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东亚钳蝎Na^+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达
被引量:
2
1
作者
夏扬
胡玲玲
+4 位作者
陈姣
卢悟广
颜怀江
霍介格
曹鹏
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期220-226,共7页
利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na^+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高...
利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na^+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1μmol/L浓度下能增大20%Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。
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关键词
东亚钳蝎
蝎毒素
基因克隆
表达
Na^+通道
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职称材料
题名
东亚钳蝎Na^+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达
被引量:
2
1
作者
夏扬
胡玲玲
陈姣
卢悟广
颜怀江
霍介格
曹鹏
机构
南京
中医药
大学附属省中西医结合医院
江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期220-226,共7页
基金
2015年度公益性行业科研专项经费项目(No.201507002)
国家自然科学基金资助项目(No.81622048
+2 种基金
No.81473377
No.81573837)
江苏省自然科学基金资助项目(No.BK20140049)~~
文摘
利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na^+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1μmol/L浓度下能增大20%Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。
关键词
东亚钳蝎
蝎毒素
基因克隆
表达
Na^+通道
Keywords
Buthus martensii Karsch
scorpion toxin
gene cloning
expression
Na^+ channel
分类号
R915 [医药卫生—微生物与生化药学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
东亚钳蝎Na^+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达
夏扬
胡玲玲
陈姣
卢悟广
颜怀江
霍介格
曹鹏
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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