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人巨细胞病毒Han株US12基因缺失株的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的复制
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作者 卢颖 马艳萍 +8 位作者 柳中洋 王鸿雁 齐莹 韩丽英 高爽 郑博 刘畅 黄郁晶 阮强 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期489-494,500,共7页
目的构建人巨细胞病毒(HCMV)Han株US12基因缺失的BAC毒株,研究US12产物对HCMV Han株在人胚肺成纤维细胞(HELF)中复制的影响。方法以侧翼含有US12基因同源序列的PCR引物扩增卡那霉素抗性基因,电转至含有Han株BAC质粒的大肠杆菌DY380-Han-... 目的构建人巨细胞病毒(HCMV)Han株US12基因缺失的BAC毒株,研究US12产物对HCMV Han株在人胚肺成纤维细胞(HELF)中复制的影响。方法以侧翼含有US12基因同源序列的PCR引物扩增卡那霉素抗性基因,电转至含有Han株BAC质粒的大肠杆菌DY380-Han-wt-BAC,PCR及DNA测序验证US12缺失的病毒序列。将缺失突变质粒Han-ΔUS12-BAC-P电转至HELF,获得感染性病毒颗粒Han-ΔUS12-BAC。以MOI为0.1的Han-ΔUS12-BAC毒株及Han-wt-BAC毒株感染HELF,TCID50法测定上清中病毒滴度,绘制病毒增殖曲线。结果成功构建了Han-ΔUS12-BAC克隆,转染HELF后成功获得感染性病毒。生长曲线实验结果表明,ΔUS12缺失和野生型毒株在HELF中复制增殖与扩散水平无明显差异。结论 US12为HCMV临床株Han在HELF中增殖和扩散过程中的非必需基因。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 US12 细菌人工染色体 生长曲线
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