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肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
徐云明
魏利斌
+7 位作者
周弇扬
李叶辉
孙智远
仲思远
陈爱宁
郭丽娟
柳增善
任洪林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第11期3003-3010,共8页
本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜...
本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料(dNTPs)、内外引物比例、Mg^(2+)浓度、反应时间和温度进行优化和选择,并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明,通过优化试验,筛选到最优反应体系和反应条件;应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验,特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875pg/μL,比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测,检测限为30CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增,灵敏性更高,反应时间更短,检测成本更低。
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关键词
肺炎克雷伯菌
环介导等温扩增(LAMP)
检测
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职称材料
题名
肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
徐云明
魏利斌
周弇扬
李叶辉
孙智远
仲思远
陈爱宁
郭丽娟
柳增善
任洪林
机构
江苏
农林职业技术学院畜牧兽医学院
江苏省苏州市太仓科技局
吉林大学人兽共患病研究所教育部重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第11期3003-3010,共8页
基金
江苏农林职业技术学院培育类项目:建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测食源性致病微生物(2016kj010)。
文摘
本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料(dNTPs)、内外引物比例、Mg^(2+)浓度、反应时间和温度进行优化和选择,并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明,通过优化试验,筛选到最优反应体系和反应条件;应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验,特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875pg/μL,比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测,检测限为30CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增,灵敏性更高,反应时间更短,检测成本更低。
关键词
肺炎克雷伯菌
环介导等温扩增(LAMP)
检测
Keywords
Klebsiella pneumoniae
loop-mediated isothermal amplification(LAMP)
detection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立
徐云明
魏利斌
周弇扬
李叶辉
孙智远
仲思远
陈爱宁
郭丽娟
柳增善
任洪林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
6
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