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PM_(2.5)对人肺癌细胞A549迁移、侵袭能力的增强作用 被引量:8
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作者 杨丹 周伟强 +1 位作者 杨彪 肖纯凌 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期243-250,共8页
为探讨PM_(2.5)(particulate matter 2.5)对人肺癌细胞A549迁移、侵袭能力的影响并探讨相关机制,采用含有不同浓度PM_(2.5)的无血清及抗生素培养液对A549细胞培养72 h,利用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。根据MTT实验结果,选择适当的PM... 为探讨PM_(2.5)(particulate matter 2.5)对人肺癌细胞A549迁移、侵袭能力的影响并探讨相关机制,采用含有不同浓度PM_(2.5)的无血清及抗生素培养液对A549细胞培养72 h,利用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。根据MTT实验结果,选择适当的PM_(2.5)暴露浓度用于后续实验,以细胞划痕实验检测细胞迁移能力,transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western Blotting法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、转录因子snail和slug、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及胞核内β-链蛋白(β-catenin)的蛋白表达水平。结果显示:细胞划痕实验结果显示10μg·m L-1PM_(2.5)组A549细胞划痕创面愈合率为(46.34%±5.19%),与对照组比较显著增高(P<0.05);transwell小室法迁移和侵袭实验结果显示10μg·m L-1PM_(2.5)组穿膜细胞数平均为(165.67±6.62)个和(47.83±2.04)个,与对照组比较显著增多(P<0.05);Western Blotting实验结果显示PM_(2.5)(10μg·m L-1)可显著上调A549细胞cyclin D1、snail、slug、MMP-2、MMP-9和胞核内β-catenin蛋白表达水平。因此,PM_(2.5)可通过提高Wnt/β-catenin通路活性及其下游cyclin D1、snail、slug、MMP-2和MMP-9的蛋白表达而增强A549细胞的迁移、侵袭能力。 展开更多
关键词 PM2.5 人肺癌细胞 A549 β-catenin snail SLUG 金属蛋白酶-2 金属蛋白酶-9 细胞周期蛋白D1
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ICU医院感染与置入性导管中细菌生物膜的相关研究 被引量:12
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作者 周园 刘新 +1 位作者 王岚 武国超 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期680-681,共2页
目的:研究重症监护病房(intensive care unit,ICU)置入性导管形成细菌生物膜的状况,了解导管中的生物膜对ICU医院感染的影响,为寻求控制置入性导管细菌所致医院感染的有效措施提供依据。方法:收集ICU病房置入性导管,通过阿利新蓝与刚果... 目的:研究重症监护病房(intensive care unit,ICU)置入性导管形成细菌生物膜的状况,了解导管中的生物膜对ICU医院感染的影响,为寻求控制置入性导管细菌所致医院感染的有效措施提供依据。方法:收集ICU病房置入性导管,通过阿利新蓝与刚果红联合染色快速鉴定细菌生物膜形成,导管置入液体培养基中模拟液态持续流动的环境,观察导管内侧面形成的生物膜结构。结果:阿利新蓝-刚果红染色细菌生物膜呈深红色;导管材料内表面细菌附着并有纤维素样物质交联形成生物膜。附着的细菌主要有铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠杆菌及葡萄球菌等。结论:阿利新蓝染色法可用于快速检测细菌生物膜的形成,置入性导管细菌生物膜的形成与ICU医院感染密切相关。 展开更多
关键词 重症监护病房 细菌生物膜 医院感染
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SAHA在Leptin诱导的乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中的调控作用 被引量:6
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作者 冯秀艳 韩翰 周伟强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期503-508,共6页
目的为了阐明SAHA调控Leptin诱导的乳腺癌ER+细胞系MCF-7细胞增殖的分子机制,我们采用实时无标记细胞分析系统,动态监测Leptin对MCF-7细胞生长状况的影响。方法通过自动细胞分析仪Muse Cell Analyzer分析Leptin和SAHA对MCF-7细胞活力、... 目的为了阐明SAHA调控Leptin诱导的乳腺癌ER+细胞系MCF-7细胞增殖的分子机制,我们采用实时无标记细胞分析系统,动态监测Leptin对MCF-7细胞生长状况的影响。方法通过自动细胞分析仪Muse Cell Analyzer分析Leptin和SAHA对MCF-7细胞活力、细胞凋亡以及细胞周期产生的影响,并应用细胞凋亡抗体芯片测定Leptin和SAHA两种处理因素作用MCF-7细胞后相关凋亡通路分子表达变化的情况。结果低浓度Leptin对MCF-7细胞生长有诱导作用,其浓度为0.625 nmol·L^(-1)时作用效果最明显。细胞分析结果表明,SAHA能明显抑制Leptin诱导的MCF-7细胞增殖,经SAHA处理后MCF-7细胞活力明显下降,细胞凋亡率明显增多,细胞被大量阻滞于G_0/G_1期。凋亡抗体芯片筛查结果发现,SAHA可明显诱导MCF-7细胞内促凋亡因子Bax、Caspase-3的表达,并且与凋亡产生密切相关的TRAIL DR5、p21^(CIP1)蛋白的表达也明显上升,Claspin、Clusterin、XIAP、Survivin蛋白的表达明显下降,而Leptin对上述蛋白的表达具有相反作用。结论 Leptin、SAHA对乳腺癌ER^+细胞MCF-7的影响可能与乳腺癌细胞内凋亡通路激活有关,特别是与内源性线粒体凋亡通路引发的Caspase-3释放密切相关。 展开更多
关键词 细胞凋亡 乳腺癌 雌激素受体阳性细胞 MCF-7 SAHA 瘦素
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乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区HDAC1高功能结合位点的研究 被引量:6
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作者 邹丹 周伟强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期317-321,共5页
目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L... 目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L^(-1)0.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L^(-1)10μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Realtime PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从TSS到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析。结果 B组中,HDAC1抗体在p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达最高。S组中,HDAC1抗体与p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1~f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达最低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达最大值。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,该启动子区上游-2 800 bp至-3 200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7细胞 p21(WAF1/CIP1) 组蛋白去乙酰化酶1 辛二酰苯胺异羟肟酸 瘦素
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乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区雌激素受体α的高功能结合位点 被引量:2
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作者 邹丹 冯秀艳 周伟强 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期677-680,685,共5页
目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培... 目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol/L的SAHA 0.88μL(SAHA组)、0.625 nmol/L的leptin 10μL(leptin组)处理24 h,对照组在完全型RPMI-1640培养基中培养细胞。应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与ERα抗体孵育,收集纯化结合ERα抗体的DNA片段,应用实时PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从转录起始点到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCt法分析。结果对照组中,与ERα抗体结合的f1、f2、f8片段DNA相对表达量较f9片段高出2倍以上(P<0.01)。与对照组比较,SAHA及leptin组f1~f10片段与ERα抗体结合能力均降低,其中SAHA组f8片段DNA相对表达量达最低值(P<0.01),且明显低于leptin组(P<0.01)。SAHA组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其升高(P<0.05或0.01)。leptin组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其降低,除f1外均有统计学差异(P<0.01)。结论乳腺癌细胞增殖过程中细胞增殖信号招募ERα至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,且p21^(WAF1/CIP1)启动子区-2 800 bp^-3 200 bp区域存在与ERα高度结合的靶功能区。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7 细胞 P21^WAF1/CIP1 雌激素受体 α 辛二酰苯胺异羟肟酸 瘦素
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HDAC1在调控乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)转录过程中与ERα的协同作用
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作者 邹丹 冯秀艳 周伟强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1243-1248,共6页
目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)、雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)共同募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子特定区域,调控其转录活性的具体作用位点,同时明确辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoyla... 目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)、雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)共同募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子特定区域,调控其转录活性的具体作用位点,同时明确辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)及瘦素(Leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的作用机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L^(-1)0.88μL SAHA(SAHA组)、0.625nmol·L^(-1)10μL Leptin(Leptin组)处理24 h,对照组(Basal组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液先后与HDAC1抗体及ERα抗体进行染色质免疫共沉淀(chromatin-immunoprecipitation,Ch IP)孵育,收集纯化结合HDAC1及ERα抗体的DNA片段,应用Real-time PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从转录起始位点(transcription start site,TSS)到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量,并用2^(-△△CT)法分析。结果Basal组中,HDAC1、ERα抗体在p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力。SAHA组中,HDAC1、ERα抗体与p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段结合量明显低于对照组,而在Leptin组两片段与HDAC1、ERα抗体结合量明显高于对照组。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,细胞增殖信号可招募HDAC1、ERα至p21^(WAF1/CIP1)启动子区。该启动子区上游0^-400bp,-2 800^-3 200 bp DNA片段是与HDAC1、ERα共同作用的靶功能区。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7细胞 P21WAF1/CIP1 组蛋白去乙酰化酶1 雌激素受体α 辛二酰苯胺异羟肟酸 瘦素
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