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研究生“现代动物遗传育种原理与技术”课程的教学思考与探讨 被引量:4
1
作者 刘吉英 《黑龙江动物繁殖》 2021年第2期53-55,共3页
"现代动物遗传育种原理与技术"是为农业硕士畜牧学专业学位研究生开设的基础课之一,在畜牧学专业研究生的课程体系中占有重要的一席之地。随着现代技术的发展,动物遗传育种技术不断更新,要求教师在教学过程中不断融入新知识... "现代动物遗传育种原理与技术"是为农业硕士畜牧学专业学位研究生开设的基础课之一,在畜牧学专业研究生的课程体系中占有重要的一席之地。随着现代技术的发展,动物遗传育种技术不断更新,要求教师在教学过程中不断融入新知识、新技术,从而不断提高研究生知识储备。文章从课程建设、教学方法改革等方面出发进行探讨,以期提高本门研究生课程的教学质量。 展开更多
关键词 动物遗传育种 研究生教育 课程建设 教学方法 教学质量
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研究生基因工程实验课程教学分析与思考
2
作者 罗刚 王学杨 王俊 《黑龙江动物繁殖》 2022年第2期55-59,共5页
基因工程是一门系统性和实操性很强的学科之一,实验课是理论课的延伸,也是生命科学人才培养的重要环节。面对研究型人才培养需求的增加,文章通过设计实验课程内容,选用不同的教学方法和优化课程评价体系三个方面改进实验课程的教学方案... 基因工程是一门系统性和实操性很强的学科之一,实验课是理论课的延伸,也是生命科学人才培养的重要环节。面对研究型人才培养需求的增加,文章通过设计实验课程内容,选用不同的教学方法和优化课程评价体系三个方面改进实验课程的教学方案,以达到激发学生科研兴趣、强化学生实验操作技能、培养学生系统性分析问题和解决问题能力及创新思维,提高研究生培养质量的目的。 展开更多
关键词 研究生 基因工程实验 教学 改革
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藏鸡二元杂交组合生产性能及血液生理指标分析 被引量:6
3
作者 胡玉萍 王星果 +4 位作者 沈曼曼 曲亮 窦套存 郭军 王克华 《中国家禽》 北大核心 2020年第6期25-30,共6页
研究旨在通过藏鸡杂交确定其对藏鸡生产性能的提高效果。以藏鸡纯系及其他2个地方鸡培育品系为素材,组成3个藏鸡二元杂交组合和2个纯系组合,测定5个组合13周龄公鸡屠宰性能、肉品质和血液生理指标及52周龄母鸡产蛋性能和40周龄蛋品质。... 研究旨在通过藏鸡杂交确定其对藏鸡生产性能的提高效果。以藏鸡纯系及其他2个地方鸡培育品系为素材,组成3个藏鸡二元杂交组合和2个纯系组合,测定5个组合13周龄公鸡屠宰性能、肉品质和血液生理指标及52周龄母鸡产蛋性能和40周龄蛋品质。结果显示:杂交组合活重大于藏鸡纯系,屠宰率高于C3纯系,52周龄产蛋率和入舍鸡产蛋数均高于藏鸡纯系,40周龄蛋重、蛋白高度、哈氏单位、蛋壳强度也高于藏鸡纯系,红细胞分布宽度等高于C3纯系。综合分析表明,含藏鸡血缘的杂交鸡性能与藏鸡纯系和C3纯系相比有一定优势,且血液生理指标优于C3纯系,研究结果为藏鸡杂交利用奠定基础。 展开更多
关键词 藏鸡 杂交组合 生产性能 血液生理指标
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家蚕2龄不眠蚕突变体的发现及遗传特性分析 被引量:3
4
作者 赵巧玲 吴凡 +2 位作者 夏定国 裘智勇 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期423-430,共8页
在家蚕品种C603中发现了一种新的不眠蚕突变体。该突变体幼虫在2龄将眠初期体表有光泽,但进食量减少,蚕体基本不发育,且持续6~8 d仍然不能入眠和蜕皮,不能正常发育至3龄期,并终因体能耗尽陆续死亡。将该突变体命名为2龄不眠蚕(non-molt... 在家蚕品种C603中发现了一种新的不眠蚕突变体。该突变体幼虫在2龄将眠初期体表有光泽,但进食量减少,蚕体基本不发育,且持续6~8 d仍然不能入眠和蜕皮,不能正常发育至3龄期,并终因体能耗尽陆续死亡。将该突变体命名为2龄不眠蚕(non-molting at the 2nd instar,nm2)。遗传分析显示,正常情况下发生突变体的蛾区中正常型个体与突变个体的比例约3∶1,有纯合致死现象,因此认为该突变体受1个隐性单基因控制。但是,不同季节饲养该突变系统出现的性状分离比不太稳定;与正常型品种杂交的F2、BC1F和BC1M世代其突变性状分离比率远低于25%。2龄第2天添食蜕皮激素能拯救2龄不眠蚕向正常发育转变,但不能改变不眠蚕的遗传特性。在nm2突变体检测到蜕皮激素合成相关基因cyp307a2的表达,而在与该突变体表型相似的nm-g突变体中未检测到该基因的表达,因此判断nm2是一个新的突变体,并初步推测蚕体内蜕皮激素水平低是nm2突变体产生的重要生理因素。 展开更多
关键词 家蚕 2龄不眠蚕 突变体 隐性遗传 蜕皮激素
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Bmo-miR-2755*对丝素蛋白基因BmFib-L和BmP25表达的调控作用 被引量:3
5
作者 范洋洋 陈晨 +4 位作者 王欣 宋菲 唐顺明 易咏竹 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期847-853,共7页
为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因(BmFib-L)和P25蛋白基因(BmP25)有潜在调控作用的Bmo-miR-2755*。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755*及其靶基因BmFib-L、BmP2... 为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因(BmFib-L)和P25蛋白基因(BmP25)有潜在调控作用的Bmo-miR-2755*。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755*及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4~5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平,结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体,构建Bmo-miR-2755*的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfpprimiR-2755*-SV40];以pGL3.0-Basic质粒为载体,分别构建BmFib-L 3'UTR、BmP25 3'UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3'UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3'UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,分别将构建的Bmo-miR-2755*重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,明确Bmo-miR-2755*可显著下调BmFib-L基因的表达,并能上调BmP25基因的表达,但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。 展开更多
关键词 miRNA 家蚕 Bmo-miR-2755* 丝素轻链基因 P25基因 表达调控
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Bmo-miR-375-3p对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L表达的调控作用 被引量:1
6
作者 范洋洋 钱平 +3 位作者 沈兴家 王欣 蒋涛 唐顺明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1043-1049,共7页
【目的】探究家蚕Bombyx mori miRNAs对丝素蛋白轻链基因(fibroin light chain gene,Bm FibL)和P25蛋白基因Bm P25表达的调控作用。【方法】分别以Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR为靶序列,应用在线预测软件RNAhybrid从前期家蚕4和5龄... 【目的】探究家蚕Bombyx mori miRNAs对丝素蛋白轻链基因(fibroin light chain gene,Bm FibL)和P25蛋白基因Bm P25表达的调控作用。【方法】分别以Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR为靶序列,应用在线预测软件RNAhybrid从前期家蚕4和5龄幼虫后部丝腺(posterior silk gland)sRNA高通量测序获得的29个差异表达bmo-miRNAs中,筛选对Bm Fib-L和Bm P25具有调控作用的候选bmo-miRNAs;采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平分析候选bmo-miRNAs及其靶基因Bm Fib-L和Bm P25在4和5龄幼虫期以及5龄第3天幼虫不同组织的表达水平;利用双荧光报告基因检测系统在家蚕细胞Bm N中验证候选bmo-miRNAs对Bm Fib-L和Bm P25表达的调控作用。【结果】筛选到一个在Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR上都有靶位点的bmo-miR-375-3p(曾称bmo-miR-375*)。在后部丝腺中bmo-miR-375-3p和其预测靶基因Bm Fib-L和Bm P25都有较高的表达水平,提示bmo-miR-375-3p具备调控Bm Fib-L和Bm P25表达的时空条件。miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm Fib-L 3'UTR的萤火虫荧光素酶(luciferase)报告基因(luc)表达载体共转染Bm N细胞,报告基因luc的表达水平显著下降;而在miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm P25 3'UTR的luc表达载体共转染Bm N细胞中报告基因luc的表达水平下降不显著。【结论】miR-375-3p显著下调Bm Fib-L基因的表达,而对Bm P25基因的表达无明显调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 MIRNA bmo-miR-375-3p 丝素轻链基因 P25基因 基因表达调控
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家蚕bmo-miR-34对BmE74基因表达的调控 被引量:1
7
作者 王欣 范洋洋 +4 位作者 陈晨 谢雨辰 蒋涛 汪生鹏 沈兴家 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期51-57,共7页
为了研究家蚕bmo-miR-34(一类高度保守的miRNA)对E74基因(BmE74)的表达调控作用,首先利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22进行结合位点预测,然后从家蚕丝腺组织中克隆了bmo-miR-34前体序列,分别构建bmo-miR-34表达载体和靶基因BmE74 3&#... 为了研究家蚕bmo-miR-34(一类高度保守的miRNA)对E74基因(BmE74)的表达调控作用,首先利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22进行结合位点预测,然后从家蚕丝腺组织中克隆了bmo-miR-34前体序列,分别构建bmo-miR-34表达载体和靶基因BmE74 3'UTR重组表达载体,利用双报告基因荧光检测系统在细胞水平研究bmo-miR-34对BmE74基因的转录后调控作用。生物信息学预测结果表明,BmE74 3'UTR具有bmo-miR-34潜在结合位点;体外转染试验结果显示,与对照相比,转染bmo-miR-34重组质粒的细胞荧光素酶活性极显著下调(P<0.01),但是当加入人工合成的bmo-miR-34抑制物后荧光素酶活性显著上调(P<0.01)。说明bmo-miR-34对BmE74的转录后表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 miR-34 家蚕 BmE74基因 表达调控
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Bmo-miR-2771对家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用 被引量:1
8
作者 钱平 蒋涛 +5 位作者 王欣 宋菲 陈晨 范洋洋 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期826-831,共6页
微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库... 微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库中获得全部成熟体Bmo-miR,通过生物信息学分析筛选到一个对BmS er-1有潜在调控作用的BmomiR,命名为Bmo-miR-2771。设计茎环引物,采用半定量RT-PCR方法检测Bmo-miR-2771及其预测靶基因BmS er-1在家蚕5龄3 d幼虫头部、脂肪体、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、中肠等组织器官以及血淋巴细胞中的表达水平,结果显示Bmo-miR-2771特异性地在中部丝腺中表达,并且靶基因BmS er-1在中部丝腺的相对表达量也明显高于其他组织。将构建的表达BmomiR-2771的重组质粒pcD NA3.0(ie1-egfp-pri-miR-2771-SV40)和表达BmS er-1 3'-UTR的重组质粒pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTRSV40)共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,并以共转染pcD NA3.0(ie1-egfp-SV40)和pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTR-SV40)的BmN细胞为阳性对照,以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,检测荧光素酶活性,结果显示实验组的荧光素酶活性相对于阳性对照组显著降低(P<0.05),从细胞水平证实了Bmo-miR-2771对BmS er-1基因表达具有负调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 丝胶蛋白基因Ser-1 微小RNA Bmo-miR-2771 转录后调控 半定量RT-PCR 双荧光素酶报告基因系统
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对丝腺细胞因子SGF-1具有调控作用的家蚕miRNAs功能研究 被引量:1
9
作者 王欣 陈晨 +4 位作者 范洋洋 谢雨辰 钱平 唐顺明 沈兴家 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第3期53-58,共6页
为了研究家蚕miRNAs对丝腺细胞因子SGF-1表达的调控作用,以SGF-1为靶基因,利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22预测对SGF-1具有潜在调控作用的候选家蚕miRNAs,经茎环PCR鉴定后分别构建重组表达载体,在细胞水平研究家蚕miRNAs的功能。结... 为了研究家蚕miRNAs对丝腺细胞因子SGF-1表达的调控作用,以SGF-1为靶基因,利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22预测对SGF-1具有潜在调控作用的候选家蚕miRNAs,经茎环PCR鉴定后分别构建重组表达载体,在细胞水平研究家蚕miRNAs的功能。结果表明,转染了bmo-miR-305*重组质粒组的luc荧光素酶活性比未转染时极显著下调(P<0.01);转染了bmo-miR-3327*重组质粒组的luc荧光素酶活性比未转染时极显著下调(P<0.01);再各自转染了inhibitors后荧光蛋白表达量均上调(P<0.05)。说明SGF-1 3'UTR上存在bmo-miR-305*和bmo-miR-3327*的结合位点,且bmo-miR-305*和bmo-miR-3327*对SGF-1的转录后表达具有一定抑制作用。 展开更多
关键词 家蚕 MIRNAS 丝腺转录因子 SGF-1 功能鉴定
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家蚕滞育关联基因的研究进展 被引量:2
10
作者 陈艳荣 朱娟 沈兴家 《中国蚕业》 2021年第1期36-45,共10页
昆虫滞育是受基因控制与外界环境多种因素影响的生物学过程,涉及基因众多,调控网络复杂,目前其分子机制仍未清晰。国内外滞育调控的相关研究多数基于家蚕、果蝇、麻蝇等模式昆虫。介绍了家蚕滞育关联基因的研究现状及进展,包括分类、生... 昆虫滞育是受基因控制与外界环境多种因素影响的生物学过程,涉及基因众多,调控网络复杂,目前其分子机制仍未清晰。国内外滞育调控的相关研究多数基于家蚕、果蝇、麻蝇等模式昆虫。介绍了家蚕滞育关联基因的研究现状及进展,包括分类、生理功能、基因间互作、部分基因涉及的信号通路及研究热点等,为促进其在农林害虫的防治途径或天敌保护利用等方面的应用提供参考。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 滞育关联基因 生物钟基因 内分泌基因
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家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析 被引量:2
11
作者 朱娟 谢雨辰 +3 位作者 陈艳荣 唐顺明 易咏竹 沈兴家 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期391-397,共7页
【目的】明确家蚕Bombyx mori滞育关联基因山梨醇脱氢酶基因BmSDH(BmSDH-1,BmSDH-2a和BmSDH-2b)的转录特性。【方法】用5'RACE技术确定家蚕3个BmSDH基因的转录起始位点。利用PCR技术克隆3个BmSDH基因约1 kb及BmSDH-2a不同长度的启... 【目的】明确家蚕Bombyx mori滞育关联基因山梨醇脱氢酶基因BmSDH(BmSDH-1,BmSDH-2a和BmSDH-2b)的转录特性。【方法】用5'RACE技术确定家蚕3个BmSDH基因的转录起始位点。利用PCR技术克隆3个BmSDH基因约1 kb及BmSDH-2a不同长度的启动子区序列,分别构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的载体pGL3-BmSDH-P-luc,并与pRL-CMV报告质粒(含海肾荧光素酶报告基因)共转染家蚕BmN细胞,通过双荧光素酶检测系统检测BmSDH基因启动子活性;分别在BmN细胞培养基中添加昆虫保幼激素、蜕皮激素和滞育激素,通过双荧光素酶检测系统检测不同浓度激素处理对BmSDH-2a基因启动子活性的影响。【结果】BmSDH-1的转录起始位点为A(-41),BmSDH-2a的转录起始位点为C(-41),BmSDH-2b的转录起始位点为A(-40)(翻译起始位点为+1)。双荧光素酶检测结果表明,BmSDH-2a启动子活性极显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子,BmSDH-2a 355 bp长度片段的启动子活性极显著高于674 bp和1 117 bp长度片段。用不同浓度滞育激素处理BmN细胞后,BmSDH-2a的1 117 bp启动子活性随着滞育激素浓度的升高有上升的趋势,当浓度高于100 ng/mL时启动子活性有所降低但仍保持在较高水平;用保幼激素进行处理后,随着激素浓度的升高启动子活性逐渐降低;蜕皮激素处理后,0.1 ng/mL激素显著增强启动子活性,当激素浓度继续升高启动子活性逐渐降低。【结论】确定了BmSDH基因的转录起始位点。BmSDH-2a启动子活性显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子,一定浓度的蜕皮激素能显著提高BmSDH-2a启动子活性。研究结果有助于阐明BmSDH基因在家蚕滞育中的功能。 展开更多
关键词 家蚕 启动子 山梨醇脱氢酶 滞育 转录起始位点 表达调控
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家蚕滞育生理及其分子调控机制研究进展 被引量:3
12
作者 蒋涛 沈兴家 +1 位作者 唐顺明 钱平 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1031-1038,共8页
滞育是昆虫等动物应对周期性不利环境表现出的一种发育停滞的生理过程。家蚕既是重要的经济昆虫,也是鳞翅目模式生物,研究家蚕滞育生理及分子调控机制,对于理解昆虫的发育生理与适应性进化以及制定农林害虫防治策略等都有重要的理论和... 滞育是昆虫等动物应对周期性不利环境表现出的一种发育停滞的生理过程。家蚕既是重要的经济昆虫,也是鳞翅目模式生物,研究家蚕滞育生理及分子调控机制,对于理解昆虫的发育生理与适应性进化以及制定农林害虫防治策略等都有重要的理论和实践意义。国内外学者的研究证实,家蚕滞育是环境因素与遗传因素共同作用的结果,当环境信号被蚕体感知后转化形成滞育信号,再经复杂的信号转导途径,通过激素调节和营养物质储备与代谢的调控,使家蚕体内建立起适应滞育的生理代谢体系。近年来的研究进一步表明,家蚕滞育激素受体蛋白、热休克蛋白以及磷酸化作用参与的基因表达调控是家蚕滞育重要的分子调控机制,与滞育的起始、维持、终止密切相关。本文系统概述了上述家蚕滞育生理机制与分子调控机制的研究成果。 展开更多
关键词 家蚕 昆虫 滞育 生理基础 分子机制
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家蚕追寄蝇谷胱甘肽硫转移酶GST1-1的特性分析及其在灭蚕蝇胁迫下的活性变化 被引量:3
13
作者 王闪闪 王耒耒 +7 位作者 陈诺婧依 Zufan Bekele Kassa 张彩红 王梅仙 朱娟 沈兴家 沈中元 唐顺明 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期198-208,共11页
家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans Wiedemann)寄生家蚕幼虫导致蝇蛆病的发生。谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一类多功能酶家族,对昆虫在解毒、杀虫剂抗性、氧化应激保护等方面起到重要的作用。本文以家蚕追寄蝇为... 家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans Wiedemann)寄生家蚕幼虫导致蝇蛆病的发生。谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一类多功能酶家族,对昆虫在解毒、杀虫剂抗性、氧化应激保护等方面起到重要的作用。本文以家蚕追寄蝇为实验材料,使用RACE技术,获得了家蚕追寄蝇谷胱甘肽硫转移酶基因的全长cDNA序列,将其命名为EsGST1-1(GenBank:OK104864)。EsGST1-1全长813 bp,包含一段627 bp完整开放阅读框(ORF),编码208个氨基酸残基,分子质量为23.58 kD,等电点为5.498,该蛋白属于GST的Delta类家族。序列比对结果显示,EsGST1-1与丝光绿蝇(Lucilia sericata)的GST基因亲缘关系最近。进一步检测了家蚕追寄蝇EsGST1-1基因在不同发育时期和不同组织的表达模式,结果显示在卵产后0 h、幼虫脂肪体和表皮、蛹期第6天以及雌雄成虫的腹部与足部中EsGST1-1高量表达。此外,利用原核体外诱导表达获得了EsGST1-1的重组蛋白。酶活试验结果显示EsGST1-1酶活性为0.820 4 U/mg。热稳定性实验结果显示EsGST1-1在30~40℃时活性最高,随温度的升高活性下降。对灭蚕蝇胁迫下的GST活性测定发现:杀虫活性呈剂量依赖效应;寄蝇谷胱甘肽硫转移酶活力与灭蚕蝇剂量呈负相关;EsGST1-1基因的表达量与灭蚕蝇剂量呈负相关。上述研究结果为进一步开发防治蝇蛆病新型药剂提供基础信息。 展开更多
关键词 家蚕追寄蝇 GST1-1 基因克隆 酶学特性 活性分析
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二化性家蚕滞育、非滞育和即时浸酸卵中糖代谢相关酶mRNA水平和活性的变化 被引量:3
14
作者 许瑾 蒋涛 +6 位作者 薛鹏 沈广胜 黄静怡 朱娟 王梅仙 唐顺明 沈兴家 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1431-1440,共10页
【目的】探究家蚕Bombyx mori胚胎发育早期卵内糖代谢与滞育的关系。【方法】以家蚕二化性品种"秋丰"活化越年卵为材料,一部分于17℃暗催青,孵化后常规饲养,制备非滞育命运卵(ND);另一部分于25℃明催青,孵化后常规饲养,制备... 【目的】探究家蚕Bombyx mori胚胎发育早期卵内糖代谢与滞育的关系。【方法】以家蚕二化性品种"秋丰"活化越年卵为材料,一部分于17℃暗催青,孵化后常规饲养,制备非滞育命运卵(ND);另一部分于25℃明催青,孵化后常规饲养,制备滞育命运卵(DD),再用盐酸溶液处理部分DD卵制备即时浸酸卵(IA)。在卵产下或浸酸后0,2,6,12,24,48,72和96 h分别取样,利用qRT-PCR测定家蚕卵中己糖激酶(hexokinase,HK)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFK)、山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase,SDH)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和海藻糖酶(trehalase,TRE)5种糖代谢相关酶基因的mRNA表达水平,利用紫外-可见分光光度法测定家蚕卵中这5种酶的活性。【结果】家蚕糖酵解途径关键酶己糖激酶(BmHK)和磷酸果糖激酶(BmPFK),以及糖分解代谢关键酶山梨醇脱氢酶(BmSDH-1)和海藻糖酶(BmTRE)在ND和IA中的mRNA水平和活性均普遍高于在DD中的;而糖异生途径相关的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(BmPEPCK)在DD中的mRNA水平和活性均高于在ND和IA中的。【结论】结果提示,DD因胚胎滞育的需要,胚胎发育早期卵内糖代谢以能量和物质的贮存为主;而ND和IA由于胚胎发育进程较快,糖代谢以物质分解代谢为主。本研究初步揭示了家蚕卵内糖代谢与滞育的关系,有助于更好地理解家蚕滞育的分子机制。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 糖代谢 转录水平 酶活性
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家蚕bmo-miR-217对核型多角体病毒(BmNPV)lef-1基因表达的调控作用 被引量:2
15
作者 王明磊 何芬 +4 位作者 王平阳 唐顺明 夏定国 沈兴家 赵巧玲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期217-224,共8页
昆虫的单链小分子RNA(microRNAs)不仅通过与自身的靶基因互补进行转录后水平调控,从而参与重要的生命过程,并且还可以与病原体靶基因相互作用,在免疫防御方面发挥重要功能。给家蚕5龄眠起幼虫接种家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)后72 h,收... 昆虫的单链小分子RNA(microRNAs)不仅通过与自身的靶基因互补进行转录后水平调控,从而参与重要的生命过程,并且还可以与病原体靶基因相互作用,在免疫防御方面发挥重要功能。给家蚕5龄眠起幼虫接种家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)后72 h,收集蚕体血淋巴提取总RNA用于高通量测序,经克隆验证获得一条由Bm NPV诱导上调表达的家蚕miRNA(bmo-miR-217),用生物信息学方法预测到bmo-miR-217对应的一个病毒靶基因为lef-1。构建bmo-miR-217及Bm NPV lef-1 3'-UTR的表达载体,并共转染家蚕卵巢培养细胞Bm N,于48 h后通过检测细胞的双荧光素酶相对活性,显示出bmo-miR-217可显著下调Bm NPV lef-1基因的表达(P<0.05)。已知lef-1是Bm NPV侵染复制的必需基因之一,因此抑制其表达是家蚕先天免疫的一种有效策略。 展开更多
关键词 家蚕 微小RNA bmo-miR-217 家蚕核型多角体病毒 lef-1基因
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家蚕己糖激酶基因进化分析及其多转录本在胚胎早期发育过程中的表达特性 被引量:3
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作者 许瑾 邵云华 +5 位作者 黄静怡 沈广胜 朱娟 王梅仙 唐顺明 沈兴家 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1701-1708,共8页
【目的】明确家蚕(Bombyx mori)二化性品系胚胎早期发育过程中己糖激酶基因(BmHK)不同转录本的表达特性,为深入探究BmHK基因各转录本的生物学功能及揭示其在家蚕胚胎早期发育中的作用机制提供理论依据。【方法】从NCBI检索并下载家蚕等1... 【目的】明确家蚕(Bombyx mori)二化性品系胚胎早期发育过程中己糖激酶基因(BmHK)不同转录本的表达特性,为深入探究BmHK基因各转录本的生物学功能及揭示其在家蚕胚胎早期发育中的作用机制提供理论依据。【方法】从NCBI检索并下载家蚕等12种昆虫的HK氨基酸序列,采用MEGA 7.0的邻接法(NJ)构建基于HK氨基酸序列相似性的系统发育进化树。以家蚕二化性品系秋丰活化越年蚕卵(丙2胚胎)为材料,分别制备非滞育命运卵(ND)、滞育命运卵(DD)和即时浸酸卵(IA),采用实时荧光定量PCR检测BmHK基因各转录本在家蚕二化性品系胚胎早期发育过程中的表达特性。【结果】BmHK基因属于HSP70-actin家族,存在4个不同的转录本,其长度分别为4610、4608、2818和1520 bp,依次命名为BmHK-a、BmHK-b、BmHK-c和BmHK-d。BmHK-a在3种蚕卵胚胎早期发育过程中整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,IA蚕卵中的BmHK-a相对表达量于发育2 h达峰值,在ND蚕卵和DD蚕卵中于发育48 h达峰值,此后其表达快速下调,至发育96 h均处于较低水平;BmHK-b在3种蚕卵中的表达水平整体上表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,3种蚕卵中的BmHK-b相对表达量变化趋势基本一致,均随发育时间推移呈逐渐上升趋势;BmHK-c在3种蚕卵中的表达差异明显,初产蚕卵中已有较高的表达水平,受精后迅速升高,至发育72 h后BmHK-c在3种蚕卵中的相对表达量再次升高;BmHK-d在3种蚕卵中的相对表达量整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为ND蚕卵>IA蚕卵>DD蚕卵,但IA蚕卵中BmHK-d表达峰值出现的时间早于DD蚕卵和ND蚕卵。【结论】BmHK-a和BmHK-d主要在家蚕胚胎早期发育(产卵或浸酸后3 d)过程中发挥重要作用;BmHK-b虽然也参与家蚕胚胎早期发育过程,但不是主要的糖代谢相关酶;BmHK-c与家蚕胚胎早期发育关系密切,通过糖酵解为胚胎发育提供能量。 展开更多
关键词 家蚕 己糖激酶(HK) 转录本 滞育 糖酵解 胚胎早期发育
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强健优质家蚕新品种丝雨二号的育成 被引量:3
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作者 赵巧玲 吴怀民 +4 位作者 裘智勇 楼黎静 夏定国 钱文春 刘震玲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期672-677,共6页
为适应高效省力化蚕业生产发展需求,培育健康体质和优良茧丝质均衡的家蚕新品种,采用杂交育种方法进行亲本筛选、性状选择及杂交组配,通过实验室比较鉴定和农村比较鉴定同时进行的培育模式,培育出综合性状优良的家蚕新品种丝雨二号。其... 为适应高效省力化蚕业生产发展需求,培育健康体质和优良茧丝质均衡的家蚕新品种,采用杂交育种方法进行亲本筛选、性状选择及杂交组配,通过实验室比较鉴定和农村比较鉴定同时进行的培育模式,培育出综合性状优良的家蚕新品种丝雨二号。其体质强健、发育整齐、丝质较优、稳产性好、繁育性能好。该品种的全国秋蚕期实验室共同鉴定成绩为:四龄起蚕虫蛹率92.44%,万蚕产茧量18.38kg,洁净95.49分,解舒率79.26%,鲜毛茧出丝率18.69%,茧层率23.68%,茧丝长1230m;秋蚕期生产鉴定成绩中的每盒种产茧量38.67kg;其原种公斤茧制种量在4.2张以上。丝雨二号于2015年9月2日通过国家农作物品种审定委员会审定,适宜在长江流域、黄河流域秋季饲养。 展开更多
关键词 家蚕 新品种 优质 强健 丝雨二号
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家蚕miR-0047对丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用研究 被引量:2
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作者 钱平 蒋涛 +4 位作者 何平 陈晨 唐旭东 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期922-928,共7页
对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、... 对家蚕中部丝腺小RNA高通量测序获得若干新miRNA,生物信息学分析发现Bmo-miR-0047可能对家蚕丝胶蛋白基因Bm Ser-1有调控作用。设计特异性茎环引物,利用半定量RT-PCR检测分析家蚕5龄3 d幼虫丝腺(包括前、中、后部丝腺)、头部、脂肪体、表皮、中肠、马氏管、精巢/卵巢、血淋巴细胞和气管等12个器官组织中Bmo-miR-0047的表达情况。结果显示,中部丝腺中Bmo-miR-0047的相对表达量明显高于其他组织,说明在家蚕5龄幼虫期Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因的表达调控存在时空特异性。为了进一步分析Bmo-miR-0047对Bm Ser-1基因表达的调控作用,构建重组表达载体pc DNA3.0(ie1-egfp-pri-miR-0047-SV40)和p GL3(A3-luc-Bm Ser-1 3'UTR-SV40),并以海肾荧光素酶报告质粒pRL-CMV为内参,利用家蚕卵巢培养细胞Bm N进行共转染。转染后检测发现实验组Bm N细胞中的荧光素酶活性与对照组相比显著减弱,表明Bmo-miR-0047在体外培养细胞中对Bm Ser-1基因的表达具有负调控作用。 展开更多
关键词 家蚕 微小RNA Bmo-miR-0047 丝胶蛋白基因Ser-1 转录后调控
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家蚕淡红卵突变体(rep-1)的发现及卵色相关基因MFS的结构分析 被引量:1
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作者 何芬 赵巧玲 +5 位作者 王明磊 王平阳 夏定国 裘智勇 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期913-921,共9页
在家蚕品种C1(H)中发现了一种新的卵色突变体。该突变体卵色为淡红色,成虫复眼为红色,遗传分析表明该突变性状由1个隐性基因控制,可能与红卵突变基因re互为等位基因,命名为淡红卵突变体(pale red egg,re^p-1)。红卵突变体(re)被认为是MF... 在家蚕品种C1(H)中发现了一种新的卵色突变体。该突变体卵色为淡红色,成虫复眼为红色,遗传分析表明该突变性状由1个隐性基因控制,可能与红卵突变基因re互为等位基因,命名为淡红卵突变体(pale red egg,re^p-1)。红卵突变体(re)被认为是MFS(major facilitator superfamily)基因的序列发生了改变,故对re^p-1突变体MFS基因的结构及表达进行分析。与C1(H)卵色正常型品系的MFS基因比较,re^p-1突变体的MFS基因在第6外显子中的一段长59 bp片段被长14 bp的片段所替换,但编码蛋白质的跨膜结构未发生根本改变,而re突变体中MFS基因的结构变化对表达产物的功能有显著影响。此外,利用qRT-PCR检测MFS基因在C1(H)的卵色正常型品系、re^p-1突变体和re突变体3个家蚕品系5龄幼虫各个组织中均有表达,但表达水平存在差异:相较于C1(H)卵色正常型品系和re^p-1突变体,re突变体所有组织中MFS基因的表达量普遍偏低;相较于C1(H)卵色正常型品系,re^p-1突变体的后部丝腺和精巢中MFS基因具有较高的表达量,在其他组织中的表达量无明显差异。上述结果将有助于对re^p-1突变基因定位分析和卵色突变形成机制的研究。 展开更多
关键词 家蚕 卵色突变 淡红色卵突变体 遗传分析 MFS基因 序列组成 组织表达
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天宫二号航天蚕后代小茧突变体sc的发现与基因定位 被引量:1
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作者 沈广胜 沈兴家 +8 位作者 张龙 赵巧玲 高梦杰 唐顺明 黄静怡 陈艳花 蒋涛 朱娟 王梅仙 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1031-1040,共10页
【目的】从2016年天宫二号空间实验室经历33 d后返回的1头成活“秋丰×白玉”杂交后代雌蚕Bombyx mori与地面“白玉”雄蚕交配的后代个体中,发现有结小茧突变体,进而分离并建立了飞天蚕(space silkworm)正常茧品系TG和小茧突变体品... 【目的】从2016年天宫二号空间实验室经历33 d后返回的1头成活“秋丰×白玉”杂交后代雌蚕Bombyx mori与地面“白玉”雄蚕交配的后代个体中,发现有结小茧突变体,进而分离并建立了飞天蚕(space silkworm)正常茧品系TG和小茧突变体品系sc。本研究通过对sc进行遗传分析和基因定位,旨在揭示产生小茧突变体的基因。【方法】对TG和sc进行表型分析;以sc,TG和正常大茧品系0223V_(1)为试验材料,组配(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)及回交群体BC1F——(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)♀×sc♂和BC1M——sc♀×(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)♂。以sc,0223V_(1)和F1基因组DNA为模板,每个连锁群随机选10个SSR引物进行PCR扩增,筛选多态性SSR标记。利用雌性家蚕减数分裂染色体不交换的特点,用BC1F确定sc基因所属连锁群;再根据家蚕SSR分子标记连锁图谱,用BC1M进行基因定位。【结果】表型分析表明sc幼虫体型小于TG幼虫的,蚕茧重约为TG的1/2。遗传分析表明突变受一对隐性基因sc控制;基因定位结果表明该基因位于家蚕基因组第3连锁群S2930-363和S2930-289 SSR标记之间,物理距离为684 kb,包含33个候选基因。【结论】飞天蚕小茧突变受位于家蚕基因组第3连锁群的一对隐性基因sc控制。 展开更多
关键词 家蚕 太空诱变 小茧 SSR标记 基因定位
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