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题名草莓ARF4基因启动子的克隆及转录活性分析
被引量：7
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作者
董向向
王矢乔
关宇涵
张志宏
李贺
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机构
沈阳农业大学园艺学院/辽宁省草莓育种及优质栽培重点实验室
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出处
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期513-521,共9页
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基金
国家自然科学基金项目(31872069)
辽宁省百千万人才工程项目(2016921067)
辽宁省自然科学基金项目(201602659)
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文摘
草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益。课题组前期研究发现,草莓ARF4基因能够调控草莓开花时间。启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱。克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要意义。根据草莓基因组信息设计特异引物,克隆草莓ARF4基因启动子。使用Plant CARE在线软件,预测其序列上的顺式作用元件。将ARF4启动子进行分段缺失克隆,利用农杆菌介导的果实注射法及GUS组织染色,确定GUS基因表达的强弱。通过农杆菌介导的叶盘转化法,获得转proARF4::GUS基因草莓植株,利用GUS组织染色法分析启动子的组织表达特异性。对转基因草莓植株进行非生物胁迫处理,通过qRT-PCR方法确定影响ARF4基因启动子转录活性的因素。结果表明:在ARF4基因启动子序列上,除了存在基本的核心元件外,还包含一些光响应、胁迫响应、厌氧诱导及激素响应等作用元件。GUS组织染色结果显示,随着启动子序列长度逐渐变短,GUS基因表达变弱。在转proARF4::GUS基因草莓植株叶柄、嫩叶及新茎中GUS表达水平较高,且在嫩叶中表达量最高。在非生物胁迫处理下,IAA和GA可使GUS基因表达显著提高。这些结果提供了影响ARF4基因表达的相关因素,为调控草莓开花时间奠定了基础。
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关键词
草莓
ARF4
启动子
转录活性分析
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Keywords
strawberry
Auxin response factor 4
promoter
activity analysis
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分类号
S668.4
[农业科学—果树学]
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题名草莓FveRPM1基因的鉴定及功能分析
被引量：5
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作者
关宇涵
王雨沙
李晓明
李贺
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机构
沈阳农业大学园艺学院/辽宁省草莓育种及优质栽培重点实验室
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出处
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期641-649,共9页
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基金
国家重点研发计划子课题项目(2019YFD1000200)
辽宁省重点研发项目(2020JH2/10200032)。
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文摘
RPM1属于CC-NBS-LRR类蛋白激酶,在植物抗病反应中起重要作用,其功能在拟南芥、水稻等植物中有深入研究,但在草莓上还鲜有报道。以草莓为试材,克隆FveRPM1基因的编码区序列,发现其长度为2748bp,编码915个氨基酸,属于膜表达蛋白。进化关系分析显示草莓FveRPM1与苹果MdRPM1的亲缘关系最近,而与乌拉尔图小麦TuRPM1的亲缘关系较远。利用RTqPCR技术检测了FveRPM1基因在草莓不同器官、不同激素浓度及病菌处理下的表达量,结果表明:FveRPM1基因在草莓根中高表达,而在新叶中的表达量最低;不同浓度的MeJA和SA分别处理Ruegen草莓12h后FveRPM1基因的表达水平明显上升,其中1μmol·L^(-1)的MeJA处理12h后FveRPM1基因的表达量最高,为对照的13.2倍,而0.1μmol·L^(-1)的SA处理12h后FveRPM1基因的表达量最高,为对照的14倍;灰霉病菌处理能显著增加FveRPM1基因的表达量,同时也能显著增强POD、CAT和SOD的活性。利用农杆菌介导的草莓果实瞬时转化试验,将构建好的FveRPM1基因的过表达载体和干扰载体分别转入艳丽和月华草莓白果期果实中,待果实转红时接种灰霉病菌后发现,过表达FveRPM1基因能够增强草莓果实对灰霉病的抗性,而沉默该基因则降低了草莓果实对灰霉病的抗性,并且FveRPM1基因过表达果实的SOD酶活性最强,FveRPM1基因沉默果实的SOD酶活性最弱,CAT酶活性表现相同的规律,说明FveRPM1基因参与草莓果实对灰霉病的防御响应。研究结果为利用分子手段进行草莓抗病育种奠定一定的理论基础。
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关键词
草莓
灰霉病
FveRPM1
功能
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Keywords
strawberry
Botrytis cinerea
FveRPM1
function
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分类号
S567.31
[农业科学—中草药栽培]
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