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糖基化、磷酸化及乙酰化修饰对α-乳白蛋白致敏性和人肠道菌群的影响 被引量:5
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作者 刘俊 王阳 +3 位作者 熊子豪 陈文美 邵艳红 涂宗财 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期91-97,共7页
α-乳白蛋白(bovineα-lactalbumin,BLA)可引发过敏反应,且与肠道菌群有关,通过不同蛋白质修饰技术对BLA进行改性,探究其对致敏性和人肠道菌群的影响。以糖基化、磷酸化及乙酰化修饰的BLA为研究对象,采用电泳、光谱学和ELISA等技术研究... α-乳白蛋白(bovineα-lactalbumin,BLA)可引发过敏反应,且与肠道菌群有关,通过不同蛋白质修饰技术对BLA进行改性,探究其对致敏性和人肠道菌群的影响。以糖基化、磷酸化及乙酰化修饰的BLA为研究对象,采用电泳、光谱学和ELISA等技术研究其结构和IgE结合能力的变化,并运用16S rRNA测序方法分析人肠道菌群的结构及组成。结果表明:BLA经磷酸化、糖基化和乙酰化修饰后,其结构发生了改变;修饰后BLA的IgE结合能力逐渐降低;16S rRNA高通量测序结果表明,与BLA相比,修饰后的BLA在门水平上降低拟杆菌门的相对丰度,增加厚壁菌门的相对丰度;在属水平上,其能明显增加巨单胞菌属和罗姆布茨菌属的相对丰度,而降低普雷沃氏菌属和粪杆菌属的相对丰度。研究结果表明,糖基化、磷酸化和乙酰化修饰通过破坏BLA的结构降低其致敏性,且影响人肠道微生物的结构,影响程度为乙酰化>糖基化>磷酸化。 展开更多
关键词 Α-乳白蛋白 蛋白质修饰 致敏性 人肠道菌群
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食品体系中糖基化蛋白质结构的表征和检测方法综述 被引量:3
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作者 张鹏 杨一帆 +3 位作者 王辉 涂宗财 沙小梅 胡月明 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2667-2673,共7页
蛋白质和糖是食品的重要组分。在食品加工、贮运过程中,蛋白质分子中的氨基与还原糖的羰基很容易以共价键的形式相结合发生糖基化反应。美拉德式糖基化反应包括早期、中期和末期三个阶段。糖基化反应使得蛋白质分子主链或侧链发生修饰,... 蛋白质和糖是食品的重要组分。在食品加工、贮运过程中,蛋白质分子中的氨基与还原糖的羰基很容易以共价键的形式相结合发生糖基化反应。美拉德式糖基化反应包括早期、中期和末期三个阶段。糖基化反应使得蛋白质分子主链或侧链发生修饰,改变蛋白质结构、静电荷和疏水性等,影响蛋白质主链和侧链基团的化学活性,进而改变蛋白质的理化功能性质,如改善乳化性、起泡性、凝胶性等功能性质,提高抗氧化性等营养特性,降低致敏性,增强抑菌性和贮藏特性等,在食品加工、贮运过程中非常普遍且有着重要意义。糖基化反应过程中引起的蛋白质结构变化是其营养、功能特性改变的重要原因。近年来,化学测定(自由氨基含量、表面疏水性测定等)、光谱(紫外、荧光、傅里叶变换红外光谱等)、色谱(圆二、分子排阻色谱等)、质谱[基质辅助激光解吸附离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MS^(2))等]等多种技术手段被探索用于分析蛋白质糖基化反应过程中的结构变化规律,在糖基化反应机制研究及糖基化反应程度、产物营养功能性质调控等方面起了重要作用。尤其是轨道离子阱质谱(LC-Orbitrap-MS^(2))、傅里叶变换离子回旋共振质谱(LC-FTICR-MS^(2))、氢氘交换-傅里叶变换离子回旋共振质谱(HDX-FTICR-MS^(2))等技术的出现和成熟应用让糖基化位点研究更加深入,可以对各位点的糖分子连接数和糖基化取代程度进行定量分析,使得揭示蛋白质糖基化反应机制变为可能。对基于蛋白质糖基化反应程度、一级、二级、三级结构和官能团结构的表征和检测方法进行综述,旨在为蛋白质糖基化反应的深入研究和在食品加工中的应用提供参考。 展开更多
关键词 食品 蛋白质 糖基化 结构 表征 检测方法
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青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究 被引量:5
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作者 张耀 张露 +1 位作者 刘俊 涂宗财 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期35-42,共8页
以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基... 以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC _(50)为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。 展开更多
关键词 青鱼肉 活性肽 二步酶解 抗氧化活性 抗肿瘤活性
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过热蒸汽对卵类粘蛋白糖基化反应的影响 被引量:1
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作者 温平威 涂宗财 +1 位作者 王辉 胡月明 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第2期629-637,共9页
基于传统热处理方式的蛋白质糖基化反应存在反应时间长、易产生有害糖基化反应末期产物等缺点。以卵类粘蛋白(OVM)-还原糖(1∶0.03,W/W)体系为对象,研究新型高温热处理技术-过热蒸汽对OVM糖基化反应及蛋白质结构的影响。结果表明:短时间... 基于传统热处理方式的蛋白质糖基化反应存在反应时间长、易产生有害糖基化反应末期产物等缺点。以卵类粘蛋白(OVM)-还原糖(1∶0.03,W/W)体系为对象,研究新型高温热处理技术-过热蒸汽对OVM糖基化反应及蛋白质结构的影响。结果表明:短时间(1~3 min)的过热蒸汽(110和120℃)处理即可促使OVM发生糖基化反应,其中不同糖的糖基化反应活性顺序为核糖(五碳糖)>葡萄糖(六碳糖)>乳糖(二糖),糖基化反应后蛋白质的自由氨基含量由19.97 mg·mL^(-1)分别最低降为2.93,5.04和6.69 mg·mL^(-1)。不同条件处理下OVM糖基化产物的紫外光谱未见显著的波峰位移,但最大吸收峰峰值发生一定的变化,其中大部分为降低的,说明OVM的球蛋白分子结构发生变化,还原糖的修饰掩盖了OVM上的发色基团(苯丙氨酸和酪氨酸),其中核糖糖基化反应下效果最为显著。糖基化反应后,荧光光谱峰强度显著降低,其中核糖糖基化反应降低率最大,其次为葡萄糖和乳糖,表明蛋白质内部暴露的荧光基团去折叠导致荧光猝灭。此外,还原糖作为猝灭剂渗透入蛋白质框架中,与荧光基团反应,抑制其荧光发射。红外光谱分析发现经过热蒸汽处理后OVM糖基化产物3300 cm-1处的峰变窄,表明N—H的含量减少或者发生反应,从而使N—H伸缩振动频率降低。2000~2500和500 cm-1附近出现了较多杂峰,表明蛋白质发生降解或者有糖基化反应中间产物生成。MALDI TOF MS分析表明热蒸汽处理下,OVM-核糖体系、OVM-葡萄糖体系各有约6个糖基化反应位点,OVM-乳糖体系有约2个糖基化反应位点。糖基化反应后有OVM二聚体、三聚体和多聚体形成,其中核糖和葡萄糖与OVM反应产生的聚合物最为显著,乳糖与OVM反应产生的聚合物较少。该研究可为短时微糖糖基化反应及过热蒸汽在食品加工中的应用提供一定的技术和理论指导。 展开更多
关键词 过热蒸汽 糖基化 光谱分析 卵类粘蛋白
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冬夏季节对猪皮制备的明胶凝胶特性和溯源性的影响 被引量:4
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作者 沙小梅 王光耀 +2 位作者 胡姿姿 胡文芸 涂宗财 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第16期31-39,共9页
为探究冬夏两季猪皮提取的明胶在凝胶特性和溯源方面的差异,利用HPLC串联线性离子阱高分辨率质谱技术(linear ion trap/orbitrap high-resolution mass spectrometry,LTQ/Orbitrap MS/MS)、剪切应力流变仪和质构分析仪进行分析。结果显... 为探究冬夏两季猪皮提取的明胶在凝胶特性和溯源方面的差异,利用HPLC串联线性离子阱高分辨率质谱技术(linear ion trap/orbitrap high-resolution mass spectrometry,LTQ/Orbitrap MS/MS)、剪切应力流变仪和质构分析仪进行分析。结果显示,夏季猪皮明胶在凝胶强度、胶融温度和胶凝温度上均高于冬季猪皮明胶,说明不同季节猪皮提取的明胶在凝胶特性方面存在差异。同时,HPLC-LTQ/Orbitrap MS/MS分析表明,不同季节的猪皮明胶包含独有的特征多肽,通过与已知的理论序列数据库相对比,分别在冬夏两季猪皮明胶中找到22和36条独有的特征多肽,共有的特征多肽有44条。这44条共有特征多肽具有稳定性,不会随着季节变化而改变,能够作为猪皮明胶溯源的依据,提高猪皮明胶溯源的准确性。 展开更多
关键词 猪皮明胶 季节 溯源性 凝胶特性
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不同生境来源的草鱼肌肉营养品质比较 被引量:16
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作者 李忠莹 丁红秀 +1 位作者 张露 涂宗财 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期133-139,共7页
为了解不同生境来源草鱼肉营养品质的差异,选取了来源于河流、湖泊、高密度池塘养殖与低密度水库养殖4种不同生境草鱼,对其肌肉营养成分含量、颜色、质构特性、氨基酸、脂肪酸的组成与含量进行测定和比较分析。结果显示,2种养殖生境来... 为了解不同生境来源草鱼肉营养品质的差异,选取了来源于河流、湖泊、高密度池塘养殖与低密度水库养殖4种不同生境草鱼,对其肌肉营养成分含量、颜色、质构特性、氨基酸、脂肪酸的组成与含量进行测定和比较分析。结果显示,2种养殖生境来源的草鱼肌肉脂肪含量显著高于2种自然生境来源的草鱼(P<0.05);肌肉硬度显著低于2种自然生境来源的草鱼(P<0.05);肌肉色差值a*值显著低于自然生境(P<0.05),b*值显著高于自然生境(P<0.05)。4种生境来源的草鱼肌肉中均以谷氨酸含量最高,鲜味氨基酸总量没有显著差异(P>0.05),高密度养殖生境草鱼肌肉氨基酸总量、必需氨基酸总量和非必需氨基酸总量较高;2种养殖生境来源的草鱼氨基酸评价较好,必需氨基酸指数值分别为96.61和90.13,高于2种自然生境来源的草鱼。4种生境草鱼肌肉均检测出18种脂肪酸,各种脂肪酸含量差异显著(P<0.05)。该研究表明,不同生境来源草鱼肌肉的营养品质差异显著,2种养殖生境草鱼氨基酸组成比自然生境的更合理,草鱼养殖过程中可以适当补充苏氨酸、甲硫氨酸和半胱氨酸,以满足草鱼生长发育的需求。 展开更多
关键词 草鱼肌肉 营养成分 质构特性 氨基酸 脂肪酸
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3-羟基糖取代对槲皮素与人血清蛋白相互作用的影响 被引量:1
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作者 傅俏琴 张露 +2 位作者 贾晓燕 马天新 涂宗财 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期70-77,共8页
黄酮类化合物是许多植物性食品的主要功能活性成分,黄酮与蛋白的相互作用会直接影响其在人体的转运与代谢。该文以槲皮素(quercetin,Que)、异槲皮素(quercetin-3-O-glucoside,Q3G)、槲皮素-3-O-鼠李糖苷(quercetin-3-O-rhamnoside,Q3Rh... 黄酮类化合物是许多植物性食品的主要功能活性成分,黄酮与蛋白的相互作用会直接影响其在人体的转运与代谢。该文以槲皮素(quercetin,Que)、异槲皮素(quercetin-3-O-glucoside,Q3G)、槲皮素-3-O-鼠李糖苷(quercetin-3-O-rhamnoside,Q3Rh)、槲皮素-3-O-木糖苷(quercetin-3-O-xyloside,Q3X)和芦丁(quercetin-3-O-rutinoside,Q3Ru)为对象,通过荧光光谱和分子对接技术研究3-羟基糖取代对槲皮素与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)相互作用的影响。结果表明,5种黄酮都是通过静态方式猝灭HSA的内源荧光,并以自发的放热过程与HSA结合形成稳定的复合物。3-羟基糖取代会降低槲皮素对HSA的荧光猝灭效果和与HSA的结合能力,Q3Ru和Q3X的荧光猝灭效果最弱,Q3G的结合能力最弱。同步荧光分析发现,Que、Q3X、Q3Ru、Q3G和Q3Rh会使HSA中色氨酸微环境的极性增加,糖取代可增强其影响,其中葡萄糖的效果最强。热力学和分子对接结果表明,Que、Q3X、Q3Rh、Q3G、Q3Ru通过疏水相互作用、氢键和范德华力结合在人血清蛋白(human serum albumin,HSA)的疏水腔中,并分别形成了4、6、5、2、4个氢键,糖取代不会改变化合物与HSA的结合区域和作用力类型,但会改变其具体的相互作用氨基酸。研究结果有利于解释不同糖取代食品营养成分与蛋白质相互作用差异,及其在体内的转运与代谢,为其构效关系分析提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 槲皮素 糖取代 人血清白蛋白 荧光光谱 分子对接
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