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全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定
被引量：
5
1
作者
张倩倩
赵茜
+7 位作者
张晓
丁贵鹏
金秋
高畅
熊四平
陈玉平
朱进
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期927-931,共5页
目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scF...
目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。
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关键词
狂犬病病毒G蛋白
噬菌体抗体库
单链抗体(scFv)
中和活性
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职称材料
狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析
被引量：
2
2
作者
王晓蕾
陈芳芳
+10 位作者
袁伟
钱国强
耿以如
张晓
杨瑾
熊四平
陈雅
唐奇
仇镇宁
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期772-776,822,共6页
目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物...
目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。
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关键词
狂犬病病毒
狂犬病病毒糖蛋白
Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统
纯化
抗体
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职称材料
题名
全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定
被引量：
5
1
作者
张倩倩
赵茜
张晓
丁贵鹏
金秋
高畅
熊四平
陈玉平
朱进
冯振卿
机构
南京医科大学卫生部抗体
技术
重点实验室
南京医科大学病理学系
杭州市红十字会医院结核科
江阴力博医药生物技术有限公司
南京军区军事医学研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期927-931,共5页
基金
国家自然科学基金资助(81273325)
江苏省科技支撑计划资助(BE2011842)
文摘
目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。
关键词
狂犬病病毒G蛋白
噬菌体抗体库
单链抗体(scFv)
中和活性
Keywords
protein G of rabies virus
phage antibody library
single-chain antibody（scFv）
neutralizing activity
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析
被引量：
2
2
作者
王晓蕾
陈芳芳
袁伟
钱国强
耿以如
张晓
杨瑾
熊四平
陈雅
唐奇
仇镇宁
冯振卿
朱进
机构
南京医科大学病理学系
南京医科大学卫生部抗体
技术
重点实验室.江苏南京
江阴力博医药生物技术有限公司
南京军区军事医学研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期772-776,822,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81273325,81202370)
江苏省社会发展项目(BE2011842)
大学生创新计划(Ky101J201217)
文摘
目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。
关键词
狂犬病病毒
狂犬病病毒糖蛋白
Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统
纯化
抗体
Keywords
rrabies virus
rabies virus glycoprotein（RVG）
Bac-to-Bac baculovirus expression system
purification
antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定
张倩倩
赵茜
张晓
丁贵鹏
金秋
高畅
熊四平
陈玉平
朱进
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析
王晓蕾
陈芳芳
袁伟
钱国强
耿以如
张晓
杨瑾
熊四平
陈雅
唐奇
仇镇宁
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
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