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抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
祭芳
曹欢
+1 位作者
徐剑宏
史建荣
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第2期417-422,共6页
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与S...
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌抗玉米赤霉烯酮抗体的单克隆细胞株3D10。3D10的抗体类型及亚类均为IgM,其轻链为Kappa链。制备的单克隆抗体腹水通过间接酶联免疫吸附测定,效价在1×10-6以上。该单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的IC50为225 ng/ml,除与玉米赤霉烯酮结构类似物有一定的交叉反应外,与其他参试真菌毒素均无交叉反应。所制备的单克隆抗体可用于玉米赤霉烯酮毒素初筛和定性检测。
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关键词
玉米赤霉烯酮
单克隆抗体
酶联免疫吸附法
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职称材料
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
被引量：
1
2
作者
徐重新
张霄
+4 位作者
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期985-991,共7页
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒...
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
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关键词
Cry1B毒素
单链抗体
真核表达系统
酶联免疫分析
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职称材料
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
被引量：
1
3
作者
徐重新
张存政
+6 位作者
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第5期1166-1172,共7页
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,...
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。
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关键词
苏云金芽孢杆菌
Cry1F毒素
单链抗体
酶联免疫分析
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职称材料
题名
抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
祭芳
曹欢
徐剑宏
史建荣
机构
江苏省
农业
科学院
食品质量
安全与
检测
研究所
/
江苏省
食品质量
安全
重点
实验室
--
省
部
共建
国家
重点
实验室
培育基地
/农业部
农产品
质量
安全控制
技术与
标准
重点
实验室
/
农产品
质量
安全
风险评估
实验室
<南京>
南京师范大学生命
科学
学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第2期417-422,共6页
基金
公益性行业(农业)科研专项项目(201303088)
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(12)3085]
文摘
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌抗玉米赤霉烯酮抗体的单克隆细胞株3D10。3D10的抗体类型及亚类均为IgM,其轻链为Kappa链。制备的单克隆抗体腹水通过间接酶联免疫吸附测定,效价在1×10-6以上。该单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的IC50为225 ng/ml,除与玉米赤霉烯酮结构类似物有一定的交叉反应外,与其他参试真菌毒素均无交叉反应。所制备的单克隆抗体可用于玉米赤霉烯酮毒素初筛和定性检测。
关键词
玉米赤霉烯酮
单克隆抗体
酶联免疫吸附法
Keywords
zearalenone
monoclonal antibody
enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）
分类号
TS207.5 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
被引量：
1
2
作者
徐重新
张霄
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室
南京师范大学生命
科学
学院
/
江苏省
微生物与功能基因组学
重点
实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期985-991,共7页
基金
国家“973”计划项目(2012CB722505)
国家自然科学基金项目(31272109、31201535)
江苏省农业自主创新基金项目[CX(12)5042]
文摘
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
关键词
Cry1B毒素
单链抗体
真核表达系统
酶联免疫分析
Keywords
Cryl B toxin
single-chain fragment variable（scFv） antibody
eukaryotic expression system
ELISA
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
被引量：
1
3
作者
徐重新
张存政
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
机构
江苏省
农业
科学院
食品质量
安全与
检测
研究所
/
江苏省
食品质量
安全
重点
实验室
--
省
部
共建
国家
重点
实验室
培育基地
/农业部
农产品
质量
安全控制
技术与
标准
重点
实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第5期1166-1172,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31371778)
农业推广项目[TG(14)016]
文摘
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。
关键词
苏云金芽孢杆菌
Cry1F毒素
单链抗体
酶联免疫分析
Keywords
Bacillus thuringiensis
Cry1F toxin
single-chain fragment variable(sc Fv) antibody
enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)
分类号
TS207 [轻工技术与工程—食品科学]
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
祭芳
曹欢
徐剑宏
史建荣
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014
6
在线阅读
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职称材料
2
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
徐重新
张霄
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013
1
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职称材料
3
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
徐重新
张存政
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015
1
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职称材料
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