一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性 被引量：1

1

作者 吴永 王淑军 +4 位作者 吕明生 房耀维 刘姝 严翠 焦豫良 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期106-111,共6页

本研究从连云港海泥中筛选产普鲁兰酶菌株,利用形态学、生理生化特征、基因序列(16S rRNA和gyr B)进行分析鉴定。利用产酶菌株发酵制备普鲁兰酶,初步纯化后分析其酶学性质。利用该普鲁兰酶粗提物对海带多糖进行水解,并对其水解产物进行... 本研究从连云港海泥中筛选产普鲁兰酶菌株,利用形态学、生理生化特征、基因序列(16S rRNA和gyr B)进行分析鉴定。利用产酶菌株发酵制备普鲁兰酶,初步纯化后分析其酶学性质。利用该普鲁兰酶粗提物对海带多糖进行水解,并对其水解产物进行抗氧化活性分析。结果表明:筛选得到一株产普鲁兰酶的巨大芽孢杆菌P6(Bacillus megaterium),经发酵纯化后普鲁兰酶比活力为62.3 U/mg,分子量约为43 k Da。该酶的最适反应温度为45℃,最适p H为6.5,在温度40℃下保温5 h,相对残余酶活达95%以上,而60℃下保温1 h,酶全部失活。在p H6~7.5之间保温12 h后,该酶仍有40%以上的相对残余酶活。DPPH和·OH自由基清除实验表明:海带多糖经普鲁兰酶水解后抗氧化活性显著增强(p<0.05),为普鲁兰酶在食品工业中的应用研究提供了新的方向。 展开更多

关键词 普鲁兰酶 筛选鉴定 纯化 酶学性质 海带多糖酶解产物 抗氧化活性

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新型吡唑乙酰胺类琥珀酸脱氢酶抑制剂的设计、合成及抑菌活性 被引量：1

2

作者 王晓斌 董雪 +5 位作者 王瑞颖 张娟 王濛琪 张宗群 杨婷玉 许梦寒 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期54-62,共9页

为开发出新型杀菌剂候选分子,通过柔性改造吡唑甲酰胺杀菌剂结构中的二元酰胺键得到了一系列潜在靶向真菌琥珀酸脱氢酶(SDH)的新型吡唑乙酰胺分子.借助菌丝生长速率法发现了其中具有广谱抑菌特性的二苯醚联吡唑乙酰胺分子(6l),其在药剂... 为开发出新型杀菌剂候选分子,通过柔性改造吡唑甲酰胺杀菌剂结构中的二元酰胺键得到了一系列潜在靶向真菌琥珀酸脱氢酶(SDH)的新型吡唑乙酰胺分子.借助菌丝生长速率法发现了其中具有广谱抑菌特性的二苯醚联吡唑乙酰胺分子(6l),其在药剂质量浓度为50μg/mL时对水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌和草莓灰霉病菌的抑制效果均优于对照药剂噁霉灵.化合物6l对水稻纹枯病菌的半最大效应浓度(EC_(50)值)为19.92μg/mL,抑菌活性明显优于对照药剂噁霉灵和氟吡菌酰胺(EC_(50)分别为76.74和40.36μg/mL).SDH酶活力测试结果表明,真菌体内的SDH是化合物6l抑制水稻纹枯病菌生长的潜在作用靶标.分子对接研究结果显示,化合物6l分子结构中的二苯醚单元能以多种方式与靶标口袋的关键残基结合,对分子发挥抑菌活性起到了关键作用.研究结果表明,二苯醚联吡唑乙酰胺分子对植物病原真菌具有较显著的抑制作用,在其结构基础上进行深度的优化和改造有望得到可有效防控植物病原真菌的新型杀菌剂候选分子. 展开更多

关键词 抑菌先导发现 吡唑乙酰胺 植物病原真菌 琥珀酸脱氢酶抑制剂

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含吡啶盐喹唑啉酮衍生物的合成及抑菌活性 被引量：1

3

作者 王晓斌 严莉莉 +3 位作者 高希茗 王媛媛 张娟 顾一飞 《化学研究与应用》 CAS 北大核心 2024年第1期56-63,共8页

为开发出新型绿色杀菌剂候选分子,本文将杀菌剂结构中频繁出现的吡啶单元有机融入喹唑啉-4(3H)-酮骨架的3位,设计并合成了8个含吡啶盐的喹唑啉酮分子。通过^(1)H NMR、^(13)C NMR和HRMS确证结构后,采用菌丝生长速率法和浊度法分别测定... 为开发出新型绿色杀菌剂候选分子,本文将杀菌剂结构中频繁出现的吡啶单元有机融入喹唑啉-4(3H)-酮骨架的3位,设计并合成了8个含吡啶盐的喹唑啉酮分子。通过^(1)H NMR、^(13)C NMR和HRMS确证结构后,采用菌丝生长速率法和浊度法分别测定了上述目标分子对植物病原真菌和细菌的抑制活性,生测结果发现部分目标分子能显著抑制水稻白叶枯病菌和柑橘溃疡病菌。其中,1-((4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)甲基)-1-氯化吡啶盐类分子7a对柑橘溃疡病菌的EC_(50)值达到了13.03μg·mL^(-1),抑菌效果约为商品化杀菌剂噻菌铜的3倍(40.88μg·mL^(-1))。上述研究表明含吡啶盐的喹唑啉酮分子对植物病原细菌具有较显著抑制作用,在其结构基础上进行深度的优化和改造有望得到可有效防控植物病原细菌的杀菌剂候选分子。 展开更多

关键词 抑菌先导发现 喹唑啉酮 吡啶盐 柑橘溃疡病菌

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4-甲基-2-芳基(杂环基)-5-(4,5-二氢噻唑-2-基)-1,3噻唑的绿色合成及生物活性

4

作者 唐丽娟 曹志凌 +2 位作者 史大华 王建 刘玮炜 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1824-1829,共6页

以取代芳腈(杂环腈)为原料,经硫化、环化、酰胺化和环化反应合成了系列噻唑-噻唑啉骈合结构的杂环化合物。目标化合物经1H NMR、13C NMR和HRMS进行了结构确证。该路线后处理简单,环境友好,适合产业化生产。以大肠杆菌(Escherichia coli... 以取代芳腈(杂环腈)为原料,经硫化、环化、酰胺化和环化反应合成了系列噻唑-噻唑啉骈合结构的杂环化合物。目标化合物经1H NMR、13C NMR和HRMS进行了结构确证。该路线后处理简单,环境友好,适合产业化生产。以大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为测试对象,初步的生物活性测试结果表明,部分化合物具有一定的抗菌活性,其中5g,5i,5j对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制活性较强,5h,5i,5j对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制活性较强,5b,5d对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑制活性较强。 展开更多

关键词 噻唑 噻唑啉 绿色合成 构效关系 生物活性

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海螵蛸提取物活性成分分析及止血机制 被引量：16

5

作者 刘书豪 王有宪 +5 位作者 邵仲柏 蒋凯俊 曹联攻 李冰 沈金阳 刘玮炜 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3366-3368,共3页

目的 分析海螵蛸提取物活性成分,并研究其止血机制。方法 以水、乙醇、石油醚为溶剂,分别采用热回流、浸泡残渣、超声处理等方法制备海螵蛸提取物。通过化学试剂反应现象判断提取物活性成分,检测提取物凝血时间、凝血四项(PT、APTT、TT... 目的 分析海螵蛸提取物活性成分,并研究其止血机制。方法 以水、乙醇、石油醚为溶剂,分别采用热回流、浸泡残渣、超声处理等方法制备海螵蛸提取物。通过化学试剂反应现象判断提取物活性成分,检测提取物凝血时间、凝血四项(PT、APTT、TT、FIB)来分析止血机制。结果 海螵蛸提取物可能含有甾体三萜、挥发油和油脂、皂苷、有机酸、内酯和香豆素、糖类、氨基酸等成分。水提物体外促凝效果最好,醇提物、石油醚提取物较弱。与空白组比较,水提物各剂量组APPT、PT缩短(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论 海螵蛸提取物活性成分丰富,水提物具有良好的体外促凝效果,其机制可能为激活外源性凝血系统、促进内源性凝血系统中凝血因子释放酶原。 展开更多

关键词 海螵蛸 提取物 活性成分 止血机制

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含香豆素结构的1,4-戊二烯-3-酮类衍生物的合成及生物活性

6

作者 王晓斌 王瑞颖 +5 位作者 董雪 严莉莉 张娟 顾一飞 程青芳 薛伟 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第12期35-44,共10页

为了开发新型抗肿瘤药物候选分子,将香豆素单元有机融入1,4-戊二烯-3-酮分子骨架中,设计合成了16个结构新颖的单羰基姜黄素衍生物.在确证目标分子结构后,采用甲基四氮唑盐(MTT)比色法测试了其对胃癌SGC7901细胞和肝癌HepG2细胞体外增殖... 为了开发新型抗肿瘤药物候选分子,将香豆素单元有机融入1,4-戊二烯-3-酮分子骨架中,设计合成了16个结构新颖的单羰基姜黄素衍生物.在确证目标分子结构后,采用甲基四氮唑盐(MTT)比色法测试了其对胃癌SGC7901细胞和肝癌HepG2细胞体外增殖的抑制活性.生物活性测试结果表明,绝大多数目标分子均能显著抑制SGC7901和HepG2细胞的体外增殖.其中,化合物4c和4j对SGC7901细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为0.22和0.27μmol/L,其活性显著优于对照药剂表柔比星(1.23μmol/L).同时,化合物4l对HepG2细胞的IC_(50)值(0.47μmol/L)也显著优于表柔比星(2.30μmol/L).细胞形态学研究结果进一步证实,含香豆素结构1,4-戊二烯-3-酮衍生物能显著抑制多种肿瘤细胞的体外增殖,可作为高效抗肿瘤药物候选分子进行深度开发. 展开更多

关键词 1 4-戊二烯-3-酮 香豆素 先导发现与优化 抗肿瘤活性

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苦参抗水产病原哈氏弧菌活性物质的提取、鉴定及作用机制 被引量：5

7

作者 郭斯崖 郑慧芳 +3 位作者 张淼 蔡静 王鑫彤 郭雷 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期29-37,共9页

利用单因素实验、Box-Behnken试验设计结合响应面分析法,从提取溶剂(蒸馏水、50%甲醇、甲醇、50%乙醇、乙醇)、乙醇浓度(60%~100%)、提取温度(60℃、70℃、80℃、90℃、100℃)、提取时间(60 min、90 min、120 min、150 min、180 min)和... 利用单因素实验、Box-Behnken试验设计结合响应面分析法,从提取溶剂(蒸馏水、50%甲醇、甲醇、50%乙醇、乙醇)、乙醇浓度(60%~100%)、提取温度(60℃、70℃、80℃、90℃、100℃)、提取时间(60 min、90 min、120 min、150 min、180 min)和液料比等对抑菌活性的影响几方面优化苦参抗水产病原哈氏弧菌(Vibrio harveyi)活性物质(ASSF)的提取工艺;采用高效液相色谱和标准品比对技术,鉴定ASSF的抗菌活性化合物;从对哈氏弧菌的生长、细胞膜的完整性和通透性、细胞壁的通透性等方面探讨ASSF的作用机理。结果表明:ASSF的最佳提取条件是:无水乙醇为溶剂,液料比30∶1 mL/g,提取温度79℃,提取146 min。在此条件下,提取物抑菌圈的实际值为(17.64±0.22)mm,与预测值无显著性差异。固态ASSF的得率为(21.17±0.91)%。鉴定出苦参酮是ASSF中的抗哈氏弧菌活性化合物。ASSF和苦参酮的最小抑菌浓度分别为0.125 mg/mL和0.0625 mg/mL。ASSF对于哈维氏弧菌的抑制作用主要是通过破坏细胞膜的完整性和通透性、细胞壁的通透性抑制细胞的增殖。本研究结果可为进一步开发苦参酮在水产病害防治中的应用提供依据。 展开更多

关键词 苦参 哈氏弧菌 抗菌活性 提取工艺 苦参酮

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限制性内切酶NcoⅠ的高效重组表达、硒代与结晶条件初步筛选 被引量：2

8

作者 程艺 马超 +5 位作者 陈晓雨 邵钰晨 王潇 杨雪丽 苏蓉 李婷婷 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期81-88,共8页

来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获... 来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获得了纯度>95%的NcoⅠ野生型和Se-NcoⅠ硒代蛋白。质谱分析表明,重组Se-NcoⅠ蛋白中所有硫原子成功被硒原子取代。酶切实验表明,硒代蛋白与野生型具有相似的限制酶活性。采用坐滴法筛选重组NcoⅠ蛋白结晶条件,已在3种条件下获得针状晶体,1种条件下获得颗粒状晶体。X射线衍射初步分析晶体分辨率在0.8 nm左右,为下一步解析NcoⅠ三维结构提供了基础。 展开更多

关键词 限制性内切酶 NcoⅠ 表达纯化 硒代 结晶

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一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法

9

作者 陈晓雨 张建 +4 位作者 张新亚 唐雨婷 邵钰晨 罗志丹 卢辰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期281-286,共6页

Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性... Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性的新方法。该方法的标准曲线线性关系良好,决定系数R^(2)达到0.99以上,灵敏度和准确度高,操作简单,测定结果与商业化产品标定的活力相符,经荧光定量PCR验证能够反映真实使用环境下的酶活。该方法还可推广到测定其他DNA聚合酶活性,将为DNA聚合酶的生产和改造提供有效的检测手段。 展开更多

关键词 Tth DNA聚合酶 酶活性测定 荧光染料 发夹型探针

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钾离子通道在抑郁症治疗中的研究进展 被引量：1

10

作者 刘淑娴 张桂森 庄涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1607-1611,共5页

抑郁症是一种由多种因素引起的情感障碍性疾病,其发病率呈现逐年上升趋势,严重危害人类的身心健康。当前抗抑郁药的治疗机制主要是以增加脑内5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺等单胺递质的浓度为主,但其存在抗抑郁响应率低、不良反应严... 抑郁症是一种由多种因素引起的情感障碍性疾病,其发病率呈现逐年上升趋势,严重危害人类的身心健康。当前抗抑郁药的治疗机制主要是以增加脑内5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺等单胺递质的浓度为主,但其存在抗抑郁响应率低、不良反应严重等缺点。因此,抑郁症治疗仍未满足临床需求。近年来越来越多的临床前研究和临床实验表明,钾离子通道开放剂或拮抗剂在抑郁症治疗中具有巨大潜力。该文重点综述了近年来钾离子通道中电压门控钾离子通道、双孔钾离子通道与抑郁症的相关研究进展,为新型抗抑郁药物的研发提供新的思路。 展开更多

关键词 抑郁症 钾离子通道 电压门控钾离子通道 双孔钾离子通道 抗抑郁作用 钾离子通道开放剂

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固定化c-ω-转氨酶催化合成(4S)-四氢萘酮

11

作者 高嵩 邵小芙 +3 位作者 果波 李前 王佩 曹阳 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1152-1160,共9页

以T4噬菌体衣壳为载体,探索了海绵假弧菌-ω-转氨酶(P-ω-TA)的自组装固定化,以将P-ω-TA与T4噬菌体非必需小外壳蛋白(Soc)融合的方式实现了P-ω-TA在T4噬菌体衣壳上的亲和固定及较高的位点结合数。对固定化P-ω-TA的适应性、回收性能、... 以T4噬菌体衣壳为载体,探索了海绵假弧菌-ω-转氨酶(P-ω-TA)的自组装固定化,以将P-ω-TA与T4噬菌体非必需小外壳蛋白(Soc)融合的方式实现了P-ω-TA在T4噬菌体衣壳上的亲和固定及较高的位点结合数。对固定化P-ω-TA的适应性、回收性能、(S)-型异构体选择性拆分及(1S,4S)-去甲基舍曲林的催化能力进行了测试。结果表明,固定化的P-ω-TA保持了完整的活性及适应性,可通过离心操作轻松地回收,并进行重复使用。在5次回收和重复使用过程中,每次酶活回收率均>91%,经5次催化,最终酶活保持率约为84%。固定化P-ω-TA保持了在底物手性中心处的(S)-型异构体选择性拆分以及对(1S,4S)-去甲基舍曲林的催化能力。 展开更多

关键词 海绵假弧菌-ω-转氨酶 T4噬菌体 手性拆分 酶固定化 舍曲林 精细化工中间体

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一种非奈利酮消旋体的制备方法

12

作者 曹阳 崔文慧 +2 位作者 李前 吴庆昆 高辉 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2531-2537,共7页

以4-氰基-2-甲氧基苯甲醛和乙酰乙酸叔丁酯为原料,通过缩合、关环、氧烷基化、水解以及氨解反应,得到了非奈利酮消旋体。考察了不同取代酯在碱性条件下的水解,发现常规酯在NaOH等多种碱性条件下均未水解,而在酸性条件下则可发生水解,在... 以4-氰基-2-甲氧基苯甲醛和乙酰乙酸叔丁酯为原料,通过缩合、关环、氧烷基化、水解以及氨解反应,得到了非奈利酮消旋体。考察了不同取代酯在碱性条件下的水解,发现常规酯在NaOH等多种碱性条件下均未水解,而在酸性条件下则可发生水解,在三氟乙酸(TFA)的作用下,二氯甲烷(DCM)作溶剂,室温下可实现叔丁基4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-羧酸酯(Ⅶ)的水解,重点优化了中间体Ⅶ的水解条件。结果表明,在n(Ⅶ)∶n(TFA)=1∶10、n(Ⅶ)∶n(DCM)=1∶18、室温(25℃)条件下反应3 h,即可得到收率为68%的4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-羧酸(Ⅷ)(HPLC纯度98%)。该法突破了常规酯在碱性条件下难以水解的困难,反应放大到百克级,最终以约35%的总收率得到非奈利酮消旋体(HPLC纯度99%)。产物经^(1)HNMR、^(13)CNMR和HRMS确定结构。 展开更多

关键词 非奈利酮 路线优化 原料药 水解反应 精细化工中间体

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铝试剂在共振光散射光谱法测定氯霉素含量中的应用研究

13

作者 卫泽辉 张笑 +5 位作者 张俊 刘文昕 董雪 沈阳 马卫兴 田美 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期565-570,共6页

本文以铝试剂为基础,通过氢键相互作用构建了铝试剂-氯霉素超分子体系,建立了超分子体系共振光散射强度变化与氯霉素浓度的定量关系,进而实现氯霉素含量测定。详细考察了实验条件的影响,结果显示,铝试剂浓度为5.0×10^(-4)mol/L、... 本文以铝试剂为基础,通过氢键相互作用构建了铝试剂-氯霉素超分子体系,建立了超分子体系共振光散射强度变化与氯霉素浓度的定量关系,进而实现氯霉素含量测定。详细考察了实验条件的影响,结果显示,铝试剂浓度为5.0×10^(-4)mol/L、体积为1.5mL、盐酸用量2.5mL、氯霉素浓度和体积分别为100μg/mL和4.0mL时,超分子体系的共振光散射减弱程度最大,此时超分子中氯霉素和铝试剂的摩尔比为2∶1。该方法在8~40μg/mL范围内线性良好,相关系数R2为0.9906,检出限为0.01420μg/mL。在氯霉素加标浓度为8、10、12μg/mL时对方法的准确度进行了考察,平均回收率分别为100.6%、100.1%和100.6%,相对标准偏差(RSD,n=5)分别为1.07%、0.68%和0.75%。该方法应用于氯霉素滴眼液的含量测定,测得标示量百分含量平均值为100.1%,RSD(n=6)为0.74%。 展开更多

关键词 共振光散射光谱法 铝试剂 超分子体系 氯霉素

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固定化吡哆醇激酶催化合成磷酸吡哆醇的研究

14

作者 侯学雯 李梦磊 +2 位作者 叶蕾 邱敏 张坤晓 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期119-126,共8页

【目的】利用镍螯合琼脂糖亲和层析介质(Ni-NTA)与组氨酸(His)标记的蛋白质特异性结合的原理,将Ni-NTA与His标记的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源的吡哆醇激酶(EcpdxK)固定化,形成一种固定化式反应器,并研究吡哆醇(PN)转化为磷... 【目的】利用镍螯合琼脂糖亲和层析介质(Ni-NTA)与组氨酸(His)标记的蛋白质特异性结合的原理,将Ni-NTA与His标记的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)来源的吡哆醇激酶(EcpdxK)固定化,形成一种固定化式反应器,并研究吡哆醇(PN)转化为磷酸吡哆醇(PNP)的最适反应条件。【方法】采用单因素分析方法探讨温度、pH、金属离子浓度和回收次数等对该催化反应的影响。【结果】固定化EcpdxK的最适反应温度为55℃,最适反应pH为5.0,最适M g2+浓度为30 mmol/L。该固定化酶在最适反应条件下,10 min内可将99%的PN转化为PNP。在采用固定化酶填充床反应器时,EcpdxK反应液柱留时间为10 min,持续反应12 h后其转化效率仍高达93%。【结论】固定化EcpdxK具有良好的温度耐受性、pH耐受性及操作稳定性,该固定化EcpdxK催化合成PNP的工艺操作简单、成本较低,具有工业化应用潜力。 展开更多

关键词 吡哆醇激酶 固定化 镍螯合琼脂糖亲和层析介质 磷酸吡哆醇

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金黄色葡萄球菌重组酶聚合酶扩增方法的建立 被引量：12

15

作者 吴华华 王锦鑫 +3 位作者 谷庆花 孙奥 司鑫鑫 董井泉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期797-801,共5页

为建立基于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法,本研究根据该菌耐热核酸酶nuc基因的保守序列,设计特异性RPA扩增引物,并经反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果显示:建立的金黄色葡萄球菌快速检测方法可... 为建立基于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法,本研究根据该菌耐热核酸酶nuc基因的保守序列,设计特异性RPA扩增引物,并经反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。结果显示:建立的金黄色葡萄球菌快速检测方法可在37℃孵育35 min特异性检测金黄色葡萄球菌,而对其它病原的检测结果为阴性,特异性较强;对该菌的纯培养物和人工污染该菌的牛奶样品中的最低检出限均为10 cfu,敏感性高。利用该方法和国标培养法同时检测市场购买的牛奶样品和猪肉样品,结果显示二者检测结果一致。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、特异性强、灵敏度高且不依赖于昂贵的仪器设备,适用于基层实验室检测。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增 快速检测 金黄色葡萄球菌

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副溶血弧菌重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立及初步应用 被引量：5

16

作者 马超 杨潇含 +4 位作者 杨乾坤 杨海涛 张佳 董井泉 高嵩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期285-289,共5页

为建立副溶血弧菌快速检测方法,本研究以副溶血弧菌不耐热溶血素(tlh)基因作为靶序列设计特异性引物,经反应条件优化建立了检测副溶血弧菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。优化试验结果显示该方法在37℃和35 min条件下检测效果最佳;特异... 为建立副溶血弧菌快速检测方法,本研究以副溶血弧菌不耐热溶血素(tlh)基因作为靶序列设计特异性引物,经反应条件优化建立了检测副溶血弧菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。优化试验结果显示该方法在37℃和35 min条件下检测效果最佳;特异性试验结果显示,该方法除对副溶血弧菌的检测结果为阳性外,对其余8种常见的弧菌检测结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该RPA方法对副溶血弧菌的检出限为104cfu/mL,敏感性较高。利用建立的RPA检测方法、培养法及普通PCR方法同时对采集的48份海鲜样品进行检测,结果显示:该RPA方法能够对临床样品快速检测,并且检测结果与国家标准培养法及普通PCR方法的符合率为100%,能够满足临床样品的检测需求。本研究建立了一种检测副溶血弧菌的方法,该方法具有反应快速、特异性强、敏感性高等特点,为副溶血弧菌的快速检测奠定基础。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶等温扩增 副溶血弧菌 tlh基因 快速检测

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大豆异黄素7-O-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成 被引量：1

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作者 朱丹丹 陈静 +3 位作者 杨棕楠 滕文琪 刘高峰 曹志凌 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期295-298,共4页

以2-乙酰氨基葡萄糖为原料制得糖苷供体化合物1-氯-2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖,继续与大豆异黄素的7-位羟基经选择性糖苷化、脱乙酰化两步反应合成了7-O-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖大豆异黄素苷。优... 以2-乙酰氨基葡萄糖为原料制得糖苷供体化合物1-氯-2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖,继续与大豆异黄素的7-位羟基经选择性糖苷化、脱乙酰化两步反应合成了7-O-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖大豆异黄素苷。优化后的糖苷反应的最佳条件是:丙酮为反应溶剂,大豆异黄素、氯代糖和K_2CO_3的摩尔比1∶1.5∶1.5,反应温度为55℃,反应时间6 h,目标化合物总产率为64%,该化合物结构经NMR和HRMS确证,且水溶解度达到0.8mg·mL^(-1)。 展开更多

关键词 大豆异黄素 糖苷化反应 2-乙酰氨基葡萄糖 合成

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组蛋白甲基化对酿酒酵母铁离子代谢平衡基因表达的影响 被引量：1

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作者 张惠铭 喻勇飞 +1 位作者 卢辰 薛勇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1292-1298,共7页

为了解组蛋白化学修饰在铁离子代谢平衡相关基因表达调控中的作用,在酿酒酵母中通过敲除铁硫簇合成基因YFH1激活铁离子代谢平衡相关基因,并在此基础上敲除组蛋白甲基化酶基因,然后通过RNA测序检测组蛋白甲基化在铁离子代谢平衡相关基因... 为了解组蛋白化学修饰在铁离子代谢平衡相关基因表达调控中的作用,在酿酒酵母中通过敲除铁硫簇合成基因YFH1激活铁离子代谢平衡相关基因,并在此基础上敲除组蛋白甲基化酶基因,然后通过RNA测序检测组蛋白甲基化在铁离子代谢平衡相关基因激活中的作用。结果显示,酿酒酵母中组蛋白甲基化的缺失并没有显著影响铁离子代谢平衡通路相关基因的激活,表明组蛋白甲基化在铁离子代谢平衡基因的激活调控中并不是必须的。 展开更多

关键词 表观遗传 铁离子代谢平衡 组蛋白甲基化 酿酒酵母

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杀鲑气单胞菌可视化重组酶聚合酶扩增检测技术的建立 被引量：1

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作者 谷庆花 李铭远 +1 位作者 司鑫鑫 高嵩 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2022年第1期52-57,共6页

本研究根据杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的铁载受体(fstA)基因的保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与侧向流试纸条(lateral flow strips,LFS)相结合的... 本研究根据杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的铁载受体(fstA)基因的保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与侧向流试纸条(lateral flow strips,LFS)相结合的可视化快速检测杀鲑气单胞菌的方法。结果显示:本研究建立的基于RPA-LFS的杀鲑气单胞菌检测方法在37℃孵育25 min即可完成,特异性良好,与其他致病菌无交叉反应;灵敏度实验结果显示,该菌的纯培养物和人工污染的鲤鱼组织中的最低检测限均为单次反应1 CFU(colony forming unit)。本研究建立的基于RPA-LFS的杀鲑气单胞菌检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,检测结果可通过肉眼直接观察,操作简单,不依赖昂贵的仪器设备,适用于养殖业中杀鲑气单胞菌的现场检测。 展开更多

关键词 杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida) 重组酶聚合酶扩增 侧向流试纸条 现场检测

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应用CRISPR/Cas9技术建立ERK激酶相分离荧光探针定点整合的稳定细胞株

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作者 杨玉梅 张坤晓 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期159-164,共6页

旨在构建人AAVS1位点定点敲入的诱导表达型ERK-SPARK激酶荧光探针的人食管鳞癌细胞株(KYSE-150)。根据AAVS1位点的DNA序列设计和已公开ERK-SPAEK荧光探针碱基序列构建了两端带有750 bp同源臂的诱导型ERK-SPARK表达盒的同源重组供体质粒... 旨在构建人AAVS1位点定点敲入的诱导表达型ERK-SPARK激酶荧光探针的人食管鳞癌细胞株(KYSE-150)。根据AAVS1位点的DNA序列设计和已公开ERK-SPAEK荧光探针碱基序列构建了两端带有750 bp同源臂的诱导型ERK-SPARK表达盒的同源重组供体质粒。其次,利用在线设计工具设计了3个靶向AAVS1位点的sgRNA,并克隆至pX330骨架质粒中得到3个能定点切割AAVS1位点的CRISPR/Cas9打靶载体,将同源重组供体质粒分别与表达CRISPR/Cas9打靶载体共转染KYSE-150细胞,经Dox诱导表达24 h后进行嘌呤霉素抗性筛选和流式细胞分选,得到抵抗嘌呤霉素且表达GFP的细胞亚群。再应用PCR鉴定基因型,以及Western blot检测蛋白表达。对获得的细胞群提取基因组DNA并进行PCR基因型鉴定,结果显示获得片段的大小与诱导型ERK-SPARK表达盒的大小一致。蛋白表达检测结果显示,该细胞群表达了ERK-SPARK探针融合蛋白。荧光探针成像实验结果显示,在未经Dox诱导表达条件下,细胞株有极少量泄漏表达;经Dox诱导表达后,GFP荧光蛋白在细胞质内均匀分布,无明显聚集成点现象;在加入EGF激活ERK激酶后,原本在细胞质内均匀分布的GFP绿色荧光聚集成高亮度的绿色液珠。成功获得了可诱导表达检测ERK激酶活性的SPARK荧光探针的稳定细胞株,解决了瞬时表达ERK-SPARK探针效率不稳定影响实验结果准确性的问题,为后续建立基于SPARK技术的高通量蛋白激酶抑制剂的筛选平台奠定了前期研究基础。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 AAVS1安全港 同源重组 SPARK荧光探针 稳定细胞株 KYSE-150细胞 细胞外调节蛋白激酶 表皮生长因子

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