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牛轮状病毒RAA-CRISPR/Cas13a快速检测方法的建立
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作者 袁炫帅 赵琳琳 龙淼 《中国兽医杂志》 2025年第11期70-76,共7页
为建立一种快速检测牛轮状病毒(BRV)的方法,本试验结合重组酶介导等温扩增(RAA)技术和簇状规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR/Cas13a)系统,以BRV保守基因序列VP6设计Target RNA、RAA扩增引物和crRNA,并筛选最佳RAA引物和... 为建立一种快速检测牛轮状病毒(BRV)的方法,本试验结合重组酶介导等温扩增(RAA)技术和簇状规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR/Cas13a)系统,以BRV保守基因序列VP6设计Target RNA、RAA扩增引物和crRNA,并筛选最佳RAA引物和反应条件,建立BRV的RAA-CRISPR/Cas13a检测方法,同时验证该方法的特异性、敏感性和重复性,并与逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)方法进行临床样本检测对比。结果显示,RAA-CRISPR/Cas13a检测方法与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛星状病毒(BoAstV)和大肠杆菌(Escherichia coli)未发生交叉反应,特异性强;最低检测限为1.9×10^(2) copies/μL,敏感性强;组内、组间变异系数分别为3.9%和7.4%,分别小于5%和10%,重复性良好。检测108份牛粪样本,RAA-CRISPR/Cas13a与RT-qPCR检测的阳性检出率均为44%(47/108),符合率为100%。结果表明,本试验建立的BRV RAA-CRISPR/Cas13a快速检测方法灵敏度高、特异性强,可为BRV临床快速检测提供有力技术支撑。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) 重组酶介导等温扩增(RAA) CRISPR/Cas13a 实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR) 病毒检测
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