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GST-hMunc18-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
1
作者
吴怡
王婧
王岚
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期557-561,共5页
目的:构建hMunc18-1的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hMunc18-1基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-6p-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-6p-1-hMu...
目的:构建hMunc18-1的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hMunc18-1基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-6p-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-6p-1-hMunc18-1。异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在E.coli BL21大肠杆菌中诱导GST-hMunc18-1融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western Blot鉴定结果。结果:hMunc18-1编码序列克隆至pGEX-6p-1载体中,双酶切鉴定片段大小为1785 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为67 000 Da,成功纯化出GST及GST-hMunc18-1蛋白,Western Blot检测到蛋白表达。结论:成功地构建了hMunc18-1基因原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化Munc18-1及研究其结构与功能奠定了基础。
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关键词
Munc18-1
蛋白纯化
融合蛋白
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题名
GST-hMunc18-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
1
作者
吴怡
王婧
王岚
机构
沈阳
医学院
病原生物学教研室
沈阳医学院附属中心医院神经内一科
出处
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期557-561,共5页
基金
辽宁省教育厅科学技术研究项目(L2013403)
沈阳医学院青年基金项目(20132028)
文摘
目的:构建hMunc18-1的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hMunc18-1基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-6p-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-6p-1-hMunc18-1。异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在E.coli BL21大肠杆菌中诱导GST-hMunc18-1融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western Blot鉴定结果。结果:hMunc18-1编码序列克隆至pGEX-6p-1载体中,双酶切鉴定片段大小为1785 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为67 000 Da,成功纯化出GST及GST-hMunc18-1蛋白,Western Blot检测到蛋白表达。结论:成功地构建了hMunc18-1基因原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化Munc18-1及研究其结构与功能奠定了基础。
关键词
Munc18-1
蛋白纯化
融合蛋白
Keywords
Muncl8-1
protein purification
fusion protein
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-hMunc18-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
吴怡
王婧
王岚
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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