抗微生物肽Alloferon的研究进展

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作者 洪伟鸣 左伟勇 +2 位作者 吴双 王健 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期14-15,共2页

Alloferon-1和Alloferon-2是分离自昆虫细胞的2个小肽,研究结果表明Alloferon-1和Alloferon-2具有抗病毒和抗肿瘤的活性。本文就Alloferon-1和Alloferon-2的抗病毒、抗肿瘤的作用效果及其在兽医临床上的应用进行了综述。

关键词 多肽 Alloferon 抗病毒 抗肿瘤

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鸡支康口服液的亚慢性毒性试验研究 被引量：8

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作者 洪伟鸣 左伟勇 +2 位作者 宋亮 黄文强 郁杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期140-143,共4页

试验根据《兽药试验技术规范汇编》进行了鸡支康口服液对小白鼠的亚慢性毒性研究,试验设高、中、低3个剂量组,另设空白对照组,连续给药28 d后剖杀各组小鼠,观察其临床表现,并进行血常规和血液生化指标检测及脏器系数和组织病毒学检查。... 试验根据《兽药试验技术规范汇编》进行了鸡支康口服液对小白鼠的亚慢性毒性研究,试验设高、中、低3个剂量组,另设空白对照组,连续给药28 d后剖杀各组小鼠,观察其临床表现,并进行血常规和血液生化指标检测及脏器系数和组织病毒学检查。统计学分析结果表明,各组间的体重变化和脏器系数均无显著差异(P>0.05);血常规检查结果表明,试验组的红细胞数、血小板数、红细胞压积及淋巴细胞数与空白对照组相比呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05),其余各检测指标各试验组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);血液生化指标结果表明,试验组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血糖含量与空白对照组相比呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05),其余各检测指标各试验组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);组织病理学检查结果显示,小鼠的主要内脏器官未见明显异常。试验结果表明,鸡支康口服液对小鼠血常规和血液生化指标影响甚微。提示,其按临床剂量使用无毒性反应,安全可靠。 展开更多

关键词 鸡支康口服液 小鼠 亚慢性毒性试验

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毕赤酵母表达人溶菌酶基因的初步研究 被引量：3

3

作者 王安平 朱善元 +3 位作者 王永娟 吴双 左伟勇 洪伟鸣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期574-577,共4页

为在毕赤酵母中表达人溶菌酶基因,根据已发表的人溶菌酶基因序列设计引物,扩增人溶菌酶全基因片段,将其克隆进巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-LYZ,经Sac I酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克... 为在毕赤酵母中表达人溶菌酶基因,根据已发表的人溶菌酶基因序列设计引物,扩增人溶菌酶全基因片段,将其克隆进巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-LYZ,经Sac I酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导表达。SDS-PAGE证实表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明重组hLYZ对微球菌具有良好的抑菌效果。说明人溶菌酶基因在毕赤酵母中成功表达。 展开更多

关键词 人溶菌酶 毕赤酵母 表达 抑菌活性

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基于比较蛋白质组学研究新城疫病毒的入胞机制 被引量：1

4

作者 吴双 刘秀梵 +5 位作者 王晓泉 朱善元 王安平 王永娟 洪伟鸣 左伟勇 《中国家禽》 北大核心 2012年第21期31-34,共4页

为验证新城疫病毒(NDV)入胞过程存在胞吞途径,本研究以感染了NDV的鸡胚成纤维细胞(CEF)为研究对象,采用比较蛋白质组学研究方法,双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS)分析3株NDV感染CEF后24h... 为验证新城疫病毒(NDV)入胞过程存在胞吞途径,本研究以感染了NDV的鸡胚成纤维细胞(CEF)为研究对象,采用比较蛋白质组学研究方法,双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS)分析3株NDV感染CEF后24h和48h两个时间点细胞蛋白表达动态。试验结果显示早期内体标志蛋白早期内体抗原1(EEA1)表达水平变化显著,这表明NDV可通过胞吞途径进入细胞;与其它两株病毒相比,胞吞作用在JS-5-05-Go进入细胞的过程中,可以发挥更长时间的效应。 展开更多

关键词 新城疫病毒 比较蛋白质组学 早期内体抗原1 胞吞途径

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低分子质量大豆肽对断奶仔猪肠道免疫功能的影响 被引量：11

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作者 左伟勇 洪伟鸣 +4 位作者 陈高 王永娟 刘莉 朱善元 孟婷 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期108-112,共5页

选择胎次相近的刚出生健康仔猪30头,随机均分为对照组和试验组,在断奶前常规补料,其中试验组饲喂基础日粮+2%大豆肽,试验猪21 d一次性断奶,分别在21日龄与35日龄时每组随机取6头仔猪宰杀,取空肠黏膜及内容物,分析大豆肽对仔猪肠道细菌... 选择胎次相近的刚出生健康仔猪30头,随机均分为对照组和试验组,在断奶前常规补料,其中试验组饲喂基础日粮+2%大豆肽,试验猪21 d一次性断奶,分别在21日龄与35日龄时每组随机取6头仔猪宰杀,取空肠黏膜及内容物,分析大豆肽对仔猪肠道细菌数量、肠黏膜组织中消化酶及Na+-K+-ATP酶活性、细胞因子分泌、sIgA水平及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量的影响。结果表明:日粮中添加2%大豆肽后,能显著降低21日龄仔猪空肠肠道大肠杆菌数(P<0.05),提高乳酸杆菌数(P<0.05),提高空肠黏膜脂肪酶(P<0.05)、乳糖酶(P<0.05)、胰蛋白酶(P<0.01)及Na+-K+-ATP酶活性(P<0.05),显著提高空肠黏膜IL-2与sIgA水平(P<0.05),显著降低21日龄和35日龄空肠黏膜TNF-α水平(P<0.05),大豆肽能够下调21日龄和显著下调(P<0.05)35日龄仔猪空肠黏膜TLR4 mRNA表达量。结论:大豆肽可改善仔猪肠道微生物菌群结构,调控机体肠道免疫功能,促进断奶仔猪肠道健康。 展开更多

关键词 大豆肽 断奶仔猪 TLR4基因 免疫功能

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伴大豆球蛋白水解肽体外抑菌活性试验 被引量：3

6

作者 左伟勇 孟婷 +2 位作者 郭成东 朱善元 张源淑 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第7期73-74,I0002,共3页

大豆贮藏蛋白主要由大豆球蛋白和伴大豆球蛋白组成[1-2],大豆肽是大豆蛋白质酶解的产物,具有多种生物活性作用。伴大豆球蛋白水解肽作为一种植物蛋白来源的多肽,已得到人们的广泛关注。

关键词 伴大豆球蛋白 水解肽 活性试验 体外抑菌 生物活性作用 大豆蛋白质 蛋白组成 贮藏蛋白

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肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在组织中的分布 被引量：3

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作者 吴双 左伟勇 +4 位作者 王永娟 王安平 洪伟鸣 黄文强 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期237-238,262,共3页

为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中... 为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中鸡Toll样受体2(chTLR2)基因的表达情况。结果表明:chTLR2主要分布于免疫组织系统中,chTLR2t1没有chTLR2t2表达得广泛。说明chTLR2可能参与了肠炎沙门氏菌感染的天然免疫反应过程。 展开更多

关键词 鸡 TOLL样受体2 肠炎 沙门氏菌 半定量RT—PCR

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牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定 被引量：4

8

作者 王安平 李哲峰 +6 位作者 朱善元 王永娟 吴双 黄文强 左伟勇 洪伟鸣 孙怀昌 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1316-1320,共5页

为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。... 为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。用SalⅠ酶切线性化pPIC9K-bTAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达。SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。 展开更多

关键词 牛气管抗菌肽 毕赤酵母 表达 抗菌活性

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仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病的临床试验 被引量：3

9

作者 洪伟鸣 郁杰 +2 位作者 左伟勇 葛竹头 宋亮 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期367-368,共2页

为了观察仔猪痢清口服液对仔猪大肠杆菌病的临床效果,对人工感染大肠杆菌的仔猪进行治疗性试验。用大肠杆菌O301对试验动物进行人工感染后,分为仔猪痢清低、中、高剂量治疗试验组进行观察。结果表明,仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病... 为了观察仔猪痢清口服液对仔猪大肠杆菌病的临床效果,对人工感染大肠杆菌的仔猪进行治疗性试验。用大肠杆菌O301对试验动物进行人工感染后,分为仔猪痢清低、中、高剂量治疗试验组进行观察。结果表明,仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病疗效可靠,效果明显。对人工感染引起的仔猪大肠杆菌病治愈率为90.0%,有效率达100%,并能显著降低仔猪的死亡率。 展开更多

关键词 仔猪痢清 大肠杆菌 仔猪 临床试验

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鸡γ-干扰素成熟肽基因的克隆、表达与抗血清制备 被引量：2

10

作者 王永娟 朱善元 +5 位作者 左伟勇 王安平 吴双 洪伟鸣 黄文强 韩小英 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1373-1377,共5页

为了制备安全、高效的重组鸡γ-干扰素及抗血清,以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡γ-干扰素的成熟肽基因序列,并构建原核表达质粒pET32a-γ和pGEX6p-γ;SDS-PAGE法检测2个载体特异性表达成熟肽的情况;将纯化的pET32a-γ诱导... 为了制备安全、高效的重组鸡γ-干扰素及抗血清,以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡γ-干扰素的成熟肽基因序列,并构建原核表达质粒pET32a-γ和pGEX6p-γ;SDS-PAGE法检测2个载体特异性表达成熟肽的情况;将纯化的pET32a-γ诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清,并以pGEX6p-γ诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果显示,扩增的鸡γ-干扰素成熟肽基因能成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶16 000。表明所用的表达系统可以制备安全、高效的重组干扰素,能够为定量检测机体内产生的γ-干扰素进而了解机体针对病原的免疫状态提供较为可靠的技术手段,为其他一些尚无商品化抗体的生物分子鉴定提供参考方法。 展开更多

关键词 鸡 Γ-干扰素 原核表达 抗体

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靶向传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2有效miRNA的筛选 被引量：2

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作者 王永娟 崔平福 孙怀昌 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期1270-1276,共7页

为筛选出能有效抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因复制的miRNA,采用RT-PCR方法从病毒基因组中进行结构蛋白VP2的基因扩增与序列测定,构建融合表达载体pVP2-EGFP。根据VP2测序结果,借助genscript软件设计针对VP2的5条miRNA,分别命名为... 为筛选出能有效抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因复制的miRNA,采用RT-PCR方法从病毒基因组中进行结构蛋白VP2的基因扩增与序列测定,构建融合表达载体pVP2-EGFP。根据VP2测序结果,借助genscript软件设计针对VP2的5条miRNA,分别命名为miVP2A、miVP2B、miVP2C、miVP2D和miVP2E,将合成的5条miRNAs分别插入到pRFPRNAiC中形成miVP2s表达载体,这些载体分别与pVP2-EGFP共转染DF-1细胞系,通过NortheringBlotting方法检测miVP2s的表达,利用荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效miVP2s的筛选。结果显示:miVP2s能成功表达;转染miVP2s表达载体组的绿色荧光蛋白(GFP)强度和数量都明显弱于或少于阴性对照组;miVP2s对VP2的抑制效率为59.7%到78.5%。表明所设计的miRNAs对VP2均有抑制作用,其中miVP2A和miVP2E效果最为显著。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2 MIRNA 荧光共聚焦 流式细胞术

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抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

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作者 左伟勇 洪伟鸣 +2 位作者 吴双 王安平 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第1期43-45,共3页

利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验... 利用重氮法将盐酸克伦特罗(CL)分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,以CL-KLH为免疫原免疫BALB/c小鼠,以CL-BSA为检测原,采用杂交瘤技术获得1株针对CL的单克隆抗体细胞株(5D7)。抗体的亚类为IgG1,通过竞争阻断试验证明其具有良好的特异性和敏感性,利用Protein-G Sepharose亲和层析系统纯化单克隆抗体5D7,单克隆抗体5D7对CL的IC50约为4.6 ng/mL。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 单克隆抗体 制备与鉴定 间接竞争ELISA

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伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗沙门氏菌感染的作用 被引量：1

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作者 左伟勇 孟婷 +3 位作者 郭成东 朱善元 张源淑 洪伟鸣 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第5期984-987,共4页

选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV... 选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV组)和水解肽分离有效抑菌组分组(基础日粮+水解肽分离有效抑菌组分,V组)。预饲3 d后,除I组和II组外,其他各处理组灌喂液体总含氮量为10mg/mL,每只小鼠灌喂量均为0.5 mL。连续灌胃10 d后,于第11天将108CFU/mL的沙门氏菌分别灌喂除正常对照组的其他各组(剂量均为0.5 mL/只),24 h后采用摘除眼球法收集血液后,宰杀各组小鼠,取脾脏、肠黏膜,分析血清和脾脏中TNF-α、IL-6和肠黏膜组织中sIgA的变化。结果表明在小鼠发生沙门氏菌感染时,伴大豆球蛋白水解肽以及水解肽分离有效抑菌组分能显著降低小鼠血清TNF-α水平(P<0.05)和脾脏IL-6水平(P<0.01),提高脾脏TNF-α和肠道黏膜sIgA水平(P<0.01)。说明伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。 展开更多

关键词 伴大豆球蛋白 胃蛋白酶 水解肽 沙门氏菌

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vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制

14

作者 王永娟 左伟勇 +2 位作者 王安平 吴双 朱善元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1081-1085,共5页

为探索vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）复制的抑制作用,在前期研究基础上,将2个有效的vp2基因特异miRNA表达框分别克隆入含neo基因的pTarget载体中,获得miRNA单表达或双表达载体,重组载体转染DF-1细胞后经G418筛选、鸡传... 为探索vp2基因特异miRNA对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）复制的抑制作用,在前期研究基础上,将2个有效的vp2基因特异miRNA表达框分别克隆入含neo基因的pTarget载体中,获得miRNA单表达或双表达载体,重组载体转染DF-1细胞后经G418筛选、鸡传染性法氏囊病毒Lurket株感染,通过半定量RT-PCR法、病毒滴定法分别检测vp2基因转录子的表达情况与细胞上清中的病毒TCID50.结果表明,vp2基因转录子水平明显降低,最高降低达80.7％,病毒TCID50可下降5lg2～6lg2.前期筛选到的2个vp2基因特异的miRNA在筛选过的细胞系中均能有效抑制病毒复制,为RNA干扰技术在鸡传染性法氏囊病的防治应用中奠定了基础. 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病毒 VP2基因 MIRNA RNA干扰

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禽源细胞中miRNA表达方法建立及基因沉默效率检测

15

作者 王永娟 朱善元 崔平福 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第6期59-62,共4页

从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRN... 从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRNA表达后,根据转染细胞中GFP阳性细胞数及荧光强度变化,比较鸡U6启动子在哺乳动物源和禽源细胞中介导的miRNA沉默效率。结果显示,pRFPRNAiGFP在哺乳动物和禽源细胞中都能表达抑制性miRNA,但在禽源细胞中的基因沉默效率较高。因此,pRFPRNAiC可作为禽源细胞中表达miRNA的载体,GFP则是检测沉默效率的很好的报告基因,本研究为在禽源细胞中进行RNAi研究创建了平台。 展开更多

关键词 禽U6启动子 GFP MIRNA 细胞种属特异性

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番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1

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作者 吴萌 成大荣 +3 位作者 朱善元 吴海涛 左伟勇 王安平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1383-1386,共4页

为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/... 为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。 展开更多

关键词 番鸭细小病毒 VP3基因 原核表达 多克隆抗体

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