别约为76和42 ku,与预期大小相符;表达蛋白的酶解肽段对p72和p72s蛋白推测氨基酸序列的覆盖度分别为89.3%和88.39%,两者分别包含27和17个抗原表位;用p72与p72s蛋白免疫小鼠3次后,血清特异性抗体效价分别为1∶200~1∶25600和1∶12800~1∶409600;基于重组p72与p72s蛋白的ELISA从108份猪血清中分别检出78份(72.2%)和85份(78.7%)阳性血清,两者的检测结果具有很好的一致性(kappa=0.826,P=0.016);经Western blot检测的10份ASFV抗体阳性血清中有7份与p72蛋白反应,全部与p72s蛋白反应。截短p72蛋白比全长p72蛋白的抗原性好,更适合用于ASFV抗体检测。
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关键词
非洲猪瘟病毒
p72蛋白
截短p72蛋白
原核表达
抗原性
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职称材料
题名
猪IL-15单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
1
作者
王飞燕
刘超凡
张亚楠
周晓甜
任静
袁晨
李潭清
宋勤叶
机构
河北农业大学动物医学院&河北省兽医生物技术创新中心
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第7期3442-3452,共11页
基金
河北农业大学科研发展基金计划项目(JY2022025)
河北省高等学校科学研究项目(QN2022046)。
文摘
旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小鼠脾细胞,将脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,并对其分泌的IL-15单克隆抗体进行鉴定;然后基于单克隆抗体建立IL-15夹心ELISA方法。结果显示:获得9株分泌抗IL-15 McAb的杂交瘤细胞(1E8、1F4、2D3、2C10、2F3、2D10、3F4、3D4、3D5),分泌的抗体均为IgG2bκ型。以制备的单抗2D10和2C10分别为捕获抗体及酶标抗体建立的夹心ELISA最低可检测31.25 ng·mL^(-1)的IL-15蛋白,与其它细胞因子或蛋白(IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、Gzms-B、IFN-γ、TNF-α)无交叉反应,批内和批间重复的变异系数分别为2.56%和3.39%。该夹心ELISA可定量检测血清、组织液和细胞培养物等样品中的IL-15。综上,成功制备了猪IL-15单克隆抗体,建立了定量检测IL-15的双抗体夹心ELISA方法,为IL-15相关研究提供了重要工具。
关键词
猪IL-15
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
定量检测
Keywords
porcine IL-15
monoclonal antibody
double-antibody sandwich ELISA
quantitative determination
分类号
R446.61 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
非洲猪瘟病毒全长与截短p72蛋白的抗原性比较
被引量：
2
2
作者
张文燕
王亚文
冯亚文
滕召剑
李潭清
董炜
刘涛
宋勤叶
任玉红
机构
河北农业大学动物医学院&河北省兽医生物技术创新中心
河北省
兽药监察所
顺平县
动物
疫病预防与控制
中心
瑞普
生物
药业有限公司
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期1182-1191,共10页
基金
河北省重点研发计划项目(21326613D)。
文摘
比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)全长p72与截短p72蛋白(p72s)的抗原性,为ASFV特异性抗体检测技术研究提供试验依据。应用大肠杆菌表达系统表达p72和p72s蛋白,应用Western blot和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定表达的蛋白,分析蛋白的抗原表位;用纯化的重组全长和截短p72蛋白分别免疫小鼠,比较其免疫原性;通过ELISA和Western blot,评价重组p72和p72s蛋白与ASFV阳性血清的免疫反应性。结果:重组p72和p72s蛋白均以包涵体形式表达,相对分子质量分别约为76和42 ku,与预期大小相符;表达蛋白的酶解肽段对p72和p72s蛋白推测氨基酸序列的覆盖度分别为89.3%和88.39%,两者分别包含27和17个抗原表位;用p72与p72s蛋白免疫小鼠3次后,血清特异性抗体效价分别为1∶200~1∶25600和1∶12800~1∶409600;基于重组p72与p72s蛋白的ELISA从108份猪血清中分别检出78份(72.2%)和85份(78.7%)阳性血清,两者的检测结果具有很好的一致性(kappa=0.826,P=0.016);经Western blot检测的10份ASFV抗体阳性血清中有7份与p72蛋白反应,全部与p72s蛋白反应。截短p72蛋白比全长p72蛋白的抗原性好,更适合用于ASFV抗体检测。
关键词
非洲猪瘟病毒
p72蛋白
截短p72蛋白
原核表达
抗原性
Keywords
African swine fever virus
intact/truncated p72 protein
prokaryotic expression
antigenicity
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪IL-15单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
王飞燕
刘超凡
张亚楠
周晓甜
任静
袁晨
李潭清
宋勤叶
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
非洲猪瘟病毒全长与截短p72蛋白的抗原性比较
张文燕
王亚文
冯亚文
滕召剑
李潭清
董炜
刘涛
宋勤叶
任玉红
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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