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重组真核细胞抗原免疫小鼠制备抗人LAG3单克隆抗体及其鉴定
被引量：
1
1
作者
李欣悦
蔡秀
金月
《细胞与分子免疫学杂志》
CSCD
北大核心
2024年第12期1110-1114,共5页
目的制备小鼠抗人淋巴细胞活化基因3(LAG3)单克隆抗体(mAb)并进行抗体免疫学鉴定。方法以构建的稳定表达人LAG3胞外区和跨膜区的小鼠3T3单克隆细胞(LAG3-mLumin-3T3)免疫BALB/c小鼠,流式细胞术和免疫荧光法检测小鼠血清中是否含有抗人L...
目的制备小鼠抗人淋巴细胞活化基因3(LAG3)单克隆抗体(mAb)并进行抗体免疫学鉴定。方法以构建的稳定表达人LAG3胞外区和跨膜区的小鼠3T3单克隆细胞(LAG3-mLumin-3T3)免疫BALB/c小鼠,流式细胞术和免疫荧光法检测小鼠血清中是否含有抗人LAG3抗体。用SP2/0细胞皮下注射BALB/c小鼠形成实体骨髓瘤,体外分离的小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合建立杂交瘤,用有限细胞稀释法分离出杂交瘤单克隆细胞。收集杂交瘤单克隆细胞培养液,流式细胞术检测细胞分泌LAG3 mAb。构建的表达LAG3胞外区4个独立结构域的3T3细胞株(LAG3-胞外结构域1/-2/-3/-4-3T3)用于流式细胞术区分mAb结合抗原表位。流式细胞术检测LAG3 mAb与活化状态下的人外周血单核细胞(PBMC)共同培养前后细胞LAG3表达。结果重组真核细胞抗原免疫后小鼠能产生特异性抗人LAG3抗体。通过杂交瘤融合获得的杂交瘤单克隆细胞能够分泌小鼠抗人LAG3 mAb;不同单克隆细胞株分泌的mAb识别的LAG3抗原结构域存在差异。结论成功制备小鼠抗人LAG3 mAb,不同杂交瘤细胞克隆分泌的mAb识别表位不同,为进一步研究LAG3生物学特性及肿瘤治疗阻断抗体的研发奠定基础。
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关键词
淋巴细胞活化基因3(LAG3)
真核细胞抗原
活体骨髓瘤细胞
杂交瘤
单克隆抗体(mAb)
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职称材料
题名
重组真核细胞抗原免疫小鼠制备抗人LAG3单克隆抗体及其鉴定
被引量：
1
1
作者
李欣悦
蔡秀
金月
机构
江苏省苏北人民医院分子诊断中心
江苏
大学医学院
盐城市第一
人民医院
检验科
江苏省
苏北人民医院
医学实验
中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CSCD
北大核心
2024年第12期1110-1114,共5页
基金
江苏省卓越博士后计划(2022ZB895)。
文摘
目的制备小鼠抗人淋巴细胞活化基因3(LAG3)单克隆抗体(mAb)并进行抗体免疫学鉴定。方法以构建的稳定表达人LAG3胞外区和跨膜区的小鼠3T3单克隆细胞(LAG3-mLumin-3T3)免疫BALB/c小鼠,流式细胞术和免疫荧光法检测小鼠血清中是否含有抗人LAG3抗体。用SP2/0细胞皮下注射BALB/c小鼠形成实体骨髓瘤,体外分离的小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合建立杂交瘤,用有限细胞稀释法分离出杂交瘤单克隆细胞。收集杂交瘤单克隆细胞培养液,流式细胞术检测细胞分泌LAG3 mAb。构建的表达LAG3胞外区4个独立结构域的3T3细胞株(LAG3-胞外结构域1/-2/-3/-4-3T3)用于流式细胞术区分mAb结合抗原表位。流式细胞术检测LAG3 mAb与活化状态下的人外周血单核细胞(PBMC)共同培养前后细胞LAG3表达。结果重组真核细胞抗原免疫后小鼠能产生特异性抗人LAG3抗体。通过杂交瘤融合获得的杂交瘤单克隆细胞能够分泌小鼠抗人LAG3 mAb;不同单克隆细胞株分泌的mAb识别的LAG3抗原结构域存在差异。结论成功制备小鼠抗人LAG3 mAb,不同杂交瘤细胞克隆分泌的mAb识别表位不同,为进一步研究LAG3生物学特性及肿瘤治疗阻断抗体的研发奠定基础。
关键词
淋巴细胞活化基因3(LAG3)
真核细胞抗原
活体骨髓瘤细胞
杂交瘤
单克隆抗体(mAb)
Keywords
lymphocyte activation gene 3(LAG3)
eukaryotic antigen
living myeloma cells
hybridoma
monoclonal antibody(mAb)
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
R446.4 [医药卫生—诊断学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
重组真核细胞抗原免疫小鼠制备抗人LAG3单克隆抗体及其鉴定
李欣悦
蔡秀
金月
《细胞与分子免疫学杂志》
CSCD
北大核心
2024
1
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