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金黄色葡萄球菌核酸酶A在温控双表达载体中的表达及其活性分析
被引量：
3
1
作者
付立霞
张磊
+4 位作者
李欣容
韩先干
高波
张晓君
魏文志
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期34-37,共4页
菌蜕制备时,金黄色葡萄球菌核酸酶A(Staphylococcal nuclease A,SNA)在温控单表达系统中表达时,对宿主菌的灭活效率比其在双表达系统中与基因E共表达时的灭活效率高近一个数量级。为探究导致这种差异的可能机制,将SNA克隆至一温控双表...
菌蜕制备时,金黄色葡萄球菌核酸酶A(Staphylococcal nuclease A,SNA)在温控单表达系统中表达时,对宿主菌的灭活效率比其在双表达系统中与基因E共表达时的灭活效率高近一个数量级。为探究导致这种差异的可能机制,将SNA克隆至一温控双表达载体进行诱导表达并对其活性进行综合分析。结果显示,胞内和胞外产物均具有核酸酶活性,分别在升温诱导30 min和90 min后被检出,对宿主菌的4 h灭活率为99.7%,宿主基因组亦被成功降解。这表明,SNA在温控双表达载体中的表达仍能如在单表达载体中一样有效灭活细菌,裂解基因E和SNA的共表达可能才是造成上述差异的主要原因。
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关键词
金黄色葡萄球菌核酸酶A
菌蜕
裂解基因E
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职称材料
实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数
被引量：
3
2
作者
付立霞
高雯
+4 位作者
韩先干
高波
张晓君
刘晓丹
曾令兵
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2018年第4期63-70,共8页
为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质...
为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数,同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率。结果显示,以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和p EI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63±0.30、5.04±0.18和4.22±0.15、5.13±0.50,显著低于以水煮法测得的pEI1和p EI2拷贝数的绝对定量11.84±0.80、11.70±0.25和相对定量13.85±1.64、11.90±0.97。回收率结果显示,试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8±4.1)%,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1±0.5)%和pEI2的回收率(31.3±1.7)%。结果表明:通过实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时,基因组的制备以水煮法为宜,爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒。
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关键词
鮰爱德华氏菌(Edwardsiella
ictaluri)
隐蔽质粒
质粒拷贝数
实时定量PCR
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌核酸酶A在温控双表达载体中的表达及其活性分析
被引量：
3
1
作者
付立霞
张磊
李欣容
韩先干
高波
张晓君
魏文志
机构
江苏省人畜共患病学重点实验室扬州大学动物科学与技术学院
中国农业
科学
院上海兽医研究所
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期34-37,共4页
基金
江苏省人兽共患病学重点实验室项目(No.R1510)
农业部淡水生物多样性保护重点实验室开放课题(LFBC0910)
+1 种基金
上海市科技兴农重点攻关项目(2015HNG1-9)
国家自然科学基金项目(No.31671313)
文摘
菌蜕制备时,金黄色葡萄球菌核酸酶A(Staphylococcal nuclease A,SNA)在温控单表达系统中表达时,对宿主菌的灭活效率比其在双表达系统中与基因E共表达时的灭活效率高近一个数量级。为探究导致这种差异的可能机制,将SNA克隆至一温控双表达载体进行诱导表达并对其活性进行综合分析。结果显示,胞内和胞外产物均具有核酸酶活性,分别在升温诱导30 min和90 min后被检出,对宿主菌的4 h灭活率为99.7%,宿主基因组亦被成功降解。这表明,SNA在温控双表达载体中的表达仍能如在单表达载体中一样有效灭活细菌,裂解基因E和SNA的共表达可能才是造成上述差异的主要原因。
关键词
金黄色葡萄球菌核酸酶A
菌蜕
裂解基因E
Keywords
staphylococcal nuelease A
bacterial ghosts
lysis gene E
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数
被引量：
3
2
作者
付立霞
高雯
韩先干
高波
张晓君
刘晓丹
曾令兵
机构
农业部淡水生物多样性保护
重点
实验室
江苏省
人畜
共
患病
学
重点
实验室
中国农业
科学
院上海兽医研究所
出处
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2018年第4期63-70,共8页
基金
农业部淡水生物多样性保护重点实验室开放课题(LFBC0910)
江苏省人兽共患病学重点实验室项目(R1510)
+1 种基金
上海市科技兴农重点攻关项目(2015HNG1-9)
国家自然科学基金项目(31671313)
文摘
为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数,同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率。结果显示,以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和p EI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63±0.30、5.04±0.18和4.22±0.15、5.13±0.50,显著低于以水煮法测得的pEI1和p EI2拷贝数的绝对定量11.84±0.80、11.70±0.25和相对定量13.85±1.64、11.90±0.97。回收率结果显示,试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8±4.1)%,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1±0.5)%和pEI2的回收率(31.3±1.7)%。结果表明:通过实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时,基因组的制备以水煮法为宜,爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒。
关键词
鮰爱德华氏菌(Edwardsiella
ictaluri)
隐蔽质粒
质粒拷贝数
实时定量PCR
Keywords
Edwardsiella ictaluri
cryptic plasmid；plasmid copy number；real time PCR
分类号
S941.4 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
金黄色葡萄球菌核酸酶A在温控双表达载体中的表达及其活性分析
付立霞
张磊
李欣容
韩先干
高波
张晓君
魏文志
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数
付立霞
高雯
韩先干
高波
张晓君
刘晓丹
曾令兵
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2018
3
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职称材料
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