布鲁氏菌病实验室诊断技术 被引量：1

1

作者 冯国金 李孔定 +1 位作者 张展 刘炜 《现代农村科技》 2024年第9期94-95,共2页

布鲁氏菌病是一种动物源性传染病,给我国的养殖生产和公共卫生安全带来了严重威胁,科学准确的诊断对于防控布鲁氏菌病至关重要。本文首先对布鲁氏菌病的传播途径和病原特点进行分析,然后从动物布病病原学诊断以及免疫学诊断两方面对布... 布鲁氏菌病是一种动物源性传染病,给我国的养殖生产和公共卫生安全带来了严重威胁,科学准确的诊断对于防控布鲁氏菌病至关重要。本文首先对布鲁氏菌病的传播途径和病原特点进行分析,然后从动物布病病原学诊断以及免疫学诊断两方面对布鲁氏菌病实验室诊断技术进行了全面深入的分析,以此来为动物布病诊断提供理论和实践依据。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 病原分离 免疫学

在线阅读 下载PDF 职称材料

O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：9

2

作者 张展 陈信全 +2 位作者 冯国金 黄慧贤 利光辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期601-607,共7页

为建立O型口蹄疫病毒(FMDV-O)和塞内卡病毒(SVV)快速鉴别检测方法,本实验根据FMDV-O VP2基因序列和SVV P3基因序列,采用Primer Express3.0软件分别设计引物与探针,并经各反应条件的优化初步建立了可同时鉴别检测FMDV-O和SVV的双重荧光定... 为建立O型口蹄疫病毒(FMDV-O)和塞内卡病毒(SVV)快速鉴别检测方法,本实验根据FMDV-O VP2基因序列和SVV P3基因序列,采用Primer Express3.0软件分别设计引物与探针,并经各反应条件的优化初步建立了可同时鉴别检测FMDV-O和SVV的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测临床常见猪病毒,结果显示可同时检测出FMDV-O和SVV核酸,且与猪水泡性口炎病毒(VSV)、猪水疱病毒(SVDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、A型口蹄疫病毒(FMDV-A)、A-1型口蹄疫病毒(FMDVA-1)核酸均无交叉反应,并可检测到FMDV-O PanAsia株、cathay株、Ind-2001株和Mya-98株等主要流行株,特异性强;该方法对含FMDV-O和SVV拼接质粒标准品的最低检测限为7.17×10^(2)拷贝/μL,敏感性高;利用该方法检测了同一时间和不同时间提取的3种不同浓度的质粒标准品,结果显示批内和批间重复性试验Ct值的变异系数均小于3%,重复性好。利用本实验所建立的方法对30份临床样品进行检测,结果与各病毒单一荧光定量RT-PCR检测结果一致。本研究建立的FMDV-O和SVV双重荧光定量RT-PCR方法能够快速准确的鉴别检测FMDV-O和SVV,为口岸检疫的快速通关提供了技术手段。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 塞内卡病毒 双重RT-qPCR方法 P3基因 VP2基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒双重荧光RT-PCR检测方法中阳性参考品的制备

3

作者 陈信全 张展 +2 位作者 周伟光 张峥嵘 黄慧贤 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期56-60,69,共6页

为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O... 为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)的阳性参考品。结果表明,该阳性质控品无生物传染性,可以真实模拟病毒粒子结构,耐受DNaseI及RNaseA,稳定性高,在-70℃保存18个月,荧光RT-PCR检测结果均无显著差异。本试验制备的含有猪O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,可以作为SVA和FMDV-O双重荧光RT-PCR检测方法中进行质量控制的阳性参考品。 展开更多

关键词 猪塞内卡病毒 O型口蹄疫病毒 MS2噬菌体 装甲RNA技术 阳性参考品

在线阅读 下载PDF 职称材料

PCR检测方法的优势及在防控非洲猪瘟生产中的应用

4

作者 李孔定 冯国金 林浩然 《现代农村科技》 2024年第9期87-88,共2页

非洲猪瘟病毒是对养殖业造成巨大威胁的疾病,有效的检测方法至关重要。聚合酶链反应(PCR)已被广泛应用于非洲猪瘟病毒的诊断与监测。该技术具有高度的特异性和敏感性,能够迅速、准确地检测出非洲猪瘟病毒的存在。本文从样品采集、DNA提... 非洲猪瘟病毒是对养殖业造成巨大威胁的疾病,有效的检测方法至关重要。聚合酶链反应(PCR)已被广泛应用于非洲猪瘟病毒的诊断与监测。该技术具有高度的特异性和敏感性,能够迅速、准确地检测出非洲猪瘟病毒的存在。本文从样品采集、DNA提取以及特异性和敏感性试验结果等方面对PCR技术在非洲猪瘟病毒中的应用进行了介绍,以此来加强对非洲猪瘟病毒的有效治疗。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 PCR 特异性 敏感性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组人溶菌酶对黄羽肉鸡的安全性评价 被引量：1

5

作者 刘淑扬 张健玲 +10 位作者 王志林 邓俊劲 李洋 张华 黄金锐 连培荣 陈碧娴 郭秋霞 黄嘉麒 张浩吉 李家洲 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3994-4004,共11页

【目的】研究饲粮中添加不同水平重组人溶菌酶对黄羽肉鸡生长性能、血液生理、血浆生化、组织结构变化和肠道菌群结构的影响,从而评价重组人溶菌酶在肉鸡上应用的生物安全性。【方法】试验采用单因子完全随机设计,选用192只1日龄健康快... 【目的】研究饲粮中添加不同水平重组人溶菌酶对黄羽肉鸡生长性能、血液生理、血浆生化、组织结构变化和肠道菌群结构的影响,从而评价重组人溶菌酶在肉鸡上应用的生物安全性。【方法】试验采用单因子完全随机设计,选用192只1日龄健康快速型黄羽肉鸡,随机分为4组,每组48只(公母对半),分别设置推荐剂量组(20000 U/kg)、3倍推荐剂量组(60000 U/kg)、5倍推荐剂量组(100000 U/kg),在饲粮中填加相应剂量的重组人溶菌酶;另设置一基础饲粮组作为对照组,试验期为54 d,称量黄羽肉鸡在21、42和54 d时的空腹重量,统计饲料消耗量,计算试验期肉鸡的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G);试验结束时,每组选择8只黄羽肉鸡采集血液,以检测血液常规生理指标与血浆生化指标;屠宰后采集鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、空肠和回肠组织,进行组织病理学检查;采集鸡盲肠内容物,检测盲肠微生物菌群结构。【结果】靶动物安全性试验期间各剂量组的所有肉鸡临床表现均正常。与对照组相比,各试验组生长性能无显著差异(P>0.05);在血液生理参数方面,除饲粮添加60000 U/kg重组人溶菌酶组的红细胞分布宽度变异系数显著低于对照组(P<0.05)外,其他血液生理指标各试验组均无显著变化(P>0.05)。在血浆生化参数方面,添加60000 U/kg重组人溶菌酶组血浆肌酐含量显著高于对照组(P<0.05),其他指标各组之间无显著变化(P>0.05)。对添加不同水平重组人溶菌酶肉鸡进行剖检和组织病理学检查,与对照组相比,均未发现明显差异。肠道微生物组结果显示,饲喂不同水平重组人溶菌酶对肉鸡肠道菌群的多样性和结构也无显著影响(P>0.05)。【结论】在黄羽肉鸡饲粮中添加20000 U/kg重组人溶菌酶,具有5倍以上安全系数,即饲粮中添加100000 U/kg以下重组人溶菌酶对黄羽肉鸡是安全的。 展开更多

关键词 黄羽肉鸡 重组人溶菌酶 安全性评价

在线阅读 下载PDF 职称材料

大豆中转基因成分微滴式数字PCR检测方法研究 被引量：3

6

作者 刘炜 杨芳 +2 位作者 李丽华 王英姿 陈信全 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期448-454,共7页

为了探讨转基因大豆品系及其衍生产品鉴定的高效技术手段,本研究建立了转基因大豆的微滴式数字PCR(ddPCR)筛选检测方法。利用3种方法提取大豆基因组DNA,分析提取方法和保存时间对微ddPCR检测拷贝数的影响。同时,应用特异性引物,以4种转... 为了探讨转基因大豆品系及其衍生产品鉴定的高效技术手段,本研究建立了转基因大豆的微滴式数字PCR(ddPCR)筛选检测方法。利用3种方法提取大豆基因组DNA,分析提取方法和保存时间对微ddPCR检测拷贝数的影响。同时,应用特异性引物,以4种转基因大豆筛选靶标元件为扩增靶标,对微滴式数字PCR检测方法进行体系优化、灵敏度测试和准确度验证。结果表明:使用Promega植物基因组DNA提取试剂盒,提取的DNA对转基因作物的外源拷贝数进行鉴定的结果更为准确可靠。与荧光定量筛选方法相比,ddPCR方法更加灵敏和准确。检测体系的最适探针浓度为100 nmol·L^(-1),最佳退火温度为58℃。以4种靶标元件CaMV35S启动子、T-NOS终止子、pat基因和T-E9终止子开展ddPCR检测,检测灵敏度较高,准确性较好。转基因大豆含量为1%时对CaMV35S和T-NOS靶标参数的绝对检测限为2个拷贝,pat为5个拷贝,T-E9为10个拷贝。本研究建立的ddPCR检测方法可用于大豆转化体的定量检测。 展开更多

关键词 转基因大豆 检测方法 数字PCR 分子检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

食品塑料包装材料中光稳定剂在食品模拟物中迁移规律的研究 被引量：4

7

作者 黄雪琳 刘敏慧 +4 位作者 杨丽 马莉 刘淑君 郭宗宁 蒋小良 《包装与食品机械》 CAS 北大核心 2021年第2期33-36,共4页

建立了高效液相色谱法测定食品塑料包装材料中光稳定剂UV-9和UV-531特定迁移量的分析方法。该方法采用外标法定量,两种目标化合物在相应的范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999,检出限均为0.5μg/L。分别选取体积分数为10%、... 建立了高效液相色谱法测定食品塑料包装材料中光稳定剂UV-9和UV-531特定迁移量的分析方法。该方法采用外标法定量,两种目标化合物在相应的范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999,检出限均为0.5μg/L。分别选取体积分数为10%、20%和50%的乙醇溶液,以及质量分数为40 g/L的乙酸溶液和正己烷5种食品模拟物浸泡含有光稳定剂UV-9和UV-531的塑料食品包装材料,在一定的时间点取样测试浸泡液中光稳定剂含量,研究迁移量与模拟物之间的关系。结果表明,在不同食品模拟物下包装材料中光稳定剂的迁移量不同,其特定迁移量顺序为正己烷>50%乙醇溶液>20%乙醇溶液>10%乙醇溶液>4%乙酸溶液。 展开更多

关键词 食品包装材料 光稳定剂 迁移 食品模拟物

在线阅读 下载PDF 职称材料

流式细胞术在农业研究领域中的应用 被引量：2

8

作者 王蕾 罗帝洲 +5 位作者 邓紫璇 莫敏莹 张健玲 苏颖辉 房元杰 张晓爱 《广东农业科学》 CAS 2022年第11期66-73,共8页

流式细胞术是一种对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选的生物学技术,基于流式细胞仪通过检测散射或者偶联荧光信号快速、准确、客观、高通量获得悬浮微粒(通常是细胞、细菌等微小颗粒)一系列重要的生物物理、生物化学相关特征参量,... 流式细胞术是一种对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选的生物学技术,基于流式细胞仪通过检测散射或者偶联荧光信号快速、准确、客观、高通量获得悬浮微粒(通常是细胞、细菌等微小颗粒)一系列重要的生物物理、生物化学相关特征参量,可以根据预选的参量范围对细胞、细菌等微小颗粒进行自动分析和对特定群体进行分选。流式细胞术在许多科学领域特别是生物技术和医学领域应用广泛,虽然在农业研究中的应用开始得比较晚,但目前已取得巨大进展。随着流式细胞仪性能的不断提高,标记方法和检测技术的不断开发与完善,流式细胞术的应用前景将越来越广阔,在农业领域也将发挥越来越重要的作用。介绍了流式细胞术的工作原理和流式细胞仪功能分类,综述了流式细胞术在农业研究领域中的应用,如对农作物基因组和原生质体分析以及抗逆研究,对动物免疫、微量元素分析、精子质量和性别控制以及毒素毒性分析,对病原菌和病毒分析研究等方面的应用和研究进展,展望该研究领域的发展前景,为流式细胞术在农业领域的潜在应用提供新的思考方向。 展开更多

关键词 流式细胞术 农业 畜牧 农作物 农业微生物

在线阅读 下载PDF 职称材料

我国首次截获有害生物小楔双棘长蠹 被引量：1

9

作者 李天宝 黄萍 +1 位作者 张录璐 孙小冰 《生物安全学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期195-199,共5页

江门海关从冈比亚进境的刺猬紫檀木原木中检出活体长蠹科昆虫。通过显微形态特征的观察和测量,对该虫进行了物种鉴定。经形态特征鉴定,该虫为小楔双棘长蠹。该虫的形态特征与近似种的主要区别:斜面毛被稀疏、不太明显,近缝角处竖立短直... 江门海关从冈比亚进境的刺猬紫檀木原木中检出活体长蠹科昆虫。通过显微形态特征的观察和测量,对该虫进行了物种鉴定。经形态特征鉴定,该虫为小楔双棘长蠹。该虫的形态特征与近似种的主要区别:斜面毛被稀疏、不太明显,近缝角处竖立短直;缝侧齿基部不粗糙;斜面侧上缘有3对胝状的痕迹显现。该虫在我国尚无分布记录,为国内口岸首次截获。该虫一般随着原木、木制品及木质包装进行远距离传播,一旦传入我国,将对我国的农林安全造成巨大威胁,各口岸须加强对进境原木、木制品及木质包装的检验检疫。 展开更多

关键词 长蠹科 小楔双棘长蠹 截获 刺猬紫檀

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能 被引量：1

10

作者 张艳彬 王素峰 +4 位作者 张健玲 刘书欣 邓俊劲 王志林 陈庄 《广东农业科学》 CAS 2022年第11期50-56,共7页

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌的益生性能进行测试,为其在畜禽动物养殖中的应用提供参考。【方法】采用Rogosa SL完全选择性培养基分离出106株乳酸菌,通过革兰氏染色、酸和胆盐耐受初步筛选出1株潜在的饲用乳酸菌... 【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌的益生性能进行测试,为其在畜禽动物养殖中的应用提供参考。【方法】采用Rogosa SL完全选择性培养基分离出106株乳酸菌,通过革兰氏染色、酸和胆盐耐受初步筛选出1株潜在的饲用乳酸菌,经16S rDNA序列鉴定为发酵乳杆菌LF1,并对其益生性能潜力进行评估,包括抑菌活性(针对大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等12种病原菌)、对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌LF1耐酸和耐胆盐的能力较强,显示出较强的益生菌潜力,但LF1菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮抗作用方面,发酵乳杆菌LF1的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌LF1具有较好的益生性能,通过进一步的动物实验评估后,可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。 展开更多

关键词 发酵乳杆菌 益生性能 耐酸 耐胆盐 病原菌拮抗

在线阅读 下载PDF 职称材料

响应面法优化牛至粉发酵工艺及其抑菌能力研究

11

作者 李洋 朱思明 +6 位作者 张健玲 郑粤 陈应强 罗帝洲 俞婷 张艳彬 王志林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1695-1706,共12页

【目的】采用复合菌发酵牛至粉,以期提升其营养品质。【方法】以牛至粉、玉米粉和豆粕粉为底物,以抑菌能力作为评价指标,依次利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心复合试验等方法对复合益生菌固态发酵牛至粉的工艺条件进行优化... 【目的】采用复合菌发酵牛至粉,以期提升其营养品质。【方法】以牛至粉、玉米粉和豆粕粉为底物,以抑菌能力作为评价指标,依次利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心复合试验等方法对复合益生菌固态发酵牛至粉的工艺条件进行优化,并测定发酵牛至粉的抑菌能力、pH、乳酸含量、抗氧化能力、蛋白含量和挥发油含量。【结果】发酵时间、发酵基质水分含量和乳酸菌接种量是影响发酵的主效应因素,优化后最佳发酵工艺为:发酵底物组成比例为牛至粉∶玉米粉∶豆粕粉=4∶1∶5,枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酵母菌接种量均为5×10^(6) CFU/g,乳酸菌接种量为1.87×10^(7) CFU/g,发酵温度为25℃,发酵时间为130 h,水分含量46.7%。在此条件下,发酵牛至粉组合物对大肠杆菌抑菌率达99.98%。较未发酵牛至粉而言,发酵组合物pH显著降低(P<0.05),抗氧化能力显著提高(P<0.05),水溶蛋白和酸溶蛋白均显著提高(P<0.05),百里香酚和香芹酚的含量显著提高40%以上(P<0.05)。与未发酵牛至粉相比,发酵牛至粉对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和副溶血弧菌的抑菌能力均显著提高(P<0.05)。【结论】响应面法优化牛至粉发酵工艺后,其有效成分百里香酚和香芹酚的含量均显著提高40%以上,且抑菌能力和营养品质均显著提高。 展开更多

关键词 牛至粉 益生菌 发酵 工艺优化 抑菌能力

在线阅读 下载PDF 职称材料

功能微生物在生态健康养殖中的应用研究进展

12

作者 邓俊劲 张艳彬 +5 位作者 张健玲 刘书欣 俞婷 牛志凯 王志林 陈庄 《广东农业科学》 CAS 2022年第11期21-31,共11页

养殖业中抗生素滥用和环境污染问题已引起国家和行业的广泛关注。功能微生物可以有效替代养殖用化学物质,取代激素和抗生素,提高动物综合生长性能,在生态健康养殖中发挥关键作用。为实现我国养殖业的可持续发展,在动物养殖中应用功能微... 养殖业中抗生素滥用和环境污染问题已引起国家和行业的广泛关注。功能微生物可以有效替代养殖用化学物质,取代激素和抗生素,提高动物综合生长性能,在生态健康养殖中发挥关键作用。为实现我国养殖业的可持续发展,在动物养殖中应用功能微生物实现生态健康养殖已成为一条重要发展路径。功能微生物的作用贯穿整个养殖前端、过程和末端:利用功能微生物处理饲料原料,可以有效去除抗营养因子,提高饲料转化利用率和营养价值;以养殖功能微生物饲喂动物,可以调节肠道微生物群平衡,维持肠道稳态,调节机体免疫;应用于养殖环境中,可以控制臭气排放和环境病原,在养殖废弃物的无害化处理和资源化利用方面也发挥重要作用。结合有关养殖功能微生物的研究成果,对功能微生物在动物养殖中的应用研究进展进行综述,包括它们在生物饲料加工、动物肠道健康、养殖环境控制和废弃物处理中的应用及相关作用机制,以期为功能微生物在动物养殖中的进一步应用与推广提供参考。 展开更多

关键词 禁抗 功能微生物 动物健康 生物饲料加工 废弃物处理

在线阅读 下载PDF 职称材料

水产病原肝肠孢虫核酸检测试剂盒效果测评

13

作者 李丰 俞婷 +2 位作者 张健玲 王凯 邹祺琪 《现代畜牧科技》 2023年第12期19-22,共4页

该研究选取汇科因、市场品牌A、市场品牌B 3种核酸提取试剂盒及其对应的PCR检测试剂盒,检测近几年盛行肆虐的水产病害——肝肠孢虫(EHP),综合评估核酸提取试剂盒提取的核酸浓度、纯度、CV值,RT-PCR检测试剂盒的Ct值、波动范围等结果。... 该研究选取汇科因、市场品牌A、市场品牌B 3种核酸提取试剂盒及其对应的PCR检测试剂盒,检测近几年盛行肆虐的水产病害——肝肠孢虫(EHP),综合评估核酸提取试剂盒提取的核酸浓度、纯度、CV值,RT-PCR检测试剂盒的Ct值、波动范围等结果。结果显示,提取南美白对虾的肝胰腺和肌肉组织,不同核酸提取试剂盒提取的核酸浓度高低:汇科因>B>A;不同提取试剂盒获取的核酸样品经不同qPCR检测得到的EHP病原浓度高低:汇科因≥A>B;汇科因核酸提取试剂盒和qPCR检测试剂盒相对于A、B试剂盒的效果和稳定性均较佳。 展开更多

关键词 肝肠孢虫 核酸提取 qPCR核酸检测试剂盒 南美白对虾

在线阅读 下载PDF 职称材料