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海藻酸钠微囊化JS25噬菌体的制备、表征及其在食品模拟体系中的释放 被引量：7
1
作者 龙门 周卉 +2 位作者 谢文 廖琪 王冉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第12期262-267,共6页
通过海藻酸钠微囊化JS25噬菌体,并对制备的JS25噬菌体微囊粉进行结构表征和稳定性分析,通过构建不同的食品模拟体系分析JS25噬菌体微囊粉的释放规律。结果表明,海藻酸钠和Ca Cl2组成的体系能有效地构建JS25噬菌体微囊粉,通过响应面优化... 通过海藻酸钠微囊化JS25噬菌体,并对制备的JS25噬菌体微囊粉进行结构表征和稳定性分析,通过构建不同的食品模拟体系分析JS25噬菌体微囊粉的释放规律。结果表明,海藻酸钠和Ca Cl2组成的体系能有效地构建JS25噬菌体微囊粉,通过响应面优化试验得到海藻酸钠和Ca Cl2添加量分别为3.72、2.55 g/100 m L时,JS25噬菌体包埋率可达88.38%;该条件下的JS25微囊粉粒径分布在20~90μm之间,且呈正态分布;并且与浮游态噬菌体相比,微囊化的JS25噬菌体稳定性显著增加至35 d(4℃和20℃)。另外,JS25微囊粉在不同食品模拟体系中均可迅速释放,呈现先增加后稳定的趋势,在8 min后释放率均达75%以上。说明该工艺可以有效固定JS25噬菌体,并且对噬菌体效价影响较小。因此,海藻酸钠微囊化JS25噬菌体可以用于JS25噬菌体微囊粉的生产加工。 展开更多
关键词 JS25噬菌体 微囊化 结构表征 释放规律
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间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素 被引量：6
2
作者 徐重新 杨晶祎 +6 位作者 陆梦晓 仲建峰 张存政 张霄 何鑫 刘媛 刘贤金 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期44-48,共5页
利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析（CI-TRFIA）方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制... 利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析（CI-TRFIA）方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明：获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL^-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度（IC10）为0.074 ng·mL^-1,中抑制浓度（IC50）为60.16 ng·mL^-1,线性检测范围（IC20~IC80）为0.96~1 633.60 ng·mL^-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论：该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。 展开更多
关键词 Cry1C毒素 多克隆抗体 稻米 时间分辨荧光免疫分析
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磁珠筛选抗Cry2Aa人源化单链抗体及检测方法的建立 被引量：2
3
作者 武爱华 王耘 +2 位作者 刘媛 胡晓丹 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期945-950,共6页
为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对... 为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围。筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆。D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016~2.881μg/ml。该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性。 展开更多
关键词 Cry2Aa毒素 单链抗体 磁珠 间接竞争ELISA
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17β-雌二醇胁迫对青菜种子萌发和幼苗生理特性的影响
4
作者 魏瑞成 龚兰 +3 位作者 张莉莉 陈明 邵明诚 王冉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期531-535,共5页
以青菜为材料,研究了不同浓度17β-雌二醇处理下,对青菜种子萌芽和幼苗生长、抗氧化酶活性以及17β-雌二醇在幼苗中累积的影响。结果表明,青菜种子的发芽势、发芽率和根长同17β-雌二醇处理浓度呈反比,17β-雌二醇对种子萌发和幼苗生长... 以青菜为材料,研究了不同浓度17β-雌二醇处理下,对青菜种子萌芽和幼苗生长、抗氧化酶活性以及17β-雌二醇在幼苗中累积的影响。结果表明,青菜种子的发芽势、发芽率和根长同17β-雌二醇处理浓度呈反比,17β-雌二醇对种子萌发和幼苗生长有抑制作用;低浓度17β-雌二醇胁迫激发细胞抗氧化酶系统（10-50μg/L）,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性随着胁迫浓度的提高而上升,当胁迫浓度在50-100μg/L时,SOD和POD活性均不同程度地下降;随着17β-雌二醇处理浓度的增加,幼苗中丙二醛（MDA）和脯氨酸（Pro）含量呈增加趋势;幼苗根部17β-雌二醇累积量大于地上组织,并与处理浓度正相关。 展开更多
关键词 17Β-雌二醇 青菜 抗氧化酶活性 脯氨酸
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小麦赤霉病菌拮抗菌AF0907的分离鉴定及其拮抗特性 被引量：17
5
作者 徐剑宏 王建伟 +2 位作者 胡晓丹 祭芳 史建荣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期517-522,共6页
为了分离筛选对小麦赤霉病菌有拮抗作用的细菌,并研究其拮抗特性。采用系列稀释法和平板对峙法从土壤中分离筛选小麦赤霉病菌拮抗菌;采用16 SrDNA序列分析和生理生化特性进行拮抗菌的鉴定;采用平板对峙法研究拮抗菌的拮抗谱;通过田间喷... 为了分离筛选对小麦赤霉病菌有拮抗作用的细菌,并研究其拮抗特性。采用系列稀释法和平板对峙法从土壤中分离筛选小麦赤霉病菌拮抗菌;采用16 SrDNA序列分析和生理生化特性进行拮抗菌的鉴定;采用平板对峙法研究拮抗菌的拮抗谱;通过田间喷施试验研究拮抗菌对小麦赤霉病的防治效果。结果显示:从土壤中分离筛选到小麦赤霉病菌拮抗菌AF0907,根据其形态、生理生化特性以及16 SrDNA序列分析,菌株AF0907被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。AF0907对10种常见的植物病原菌都具有拮抗效果;菌株AF0907可以抑制禾谷镰刀菌菌丝的生长,也能抑制病原菌孢子的萌发。田间试验结果显示:拮抗菌AF0907可以有效地降低小麦赤霉病的发病率,先喷施拮抗菌液再喷施赤霉孢子液处理下防治效率可以达到40.37%。 展开更多
关键词 赤霉病菌 枯草芽孢杆菌 拮抗菌 拮抗物质
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植物源化合物百里香酚对西瓜枯萎病菌的抑菌机制初探 被引量：15
6
作者 张猛 陈健 +1 位作者 薛延丰 石志琦 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1019-1024,共6页
为了明确植物源化合物百里香酚对西瓜枯萎病菌(Fusarium oxyporum f.sp.niveum)的抑菌活性及机制,采用室内生化测定方法研究了其对西瓜枯萎病菌菌丝生长量、分生孢子产生及萌发、细胞膜通透性、蛋白质及DNA合成的影响,并通过显微镜观察... 为了明确植物源化合物百里香酚对西瓜枯萎病菌(Fusarium oxyporum f.sp.niveum)的抑菌活性及机制,采用室内生化测定方法研究了其对西瓜枯萎病菌菌丝生长量、分生孢子产生及萌发、细胞膜通透性、蛋白质及DNA合成的影响,并通过显微镜观察菌丝形态的变化。结果表明,百里香酚对菌丝生长量、分生孢子产生和萌发具有较强的抑制作用,其EC50值分别为42.91 mg/L、35.18 mg/L和56.46 mg/L。经百里香酚处理后的菌丝生长缓慢,细弱,分支减少,分生孢子的产生受到抑制;百里香酚浓度为25 mg/L时,能够显著影响菌丝体细胞膜的电导率,电导率随着处理时间的延长上升明显。浓度为12.5 mg/L时,百里香酚对西瓜枯萎病菌菌丝体的蛋白质合成有一定的抑制作用;浓度为100.0 mg/L时,其对菌丝体DNA的合成有明显的抑制作用。说明百里香酚通过改变西瓜枯萎病菌菌丝体细胞膜通透性、抑制菌体内部分蛋白质及DNA的生物合成达到抑菌效果。 展开更多
关键词 西瓜枯萎病菌 百里香酚 抑菌机制
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植物源杀菌剂1%蛇床子素水乳剂在黄瓜和土壤中的残留动态 被引量：5
7
作者 陈浩 胡梁斌 +4 位作者 王春梅 徐庆宣 黄晓艳 石志琦 范永坚 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期1386-1390,共5页
采用田间试验方法,探讨蛇床子素在黄瓜和土壤中的消解动态和最终残留。样品经甲醇和丙酮提取,石油醚液-液分配,固相萃取小柱净化后,进行高效液相色谱分析。仪器最小检出量（LOD）为0.2 ng,在黄瓜和土壤中的最低检出质量分数（LOQ）均为0... 采用田间试验方法,探讨蛇床子素在黄瓜和土壤中的消解动态和最终残留。样品经甲醇和丙酮提取,石油醚液-液分配,固相萃取小柱净化后,进行高效液相色谱分析。仪器最小检出量（LOD）为0.2 ng,在黄瓜和土壤中的最低检出质量分数（LOQ）均为0.02 mg/kg。蛇床子素在黄瓜中的平均回收率为88.80%-93.61%,变异系数为1.94%-4.92%;在土壤中的平均回收率为90.74%-94.55%,变异系数为3.20%-6.45%。田间试验结果显示,蛇床子素消解较快,在南京和山东两地黄瓜中降解半衰期分别为0.76 d和0.87 d,土壤中降解半衰期分别为1.12 d和1.15 d。在黄瓜上使用1%蛇床子素水乳剂,按照推荐剂量的1.5倍4 500 g/hm2和推荐剂量3 000 g/hm2喷雾5-6次,距最后一次施药1 d,黄瓜中的残留量为0.11-0.43 mg/kg,土壤中的残留量为0.31-0.77 mg/kg,均小于1.00 mg/kg。以上数据表明,蛇床子素在黄瓜和土壤中属低残留、易降解农药。 展开更多
关键词 植物源 杀菌剂 蛇床子素 残留动态 黄瓜 土壤
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1株产脂肽类抗生素芽孢杆菌的鉴定及脂肽类抗生素相关基因克隆 被引量：7
8
作者 冉军舰 徐剑宏 +1 位作者 胡晓丹 史建荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第17期127-132,共6页
从小麦根际土壤中分离得到一株对禾谷镰刀菌有拮抗作用的菌株7F1。以菌株7F1基因组总DNA为模板,通过16S rDNA和gyrB基因序列分析,鉴定7F1为多粘类芽孢杆菌。本实验对该菌种产拮抗物的稳定性进行了研究,同时,应用特异性引物对7F1中脂肽... 从小麦根际土壤中分离得到一株对禾谷镰刀菌有拮抗作用的菌株7F1。以菌株7F1基因组总DNA为模板,通过16S rDNA和gyrB基因序列分析,鉴定7F1为多粘类芽孢杆菌。本实验对该菌种产拮抗物的稳定性进行了研究,同时,应用特异性引物对7F1中脂肽类抗生素合成相关基因进行检测。结果表明：该菌产生的拮抗物在40-90℃保持较高的活性;在蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抑菌活性显著下降;在pH 3.0-10.0具有抑菌活性;使用已报道的脂肽类抗生素基因片段设计的引物进行聚合酶链式反应扩增,从该菌的基因组DNA中扩增得到了3种bamC、eriSa、ituC脂肽类抗生素合成酶基因。此研究结果对脂肽类抗生素进一步的分离提供了重要参考。 展开更多
关键词 脂肽类抗生素 芽孢杆菌 鉴定 抑菌活性 基因克隆
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人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定 被引量：5
9
作者 徐重新 张存政 +3 位作者 张霄 刘媛 黄鹰 刘贤金 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期47-52,共6页
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立... 利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明:经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg.mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg.mL-1,最低检测限(IC10)为0.025 7μg.mL-1,线性检测范围为0.5～5.0μg.mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1 mmol.L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12 h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coli HB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。 展开更多
关键词 Cry1B毒素蛋白 单链抗体 可溶性表达 抗原结合活性
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含水量、储存条件对储存期小麦中DON、NIV毒素含量变化的影响 被引量：9
10
作者 姚振宇 殷宪超 +4 位作者 俞明正 董飞 祭芳 徐剑宏 史建荣 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期300-303,共4页
研究含水量分别为11.5%、12.8%、15.7%的小麦在4℃冷库、25℃恒温室、常温库、地下仓库4种环境下储藏0～90d镰刀菌毒素DON、NIV含量的变化情况,并对不同储存环境下小麦含水量变化情况进行分析.结果表明：90d内,3种含水量的小麦在4℃冷库... 研究含水量分别为11.5%、12.8%、15.7%的小麦在4℃冷库、25℃恒温室、常温库、地下仓库4种环境下储藏0～90d镰刀菌毒素DON、NIV含量的变化情况,并对不同储存环境下小麦含水量变化情况进行分析.结果表明：90d内,3种含水量的小麦在4℃冷库和25℃恒温室条件下,DON、NIV毒素均未发生显著变化.储存在常温库和地下仓库2种不可控环境下的3种含水量小麦在60d后DON毒素含量降低,NIV毒素含量未发生显著变化. 展开更多
关键词 小麦 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 雪腐镰刀菌烯醇 储藏 镰刀菌毒素
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