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抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
祭芳
曹欢
+1 位作者
徐剑宏
史建荣
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第2期417-422,共6页
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与S...
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌抗玉米赤霉烯酮抗体的单克隆细胞株3D10。3D10的抗体类型及亚类均为IgM,其轻链为Kappa链。制备的单克隆抗体腹水通过间接酶联免疫吸附测定,效价在1×10-6以上。该单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的IC50为225 ng/ml,除与玉米赤霉烯酮结构类似物有一定的交叉反应外,与其他参试真菌毒素均无交叉反应。所制备的单克隆抗体可用于玉米赤霉烯酮毒素初筛和定性检测。
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关键词
玉米赤霉烯酮
单克隆抗体
酶联免疫吸附法
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职称材料
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
被引量：
1
2
作者
徐重新
张存政
+6 位作者
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第5期1166-1172,共7页
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,...
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。
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关键词
苏云金芽孢杆菌
Cry1F毒素
单链抗体
酶联免疫分析
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职称材料
题名
抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
祭芳
曹欢
徐剑宏
史建荣
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室
/
农产品
质量
安全
风险评估
实验室
<南京>
南京师范大学生命
科学
学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第2期417-422,共6页
基金
公益性行业(农业)科研专项项目(201303088)
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(12)3085]
文摘
为建立快速、简单、灵敏、有效的玉米赤霉烯酮的检测方法,将玉米赤霉烯酮与羧甲氧基胺半盐酸盐反应,合成半抗原ZEN-oxime,通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备玉米赤霉烯酮人工抗原,以人工抗原ZENBSA免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌抗玉米赤霉烯酮抗体的单克隆细胞株3D10。3D10的抗体类型及亚类均为IgM,其轻链为Kappa链。制备的单克隆抗体腹水通过间接酶联免疫吸附测定,效价在1×10-6以上。该单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的IC50为225 ng/ml,除与玉米赤霉烯酮结构类似物有一定的交叉反应外,与其他参试真菌毒素均无交叉反应。所制备的单克隆抗体可用于玉米赤霉烯酮毒素初筛和定性检测。
关键词
玉米赤霉烯酮
单克隆抗体
酶联免疫吸附法
Keywords
zearalenone
monoclonal antibody
enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）
分类号
TS207.5 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
被引量：
1
2
作者
徐重新
张存政
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第5期1166-1172,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31371778)
农业推广项目[TG(14)016]
文摘
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。
关键词
苏云金芽孢杆菌
Cry1F毒素
单链抗体
酶联免疫分析
Keywords
Bacillus thuringiensis
Cry1F toxin
single-chain fragment variable(sc Fv) antibody
enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)
分类号
TS207 [轻工技术与工程—食品科学]
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备
祭芳
曹欢
徐剑宏
史建荣
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014
6
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职称材料
2
抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用
徐重新
张存政
何鑫
张留娟
张霄
仲建锋
刘媛
谢雅晶
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015
1
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