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PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究被引量：2: 1; 作者刘国阳华涛 +5 位作者乔绪稳唐波常晨侯继波李锦春张道华《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第9期18-26,34,共10页; 【目的】研制PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白与PPV VP2结构蛋白二联亚单位疫苗。【方法】设计截去NLS信号肽序列的Cap蛋白氨基酸序列和VP2蛋白氨基酸全序列,分别进行大肠杆菌偏嗜密码子优化,构建重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统表达出可... 展开更多; 关键词 CAP蛋白 VP2蛋白可溶性表达二联亚单位疫苗猪细小病毒猪圆环病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定被引量：2: 2; 作者王志胜刘芳 +3 位作者许梦微乔永峰侯继波王继春《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2071-2080,共10页; 拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获... 展开更多; 关键词火鸡疱疹病毒细菌人工染色体糖蛋白C 生长动力学免疫效力; 在线阅读下载PDF 职称材料

减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定被引量：2: 3; 作者郑金陈滔 +4 位作者陆吉虎高峰候继波黎满香唐应华《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期600-603,共4页; 为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf... 展开更多; 关键词减蛋下降综合征病毒重组Knob-S 真核表达杆状病毒表达系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定被引量：2: 4; 作者张传健许梦微 +2 位作者王志胜侯继波王继春《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1064-1070,共7页; 为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli D... 展开更多; 关键词鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体; 在线阅读下载PDF 职称材料

转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建被引量：1: 5; 作者徐海鲍熹 +3 位作者王义伟卢宇许梦薇侯继波《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期117-121,共5页; 为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构... 展开更多; 关键词同源重组 DNA疫苗真核表达 T7噬菌体; 在线阅读下载PDF 职称材料

稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建: 6; 作者冯磊吴培培 +3 位作者褚轩陈丽王伟峰侯继波《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期1084-1090,共7页; 为了构建能稳定表达人Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)的重组MDCK细胞,并考察该重组细胞株对禽流感H9亚型病毒的增殖能力,采用基因工程的方法,将TMPRSS2基因克隆入真核表达载体中获得重组表达载体p IRES-TMPRSS2。采用25 000线性PEI进... 展开更多; 关键词 MDCK细胞稳定转染跨膜型丝氨酸蛋白酶禽流感病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究被引量：2: 1; 作者刘国阳华涛乔绪稳唐波常晨侯继波李锦春张道华; 机构安徽农业大学动物科技学院江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第9期18-26,34,共10页; 基金公益性(农业)行业科研专项(201303046) 江苏省农业科技自主创新项目[CX(15)1059]; 文摘【目的】研制PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白与PPV VP2结构蛋白二联亚单位疫苗。【方法】设计截去NLS信号肽序列的Cap蛋白氨基酸序列和VP2蛋白氨基酸全序列,分别进行大肠杆菌偏嗜密码子优化,构建重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统表达出可溶性的Cap蛋白和VP2重组蛋白。将重组蛋白纯化后分别与ISA201佐剂混合制备单苗和二联亚单位疫苗,免疫ICR小鼠,同时设立PBS空白对照和大肠杆菌BL21对照。首免后21d进行加强免疫,利用MTT比色法、细胞中和试验法和ELISA法对免疫小鼠淋巴细胞的转化功能及细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α)mRNA水平、免疫后中和抗体效价以及ELISA抗体水平进行检测。小鼠二免21d后进行PPV和PCV2混合攻毒,利用Real-time PCR法定量测定攻毒后小鼠脾脏的病毒含量。【结果】成功构建了重组质粒pET32a-Cap和pET32a-VP2,表达出可溶性蛋白Cap和VP2,经GEM颗粒和饱和硫酸铵沉淀法纯化蛋白,获得的PCV2Cap蛋白质量浓度为1 213μg/mL,PPV VP2蛋白质量浓度为1 025μg/mL。两种蛋白混合乳化制苗后无相互免疫抑制作用,并且能够诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。免疫后42d,单苗免疫组和二联亚单位疫苗组PCV2ELISA抗体效价均能达到800以上,中和抗体达到32~38,PPV HI抗体效价均高于6,PPV中和效价高于300,并且诱导机体产生强烈的淋巴细胞增殖反应,提高IL-4和IFN-γ的mRNA表达水平。攻毒试验结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2和PPV含量显著低于对照组,免疫组组间无显著性差异。【结论】利用大肠杆菌表达的PCV2Cap蛋白和PPV VP2蛋白制备的二联亚单位疫苗免疫ICR小鼠,其抗体水平与Cap、VP2单苗免疫水平相当,且对ICR小鼠有较好的免疫保护作用。; 关键词 CAP蛋白 VP2蛋白可溶性表达二联亚单位疫苗猪细小病毒猪圆环病毒; Keywords Cap protein VP2 protein soluble expression duplex subunit vaccine porcine parvovirus(PPV) porcine circovirus(PCV); 分类号 S854.4 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定被引量：2: 2; 作者王志胜刘芳许梦微乔永峰侯继波王继春; 机构江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心南京农业大学动物医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2071-2080,共10页; 基金公益性行业(农业)科研专项(201303046) 江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(12)3061] 江苏省自然科学基金项目(BK20131334); 文摘拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获得BAC,拯救病毒获得mini-F重组病毒和gC恢复病毒后,与亲本病毒(HVT FC126)比较生长动力学和对鸡马立克病的免疫效力。结果:获得数个BAC阳性克隆,取其中一个克隆(BAC^(HVT-G))成功拯救出HVT mini-F重组病毒(HVT^(BAC-ΔgC)),并成功获得了gC恢复毒株(HVT^(BAC-gC-R))。生长特性和免疫效力试验表明HVT^(BAC-gC-R)与HVT FC126无显著差异,而HVT^(BAC-ΔgC)增殖能力和免疫效力均明显下降。成功构建了HVT全基因组的感染性BAC;HVT的gC基因是一个非必需基因,但对病毒的增殖能力和免疫效力有重要影响。; 关键词火鸡疱疹病毒细菌人工染色体糖蛋白C 生长动力学免疫效力; Keywords herpesvirus of turkey bacterial artificial chromosome glycoprotein C growth kinetics immune efficiency; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定被引量：2: 3; 作者郑金陈滔陆吉虎高峰候继波黎满香唐应华; 机构湖南农业大学动物医学院江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期600-603,共4页; 基金国家自然科学基金项目(31201904) 农业部公益性行业(农业)科研专项经费项目(201303046) +1 种基金江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(14)5045]; 文摘为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,利用重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白质。重组Knob-S蛋白质经Western blotting和间接免疫荧光试验鉴定均为阳性。将重组Knob-S蛋白质制备成疫苗,按1羽0.3 ml(含50μg的重组病毒)免疫6周龄非免海兰褐雏鸡,在免疫后第2周可检测到血凝抑制抗体效价达8.5 lg2,在第3周达到高峰(9.5 lg2),表明重组Knob-S蛋白质具有较好的免疫原性。; 关键词减蛋下降综合征病毒重组Knob-S 真核表达杆状病毒表达系统; Keywords 重组Knob-S egg drop syndrome virus recombi-nant Knob-S eukaryotic expression baculovirus expres-sion system; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定被引量：2: 4; 作者张传健许梦微王志胜侯继波王继春; 机构江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1064-1070,共7页; 基金公益性行业(农业)科研专项(201303046) 江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(12)3061] 江苏省自然科学基金项目(BK20131334); 文摘为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli DH10B中,对获得的克隆用酶切、PCR方法进行鉴定并测序。提取阳性克隆的DNA转染CEF,以拯救重组病毒。再通过将带有相同同源臂和UL44(糖蛋白质C,gC)基因的片段和阳性克隆的DNA共转染鸡胚成纤维细胞进行重组,以获得gC恢复病毒。采用0.01感染复数(MOI)感染CEF对亲本病毒、恢复病毒进行多步法生长曲线测定,比较其有无差异。结果显示:成功获得了DEV的mini-F重组病毒,命名为DEV(atten)-mini-F,获得2个阳性克隆S1、S2,将S1命名为pDEV(atten),应用pDEV(atten)拯救重组病毒获得gC恢复病毒DEV(atten)ΔgC-R,生长特性的结果显示亲本病毒与恢复病毒间无显著性差异。表明成功构建的DEV(atten)的细菌人工染色体为全基因组的感染性克隆。; 关键词鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体; Keywords duck enteritis virus chicken embryo attenuated strain; 分类号 S858.32 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建被引量：1: 5; 作者徐海鲍熹王义伟卢宇许梦薇侯继波; 机构江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期117-121,共5页; 基金江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(11)4073]; 文摘为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒p UC-L-EEB-R。将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体。提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达。结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入。T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录。表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达。; 关键词同源重组 DNA疫苗真核表达 T7噬菌体; Keywords homologous recombination DNA vaccine eukaryotic expression T7 phage; 分类号 Q939.48 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建: 6; 作者冯磊吴培培褚轩陈丽王伟峰侯继波; 机构江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期1084-1090,共7页; 基金农业部公益性行业(农业)科研专项经费项目(201303046) 江苏省农业科技自主创新基金项目[SCX(13)5036]; 文摘为了构建能稳定表达人Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)的重组MDCK细胞,并考察该重组细胞株对禽流感H9亚型病毒的增殖能力,采用基因工程的方法,将TMPRSS2基因克隆入真核表达载体中获得重组表达载体p IRES-TMPRSS2。采用25 000线性PEI进行悬浮生长MDCK细胞的转染操作,经两轮G418抗性筛选获得能够稳定表达该蛋白质的重组MDCK-Sus-TMPRSS2细胞。RT-PCR、Western blot以及间接免疫荧光检测(IFA)的结果显示,TMPRSS2已在该重组细胞株中正常表达。该重组细胞的悬浮比生长速率达到0.438 d-1;在3 L反应器中,最大细胞密度可达到1 ml6.83×106个。在对6株禽流感H9亚型病毒的连续盲传试验中,经MDCK-Sus-TMPRSS2细胞盲传的子代病毒可以获得较高的血凝效价和半数组织感染滴度。; 关键词 MDCK细胞稳定转染跨膜型丝氨酸蛋白酶禽流感病毒; Keywords MDCK cell stable transfection transmembrane serine protease avian influenza virus; 分类号 Q813.1 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究	刘国阳华涛乔绪稳唐波常晨侯继波李锦春张道华	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2018	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定	王志胜刘芳许梦微乔永峰侯继波王继春	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定	郑金陈滔陆吉虎高峰候继波黎满香唐应华	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定	张传健许梦微王志胜侯继波王继春	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2014	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建	徐海鲍熹王义伟卢宇许梦薇侯继波	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建	冯磊吴培培褚轩陈丽王伟峰侯继波	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料