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应用抑制性消减杂交技术筛选膦甲酸钠免疫调节基因 被引量：5
1
作者 刘妍 成军 +4 位作者 陆荫英 王刚 王建军 张喜全 王祥建 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期527-529,共3页
目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相... 目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相同细胞作为对照 ;2 4h后制备细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行 2次消减杂交及 2次抑制性多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　成功构建了PFA处理淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到 4 6个阳性克隆 ,进行菌落PCR分析 ,均得到 2 0 0～ 1 0 0 0bp插入片段。挑取含有插入片段的 1 4个克隆进行测序 ,并通过生物信息学分析获得 1 1种已知基因序列和 3个未知基因。结论　应用SSH技术成功构建了PFA处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库 。 展开更多
关键词 膦甲酸钠 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
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应用基因表达谱芯片技术研究膦甲酸钠处理Jurkat细胞后的差异表达基因
2
作者 刘妍 成军 +4 位作者 王刚 陆荫英 王建军 张喜全 王祥建 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期386-388,共3页
目的　筛选膦甲酸钠处理人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因。方法　应用基因表达谱芯片技术对膦甲酸钠处理的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行检测。结果　Jurkat细胞经膦甲酸钠处理后 ,所检测的 115 2条目的基因... 目的　筛选膦甲酸钠处理人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因。方法　应用基因表达谱芯片技术对膦甲酸钠处理的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行检测。结果　Jurkat细胞经膦甲酸钠处理后 ,所检测的 115 2条目的基因中 ,有 94条产生差异表达 ,其中 38条基因表达增强 ,5 6条基因表达降低。结论　应用基因表达谱芯片成功筛选了膦甲酸钠处理淋巴细胞后差异表达基因 。 展开更多
关键词 膦甲酸钠 免疫调节 基因表达谱芯片
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高效液相色谱法测定普润注射液中葛根素的含量 被引量：2
3
作者 顾红梅 杨永安 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 2002年第1期41-42,共2页
目的　建立普润注射液中葛根素含量的高效液相测定方法。方法　采用HypersilODS柱 ,外标法 ,以甲醇 水 ( 2 5∶75 )为流动相 ,流速 1mL/min,检测波长为 2 5 0nm。结果　在 9.6～ 4 8.0 μg/mL浓度范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9998) ;平... 目的　建立普润注射液中葛根素含量的高效液相测定方法。方法　采用HypersilODS柱 ,外标法 ,以甲醇 水 ( 2 5∶75 )为流动相 ,流速 1mL/min,检测波长为 2 5 0nm。结果　在 9.6～ 4 8.0 μg/mL浓度范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9998) ;平均回收率为 98.4 % ;RSD为 0 .98% (n=9)。结论　本方法具有简便、快速、准确等优点。 展开更多
关键词 葛根素 高效液相色谱法 外标法 普润注射液
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