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基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用
被引量：
6
1
作者
刘媛
林曼曼
+5 位作者
张霄
徐重新
焦凌霞
仲建锋
武爱华
刘贤金
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期1-7,共7页
从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技...
从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。
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关键词
抗体
亲和力成熟
易错PCR
DNA改组
突变株
定点突变
链替换
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题名
基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用
被引量：
6
1
作者
刘媛
林曼曼
张霄
徐重新
焦凌霞
仲建锋
武爱华
刘贤金
机构
江苏省食品质量安全重点实验室和农业部食用农产品安全监控重点开放实验室
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期1-7,共7页
基金
国家自然科学基金(31201535)
江苏省社会发展项目(BE2012750)
江苏省农业自主创新基金(CX(12)5042)
文摘
从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。
关键词
抗体
亲和力成熟
易错PCR
DNA改组
突变株
定点突变
链替换
Keywords
antibodies
affinity maturation
error PCR
DNA shuffling
mutator strains
site-directed mutagenesis
chain shuffling
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用
刘媛
林曼曼
张霄
徐重新
焦凌霞
仲建锋
武爱华
刘贤金
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
6
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
统计分析
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