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抗黄曲霉毒素B_(1)多价纳米抗体融合蛋白的构建及活性分析
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作者 帅文苑 何庆华 +5 位作者 钟引凤 黄云祥 张航 刘传勇 张乐平 涂追 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期213-219,共7页
纳米抗体来源于天然缺失轻链的重链抗体可变区,是已知最小抗原结合单元。该研究构建了抗黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))纳米抗体的单价及多价串联体,分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码片段融合并克隆至原核表达载体p ET30。以大肠杆菌BL21(DE3)作... 纳米抗体来源于天然缺失轻链的重链抗体可变区,是已知最小抗原结合单元。该研究构建了抗黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))纳米抗体的单价及多价串联体,分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码片段融合并克隆至原核表达载体p ET30。以大肠杆菌BL21(DE3)作为表达宿主,通过异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷诱导,亲和层析技术分别纯化单、双及三价抗AFB_(1)纳米抗体与GFP的融合蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明三种融合蛋白均为可溶性表达,表达量分别为6.0、7.5、4.0 mg/L。采用酶联免疫吸附法和荧光扫描法对重组融合蛋白的抗原识别活性及荧光特性进行测定。结果显示,未融合蛋白、单价及双价串联重组蛋白的半抑制浓度(IC;)分别为12.10、14.10、2.19 ng/m L,表明单价重组蛋白的IC;值与未融合蛋白相似,而双价重组蛋白的IC;值与之相比提高了5.5倍。当浓度为0.7 mg/m L时,两种重组蛋白的荧光强度均可达3000以上,荧光强度与GFP相当,且二价重组蛋白表现出更高的荧光强度;三价串联重组蛋白表现出与抗原的结合活性,但AFB_(1)的阻断活性较差,且荧光强度仅为1700左右。该研究为后续建立基于荧光信号的免疫学检测方法奠定了基础,同时也为优化免疫学检测中纳米抗体亲和活性提供了思路和借鉴。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_(1) 纳米抗体 串联重组 原核表达 酶联免疫吸附法
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气相色谱-质谱法分析乳制品中的三种乳化剂 被引量:1
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作者 罗芸 鄢爱平 +1 位作者 刘翻 万益群 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期183-187,共5页
运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,建立了乳制品中的乳化剂单棕榈酸甘油酯、单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯分析新方法。乳制品中目标物用二氯甲烷提取,经硅烷化试剂(BSTFA+1%TMCS)进行衍生,对提取及衍生化条件进行了优化。在优化条件下... 运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,建立了乳制品中的乳化剂单棕榈酸甘油酯、单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯分析新方法。乳制品中目标物用二氯甲烷提取,经硅烷化试剂(BSTFA+1%TMCS)进行衍生,对提取及衍生化条件进行了优化。在优化条件下,单棕榈酸甘油酯、单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯分别在1~20 mg/L、5~100 mg/L和10~200 mg/L范围具有良好的线性,相关系数R^(2)>0.992,检出限和定量限分别在0.262~1.203 mg/L和0.873~4.010 mg/L范围内。三个目标物在乳制品中的加标回收率为63.5%~111.7%,相对标准偏差小于3%(n=6)。将建立的方法用于鲜奶和酸奶等乳制品中乳化剂单棕榈酸甘油酯、单油酸甘油酯和单硬脂酸甘油酯的测定,结果较好。 展开更多
关键词 气相色谱-质谱法 乳制品 单棕榈酸甘油酯 单油酸甘油酯 单硬脂酸甘油酯
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不同添加剂和发酵天数对残次枣营养成分及链格孢霉毒素含量的影响 被引量:6
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作者 杨劲松 邹婷婷 +3 位作者 许涛 刘翻 刘利林 周小玲 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期3174-3183,共10页
本试验旨在研究植物乳杆菌、鼠李糖脂及丁酸钠3种添加剂对不同发酵时间残次枣营养成分及链格孢霉毒素含量的影响。以残次骏枣为材料,分别添加3种不同浓度的添加剂发酵:1)植物乳杆菌:105、 106、 107CFU/g;2)鼠李糖脂:20、 40、 60 g/kg... 本试验旨在研究植物乳杆菌、鼠李糖脂及丁酸钠3种添加剂对不同发酵时间残次枣营养成分及链格孢霉毒素含量的影响。以残次骏枣为材料,分别添加3种不同浓度的添加剂发酵:1)植物乳杆菌:105、 106、 107CFU/g;2)鼠李糖脂:20、 40、 60 g/kg;3)丁酸钠:40、 80、120 g/kg。对照组不添加任何添加剂,每组12个重复。在发酵0、15、45和60 d取样测定营养成分,并在发酵60 d时检测链格孢霉毒素含量。结果表明:1)与对照组相比,添加3种浓度的植物乳杆菌均可显著提高粗蛋白质(CP)含量(P<0.05),显著降低水分、粗脂肪(EE)含量和pH(P<0.05)。与发酵0 d相比,发酵45、60 d时,水分含量分别增加9.27%、10.24%(P<0.05),发酵15、45、60 d时,CP含量分别增加14.35%、22.49%、23.44%(P <0.05),pH显著下降(P <0.05)。与对照组相比,添加3种浓度的鼠李糖脂可显著提高CP含量(P<0.05),显著降低水分含量、pH(P<0.05)。但在发酵60 d时,添加鼠李糖脂的CP、EE、酸性洗涤纤维(ADF)含量分别下降2.21%(P<0.05)、19.89%(P>0.05)、2.87%(P>0.05)。与对照组相比,添加不同浓度的丁酸钠后,EE含量显著下降(P<0.05),对CP、ADF含量没有显著影响(P>0.05)。但添加丁酸钠发酵60 d后,CP含量升高10.96%(P>0.05),水分、EE含量分别下降27.21%、31.95%(P<0.05),pH显著下降(P<0.05)。2)残次枣中主要含细交链格孢菌酮酸(TeA)及少量链格孢酚(AOH)、链格孢酚甲基乙醚(AME)、腾毒素(TEN)和AAL毒素TA1(ATT-1)。在发酵60 d时,与对照组相比,添加105CFU/g植物乳杆菌使TeA含量降低了81.29%(P <0.05),添加60 g/kg鼠李糖脂使TeA含量降低了85.88%(P<0.05),添加40 g/kg丁酸钠使TeA含量降低了81.60%(P<0.05)。综上所述,添加植物乳杆菌能够提升残次枣的品质(CP含量上升,ADF含量下降);添加鼠李糖脂、丁酸钠对残次枣营养成分影响较小。3种添加剂都能降低TeA含量,鼠李糖脂降低TeA含量效果最好。 展开更多
关键词 添加剂 残次枣 营养成分 细交链孢菌酮酸 链格孢霉毒素
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基于抗多效唑单克隆抗体的酶联免疫吸附方法检测水果中的多效唑 被引量:2
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作者 欧阳秋丽 万益群 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期789-794,共6页
本研究在获得抗多效唑单克隆抗体的基础上,分别通过琥珀酸酐法与4-(溴甲基)-苯甲酸法制备了多效唑检测抗原,经性能分析对比发现,相比基于琥珀酸酐法合成抗原的酶联免疫吸附法(ELISA),基于4-(溴甲基)-苯甲酸法合成抗原的ELISA灵敏度提升... 本研究在获得抗多效唑单克隆抗体的基础上,分别通过琥珀酸酐法与4-(溴甲基)-苯甲酸法制备了多效唑检测抗原,经性能分析对比发现,相比基于琥珀酸酐法合成抗原的酶联免疫吸附法(ELISA),基于4-(溴甲基)-苯甲酸法合成抗原的ELISA灵敏度提升了6倍。实验通过抗原包被液、反应时间、竞争模式等反应条件的优化,建立了基于抗多效唑单克隆抗体的多效唑ELISA快速分析方法,其Ic50值为54 ng/mL,检测限Ic20:13.4 ng/mL^Ic80:212.7 ng/mL,与多效唑类似物的交叉反应均小于2%,具有很高的特异性。对苹果、脐橙的加标回收率分别为83.2%~96.4%、88.9%~94.6%,可用于食品中多效唑残留的快速检测。 展开更多
关键词 多效唑 单克隆抗体 免疫分析 水果
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