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江苏某牛场犊牛呼吸道疾病原检测与牛支原体的分离鉴定分析
1
作者
张洪菊
程子龙
+5 位作者
韦艳娜
毛立
刘茂军
牛家强
冯志新
李文良
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期52-60,共9页
为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因,采集发病牛鼻拭子30份,采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体(M.bovis)阳性样本进行分离培养,进而进行生化实验、生长曲线测定、...
为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因,采集发病牛鼻拭子30份,采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体(M.bovis)阳性样本进行分离培养,进而进行生化实验、生长曲线测定、药敏试验和遗传进化分析。结果显示:M.bovis(18份)、溶血性曼氏杆菌(1份)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)(2份)、牛冠状病毒(BCoV)(6份)为阳性,其他病原均为阴性;3株M.bovis生长曲线一致,不发酵葡萄糖、甘露醇,不水解明胶、七叶苷,不分解尿素;3株M.bovis均对泰妙菌素、林可霉素和泰万菌素敏感;序列分析表明,3株M.bovis oppF基因序列与各参考株的同源性为98.6%~100%,与国内菌株亲缘关系近,该牛场流行BVDV毒株为BVDV-1a亚型,BCoV毒株属于GIIb亚型。结果表明,该病例主要由M.bovis引起,伴发BCoV和BVDV,可优先选用泰妙菌素、林可霉素、泰万菌素进行防控,同时应加强病毒性病原的监测与防控。
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关键词
牛
呼吸道病
牛支原体
分离鉴定
药敏试验
进化分析
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职称材料
裂谷热病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
傅欣玲
张聪
+5 位作者
张纹纹
李文良
杨蕾蕾
毛立
李基棕
江杰元
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2021年第3期87-92,共6页
裂谷热(RVF)是由裂谷热病毒(RVFV)引起的一种人兽共患传染病,主要由蚊媒传播。该病主要感染反刍动物,可引起流产和新生胎儿死亡,人类对该病也易感,严重者可导致死亡。对于无RVF的国家,建立相应的病原学与血清学检测方法对于防止该病传...
裂谷热(RVF)是由裂谷热病毒(RVFV)引起的一种人兽共患传染病,主要由蚊媒传播。该病主要感染反刍动物,可引起流产和新生胎儿死亡,人类对该病也易感,严重者可导致死亡。对于无RVF的国家,建立相应的病原学与血清学检测方法对于防止该病传入至关重要。为了建立基于病毒N蛋白的诊断技术,本研究构建了裂谷热病毒N基因原核表达质粒pET-28a-N,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达,重组蛋白分子量约为29 kDa,主要以上清液形式存在。大量表达并纯化重组蛋白,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。采用间接ELISA和ID Vet公司阻断ELISA试剂盒检测免疫小鼠抗体效价及特异性,并用Western blot检测多克隆抗体反应性。结果表明,免疫后的抗体效价迅速升高,最终可达51200以上;阻断ELISA和Western blot检测结果表明,制备的多克隆抗体具有良好的反应性与特异性。通过3次亚克隆最终获得2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的单克隆抗体均可与重组蛋白反应,重链均为IgG2a型,轻链为κ型。本研究为RVF诊断方法的建立奠定了基础。
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关键词
裂谷热病毒
N蛋白
原核表达
单克隆抗体
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职称材料
题名
江苏某牛场犊牛呼吸道疾病原检测与牛支原体的分离鉴定分析
1
作者
张洪菊
程子龙
韦艳娜
毛立
刘茂军
牛家强
冯志新
李文良
机构
西藏农牧
学院
动物
科学
学院
农业
农村部
西藏包虫病防治
重点
实验室
西藏高原动物疫病
研究
自治区高校
重点
实验室
江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地
兽用
生物制品
(泰州)国泰
技术
创新中心
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期52-60,共9页
基金
青海省基础研究计划应用基础研究项目(2024-ZJ-753)
江苏省重点研发计划(现代农业)重点项目(BE2022394)。
文摘
为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因,采集发病牛鼻拭子30份,采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体(M.bovis)阳性样本进行分离培养,进而进行生化实验、生长曲线测定、药敏试验和遗传进化分析。结果显示:M.bovis(18份)、溶血性曼氏杆菌(1份)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)(2份)、牛冠状病毒(BCoV)(6份)为阳性,其他病原均为阴性;3株M.bovis生长曲线一致,不发酵葡萄糖、甘露醇,不水解明胶、七叶苷,不分解尿素;3株M.bovis均对泰妙菌素、林可霉素和泰万菌素敏感;序列分析表明,3株M.bovis oppF基因序列与各参考株的同源性为98.6%~100%,与国内菌株亲缘关系近,该牛场流行BVDV毒株为BVDV-1a亚型,BCoV毒株属于GIIb亚型。结果表明,该病例主要由M.bovis引起,伴发BCoV和BVDV,可优先选用泰妙菌素、林可霉素、泰万菌素进行防控,同时应加强病毒性病原的监测与防控。
关键词
牛
呼吸道病
牛支原体
分离鉴定
药敏试验
进化分析
Keywords
Cattle
respiratory diseases
Mycoplasma bovis
isolation and identification
antimicrobial susceptibility test
phylogenetic analysis
分类号
S858.23 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
裂谷热病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
傅欣玲
张聪
张纹纹
李文良
杨蕾蕾
毛立
李基棕
江杰元
机构
江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地
南京
农业
大学动物医
学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2021年第3期87-92,共6页
基金
“十三五”国家重点研发计划(2016YFD0500908)
江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(18)2003)。
文摘
裂谷热(RVF)是由裂谷热病毒(RVFV)引起的一种人兽共患传染病,主要由蚊媒传播。该病主要感染反刍动物,可引起流产和新生胎儿死亡,人类对该病也易感,严重者可导致死亡。对于无RVF的国家,建立相应的病原学与血清学检测方法对于防止该病传入至关重要。为了建立基于病毒N蛋白的诊断技术,本研究构建了裂谷热病毒N基因原核表达质粒pET-28a-N,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达,重组蛋白分子量约为29 kDa,主要以上清液形式存在。大量表达并纯化重组蛋白,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。采用间接ELISA和ID Vet公司阻断ELISA试剂盒检测免疫小鼠抗体效价及特异性,并用Western blot检测多克隆抗体反应性。结果表明,免疫后的抗体效价迅速升高,最终可达51200以上;阻断ELISA和Western blot检测结果表明,制备的多克隆抗体具有良好的反应性与特异性。通过3次亚克隆最终获得2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的单克隆抗体均可与重组蛋白反应,重链均为IgG2a型,轻链为κ型。本研究为RVF诊断方法的建立奠定了基础。
关键词
裂谷热病毒
N蛋白
原核表达
单克隆抗体
Keywords
RVFV
N protein
prokaryotic expression
monoclonal antibody
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
江苏某牛场犊牛呼吸道疾病原检测与牛支原体的分离鉴定分析
张洪菊
程子龙
韦艳娜
毛立
刘茂军
牛家强
冯志新
李文良
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
裂谷热病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
傅欣玲
张聪
张纹纹
李文良
杨蕾蕾
毛立
李基棕
江杰元
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2021
1
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