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兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用: 1; 作者李嘉逸伍孟婷 +10 位作者陈萌萌仇汝龙魏后军范志宇胡波葛雷李一鸣徐为中董海龙宋艳华王芳《江苏农业科学》北大核心 2025年第13期210-215,共6页; 为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus,LaRV),根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应... 展开更多; 关键词兔轮状病毒 TAQMAN探针荧光定量RT-PCR 检测方法; 在线阅读下载PDF 职称材料

Sf9昆虫细胞系的致瘤性研究: 2; 作者胡波王芳 +4 位作者范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平《江苏农业科学》 2019年第18期209-211,共3页; 为确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,检测了Sf9细胞对裸鼠的致瘤性。将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和空白对照组,以各自细... 展开更多; 关键词 SF9细胞致瘤性裸鼠疫苗安全性; 在线阅读下载PDF 职称材料

家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定被引量：2: 3; 作者陈萌萌范志宇 +6 位作者胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳《江苏农业科学》 2019年第23期78-81,共4页; 通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序... 展开更多; 关键词家兔兔出血症病毒 IFN-β基因启动子荧光素酶转录调控; 在线阅读下载PDF 职称材料

兔流行性腹胀病样品中产气荚膜梭菌的分离鉴定被引量：2: 4; 作者胡波魏后军 +3 位作者范志宇仇汝龙薛家宾王芳《江苏农业科学》 2020年第6期160-163,共4页; 从发生典型病理特征的兔流行性腹胀病死亡兔盲肠内容物中分离到1株产气荚膜梭菌,命名为SD14-02。经革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA比对和毒素型特异性PCR等方法对分离细菌进行鉴定和分型,结果显示,分离株SD14-02为革兰氏阳性杆菌,生化... 展开更多; 关键词兔流行性腹胀病产气荚膜梭菌分离鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

兔NF-κB p50蛋白质的原核表达及鉴定被引量：1: 5; 作者胡波魏后军 +6 位作者范志宇仇汝龙宋艳华陈萌萌朱伟峰徐为中王芳《江苏农业科学》 2019年第22期223-223,224,225,共3页; 为获得可溶性表达的兔NF-κB p50蛋白,本研究对兔p50基因进行大肠杆菌密码子优化及合成,并连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-p50融合蛋白。聚丙烯酰胺... 展开更多; 关键词 NF-ΚB p50蛋白原核表达鉴定兔; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用: 1; 作者李嘉逸伍孟婷陈萌萌仇汝龙魏后军范志宇胡波葛雷李一鸣徐为中董海龙宋艳华王芳; 机构西藏农牧学院江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心; 出处《江苏农业科学》北大核心 2025年第13期210-215,共6页; 基金现代农业产业技术体系建设专项(编号:CARS-43-C-1)。; 文摘为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus,LaRV),根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应用。结果表明,阳性质粒标准品所建立的标准曲线在使用稀释度为1×10^(7) copies/μL至1×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,r 2为0.999,扩增效率为98.781%;该方法对LaRV具有高度特异性,与兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型及兔多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等其他病原间无交叉反应;该方法灵敏度高,最低检测值为1×10^(2) copies/μL,比普通PCR灵敏度提高了约100倍;该方法重复性良好,组内和组间变异系数在0.15%~1.41%之间,均小于2%。对45份临床样本采用构建的TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法和常规RT-PCR检测方法进行对比,符合率为100%。因此,本研究建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR具有特异性强、敏感性高、重复性好等优势。; 关键词兔轮状病毒 TAQMAN探针荧光定量RT-PCR 检测方法; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Sf9昆虫细胞系的致瘤性研究: 2; 作者胡波王芳范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平; 机构南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室; 出处《江苏农业科学》 2019年第18期209-211,共3页; 基金现代农业产业技术体系建设专项资金(编号:CARS-43-C-1); 文摘为确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,检测了Sf9细胞对裸鼠的致瘤性。将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和空白对照组,以各自细胞悬液皮下接种裸鼠。在接种后21 d和84 d观察接种部位肿瘤形成情况,并进行病理组织学检查。结果显示,接种后21 d,Hep-2细胞组裸鼠注射部位形成米粒大小结节,经病理组织学检查为鳞状细胞癌,而CEF细胞组和Sf9细胞组注射部位均无结节。接种后84 d,经病理组织学检查,CEF细胞组和Sf9细胞组均无肿瘤形成。本研究表明基础代次和最高限制代次Sf9细胞均不具有致瘤性,Sf9细胞可用于疫苗生产。; 关键词 SF9细胞致瘤性裸鼠疫苗安全性; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定被引量：2: 3; 作者陈萌萌范志宇胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳; 机构江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 出处《江苏农业科学》 2019年第23期78-81,共4页; 基金国家自然科学基金(编号:31702274) 现代农业产业技术体系建设专项资金(编号:CARS-43-C-1); 文摘通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。; 关键词家兔兔出血症病毒 IFN-β基因启动子荧光素酶转录调控; 分类号 S858.291 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名兔流行性腹胀病样品中产气荚膜梭菌的分离鉴定被引量：2: 4; 作者胡波魏后军范志宇仇汝龙薛家宾王芳; 机构江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室; 出处《江苏农业科学》 2020年第6期160-163,共4页; 基金现代农业产业技术体系建设专项(编号:CARS-43-C-1)。; 文摘从发生典型病理特征的兔流行性腹胀病死亡兔盲肠内容物中分离到1株产气荚膜梭菌,命名为SD14-02。经革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA比对和毒素型特异性PCR等方法对分离细菌进行鉴定和分型,结果显示,分离株SD14-02为革兰氏阳性杆菌,生化鉴定显示其符合产气荚膜梭菌的生化图谱。经系统发育分析,SD14-02的16S rRNA基因序列与产气荚膜梭菌位于同一分支。经毒素型特异性PCR方法鉴定,SD14-02为A型产气荚膜梭菌,蛋白电泳显示其与A型产气荚膜梭菌疫苗株苏84-A存在一定差异。动物试验证明SD14-02对小鼠具有致病性。研究结果为兔流行性腹胀病致病原的进一步研究奠定了基础。; 关键词兔流行性腹胀病产气荚膜梭菌分离鉴定; 分类号 S858.291 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名兔NF-κB p50蛋白质的原核表达及鉴定被引量：1: 5; 作者胡波魏后军范志宇仇汝龙宋艳华陈萌萌朱伟峰徐为中王芳; 机构江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室; 出处《江苏农业科学》 2019年第22期223-223,224,225,共3页; 基金国家自然科学基金(编号:31600130) 现代农业产业技术体系建设专项资金(编号:CARS-43-C-1); 文摘为获得可溶性表达的兔NF-κB p50蛋白,本研究对兔p50基因进行大肠杆菌密码子优化及合成,并连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-p50融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,GST-p50蛋白主要以可溶形式高效表达。经谷胱甘肽S转移酶(GST)磁珠纯化及蛋白免疫印迹(western blot)鉴定,所表达的GST-p50蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步开展兔NF-κB互作蛋白及信号通路的研究奠定了基础。; 关键词 NF-ΚB p50蛋白原核表达鉴定兔; 分类号 S858.291 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用	李嘉逸伍孟婷陈萌萌仇汝龙魏后军范志宇胡波葛雷李一鸣徐为中董海龙宋艳华王芳	《江苏农业科学》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	Sf9昆虫细胞系的致瘤性研究	胡波王芳范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平	《江苏农业科学》	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定	陈萌萌范志宇胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳	《江苏农业科学》	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	兔流行性腹胀病样品中产气荚膜梭菌的分离鉴定	胡波魏后军范志宇仇汝龙薛家宾王芳	《江苏农业科学》	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	兔NF-κB p50蛋白质的原核表达及鉴定	胡波魏后军范志宇仇汝龙宋艳华陈萌萌朱伟峰徐为中王芳	《江苏农业科学》	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料