高效液相色谱梯度洗脱法同时测定灵龙感冒胶囊中9种成分含量 被引量：4

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作者 谭东明 魏杰 尹红英 《医药导报》 CAS 北大核心 2020年第10期1399-1404,共6页

目的建立高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法同时测定灵龙感冒胶囊中龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、粉防己碱、防己诺林碱、紫花前胡苷、羌活醇和异欧前胡素的含量。方法采用ZORBAX SB-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流... 目的建立高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法同时测定灵龙感冒胶囊中龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、粉防己碱、防己诺林碱、紫花前胡苷、羌活醇和异欧前胡素的含量。方法采用ZORBAX SB-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇(1:1)-0.3%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为240,280和315 nm;体积流量1.0 mL·min^-1;柱温30℃。结果龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、粉防己碱、防己诺林碱、紫花前胡苷、羌活醇、异欧前胡素分别在36.56~731.20,2.99~59.80,4.67~93.40,1.58~31.60,9.94~198.80,4.26~85.20,10.58~211.60,2.46~49.20,20.87~417.40μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性响应,平均加样回收率分别为100.03%,98.29%,98.54%,97.73%,99.14%,98.69%,99.30%,97.27%和99.62%,RSD分别为0.79%,1.36%,1.12%,1.61%,0.96%,0.81%,1.00%,1.27%和0.99%(n=9)。结论该方法对灵龙感冒胶囊中9种成分进行同时测定,准确可靠,重复性好,可用于灵龙感冒胶囊的质量控制。 展开更多

关键词 灵龙感冒胶囊 龙胆苦苷 马钱苷酸 獐牙菜苦苷 獐牙菜苷 粉防己碱 防己诺林碱 紫花前胡苷 羌活醇 异欧前胡素 色谱法 高效液相

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基于BDNF/TrkB/CREB信号通路探讨鼠尾草酸对大鼠抑郁样行为的改善作用 被引量：7

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作者 邓祥敏 阮仁余 +3 位作者 朱星宇 叶耘峰 吴鑫 马艳春 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4009-4013,共5页

目的探讨鼠尾草酸对抑郁大鼠行为学的干预作用及对BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响。方法大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组及鼠尾草酸高、中、低剂量组,以慢性不可预知温和应激结合孤养方法复制大鼠抑郁症模型。鼠尾草酸高、中、低剂... 目的探讨鼠尾草酸对抑郁大鼠行为学的干预作用及对BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响。方法大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组及鼠尾草酸高、中、低剂量组,以慢性不可预知温和应激结合孤养方法复制大鼠抑郁症模型。鼠尾草酸高、中、低剂量组分别灌胃给予鼠尾草酸4.5、1.5、0.5 mg/kg;阳性组灌胃给予盐酸氟西汀1.8 mg/kg;空白组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,每天1次,连续21 d。采用蔗糖偏好测试、悬尾实验和旷场实验评估大鼠行为学变化,ELISA法检测血清皮质酮(CORT)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)水平,免疫组化法分析大鼠海马BDNF、CREB阳性细胞分布,RT-qPCR和Western blot法检测海马组织BDNF、CREB mRNA及BDNF、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、CREB蛋白表达。结果与模型组比较,鼠尾草酸各剂量组大鼠蔗糖偏好率和自发运动次数升高(P<0.05),悬尾不动时间缩短(P<0.05);血清5-HT、NE水平升高(P<0.05),CORT水平降低(P<0.05);海马区BDNF、CREB阳性细胞分布,BDNF、CREB mRNA表达及BDNF、TrkB、CREB蛋白表达均升高(P<0.05)。结论鼠尾草酸可剂量依赖性地改善大鼠抑郁样行为,其机制可能与调控BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。 展开更多

关键词 鼠尾草酸 抑郁症 BDNF/TrkB/CREB信号通路 神经保护

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大蒜辣素前体微丸片的制备及其体内评价 被引量：3

3

作者 陶娟 苏艳慧 +1 位作者 周圆 郑春丽 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期200-206,共7页

制备一种新型含控酸微丸的大蒜辣素前体微丸片,通过调节胃内pH提高蒜酶的稳定性,达到提高大蒜辣素转化率的目的。首先制备含控酸微丸的大蒜辣素前体微丸片,并以人工胃液为介质小杯法考察大蒜辣素转化率,通过测定大鼠血清中总胆固醇(TC)... 制备一种新型含控酸微丸的大蒜辣素前体微丸片,通过调节胃内pH提高蒜酶的稳定性,达到提高大蒜辣素转化率的目的。首先制备含控酸微丸的大蒜辣素前体微丸片,并以人工胃液为介质小杯法考察大蒜辣素转化率,通过测定大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量,研究大蒜辣素前体微丸片在大鼠体内的降血脂作用。溶出度试验表明,在人工胃液中含控酸微丸的微丸片大蒜辣素转化率超过90%。药效学研究表明,与无控酸微丸相比,含控酸微丸的微丸片对高脂血症大鼠显示出预期的降血脂作用,两个试验组之间的血脂水平变化存在显著差异(P<0.05)。实验结果表明,含有控酸微丸的大蒜辣素前体微丸片具有较好的降血脂作用。 展开更多

关键词 大蒜辣素 前药 蒜氨酸 蒜酶 控酸微丸 高脂血症

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白藜芦醇对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的改善作用 被引量：3

4

作者 殷紫 张二飞 +1 位作者 韩永红 徐秉忠 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期298-303,共6页

目的探讨白藜芦醇对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的改善作用。方法 50只小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(10 mg/kg)及白藜芦醇低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组10只,10只C57BL/6小鼠作为对照组,各组灌胃给药40 d。Morris... 目的探讨白藜芦醇对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的改善作用。方法 50只小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(10 mg/kg)及白藜芦醇低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组10只,10只C57BL/6小鼠作为对照组,各组灌胃给药40 d。Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验分别检测小鼠学习记忆能力,免疫荧光法检测小鼠海马区星形胶质细胞表达,RT-PCR法和ELISA法分别检测小鼠海马区IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和水平。结果与模型组比较,白藜芦醇组缩短逃避潜伏期,增加穿越平台次数和目标象限停留时间,降低星形胶质细胞表达及IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和水平,以中、高剂量组更显著(P<0. 05,P<0. 01)。结论白藜芦醇可改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制星形胶质细胞增生和炎性因子释放、减轻炎症反应有关。 展开更多

关键词 白藜芦醇 学习能力 记忆能力 APP/PS1双转基因小鼠

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绿原酸与生物碱配伍后成分存在状态与超滤膜传质行为的相关性研究 被引量：2

5

作者 吴鑫 李存玉 +2 位作者 邓祥敏 牛敏 华政颖 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1960-1963,共4页

目的研究绿原酸与生物碱配伍后成分存在状态与超滤膜传质行为的相关性。方法将绿原酸与系列pKa值生物碱进行配伍,膜分离数据与扫描电镜、电化学交流阻抗谱相结合来分析该成分在膜上的透过机制,紫外可见分光光度法研究两者pKa差值与分子... 目的研究绿原酸与生物碱配伍后成分存在状态与超滤膜传质行为的相关性。方法将绿原酸与系列pKa值生物碱进行配伍,膜分离数据与扫描电镜、电化学交流阻抗谱相结合来分析该成分在膜上的透过机制,紫外可见分光光度法研究两者pKa差值与分子间结合强度的关系。结果绿原酸与碱性较强的生物碱配伍后,其超滤分离下降15%,膜上出现团块堆积,电化学交流阻抗谱图谱圆弧半径较大,特征谱带λmax发生不同程度的蓝移。结论绿原酸与生物碱配伍的混合物成分存在状态与组分间pKa差值有关,两者解离常数差值越大,越倾向于形成复合盐,膜截留特征越明显。 展开更多

关键词 绿原酸 生物碱 成分存在状态 超滤膜传质行为 扫描电镜 电化学交流阻抗谱

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泡桐花总黄酮的提取工艺优化及抗氧化活性 被引量：17

6

作者 吕亭亭 杨志华 +4 位作者 陶娟 韩永红 蔡亮亮 叶翩翩 刘旭 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第1期197-202,共6页

该研究采用超声波辅助纤维素酶法提取泡桐花总黄酮。在单因素试验的基础上,选择酶解温度、超声功率、液料比和酶解时间进行Box-Benhnken试验设计,响应面法优化泡桐花总黄酮提取工艺,并测定其抗氧化能力。结果表明,泡桐花总黄酮最佳提取... 该研究采用超声波辅助纤维素酶法提取泡桐花总黄酮。在单因素试验的基础上,选择酶解温度、超声功率、液料比和酶解时间进行Box-Benhnken试验设计,响应面法优化泡桐花总黄酮提取工艺,并测定其抗氧化能力。结果表明,泡桐花总黄酮最佳提取工艺条件为酶解温度50℃,超声功率240 W,液料比40∶1(mL∶g),酶解时间36 min。在该优化提取条件下,总黄酮的提取得率为7.82%,与模型预测值8.01%接近。抗氧化试验结果表明,泡桐花总黄酮对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基的半抑制浓度(IC50)值分别为214.2μg/mL、200.7μg/mL和328.5μg/mL,在总黄酮质量浓度为800μg/mL时,总黄酮对三者的清除率分别为83.1%、75.4%和64.3%。 展开更多

关键词 泡桐花 总黄酮 超声辅助酶法 响应面法 抗氧化活性

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泡桐花总黄酮含量测定方法研究 被引量：17

7

作者 吕亭亭 杨志华 +3 位作者 谢奇 叶翩翩 陶娟 刘旭 《化学与生物工程》 CAS 2020年第10期64-68,共5页

以芦丁为对照品,通过比较亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系和三氯化铝显色体系对总黄酮的吸收特性,筛选泡桐花总黄酮含量测定的合适方法,并对该方法进行方法学验证;在单因素实验的基础上,采用正交实验对该方法的显色时间进行优化。结... 以芦丁为对照品,通过比较亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系和三氯化铝显色体系对总黄酮的吸收特性,筛选泡桐花总黄酮含量测定的合适方法,并对该方法进行方法学验证;在单因素实验的基础上,采用正交实验对该方法的显色时间进行优化。结果表明,亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系更适合泡桐花总黄酮含量的测定,加标回收率在99.2%~105.5%之间,RSD为2.18%,重复性、精密度、稳定性和准确度均较好;优化后的NaNO2、Al(NO3)3、NaOH显色时间分别为6 min、6 min、10 min,在此条件下测定的泡桐花总黄酮平均含量为3.78%,RSD为2.05%。优化的亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法简便、快速、准确,可作为泡桐花总黄酮含量的测定方法。 展开更多

关键词 泡桐花 总黄酮 含量测定 方法学验证 正交实验 显色时间

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响应面法优化苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量 被引量：15

8

作者 吕亭亭 杨志华 +3 位作者 韩永红 孟鑫 陶娟 刘旭 《化学与生物工程》 CAS 2020年第7期62-68,共7页

对苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量进行方法学验证,采用单因素实验考察苯酚用量、硫酸用量、水浴温度、显色时间等对泡桐花多糖含量测定的影响,采用响应面法对苯酚-硫酸法的测定条件进行优化,并在最佳条件下对泡桐花多糖含量进行测定。... 对苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量进行方法学验证,采用单因素实验考察苯酚用量、硫酸用量、水浴温度、显色时间等对泡桐花多糖含量测定的影响,采用响应面法对苯酚-硫酸法的测定条件进行优化,并在最佳条件下对泡桐花多糖含量进行测定。结果表明,葡萄糖浓度在0.01~0.08 mg·mL^-1范围内与吸光度线性关系良好(R=0.9993),泡桐花多糖加标回收率在98.94%~101.93%之间,RSD在1.0%~1.4%之间。苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量的最佳条件为:苯酚用量0.4 mL、硫酸用量5.0 mL、显色时间25 min,在此条件下,泡桐花多糖平均含量为2.65%,RSD为2.95%。该方法稳定可靠、精密度好、准确度高,可用于泡桐花多糖的含量测定。 展开更多

关键词 响应面法 苯酚-硫酸法 泡桐花 多糖 含量测定 方法学验证

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银杏内酯B对帕金森病模型大鼠的保护作用 被引量：8

9

作者 丁旭 殷紫 +2 位作者 邓祥敏 张艳军 宋晓莉 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第4期442-446,453,共6页

目的探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠的保护作用。方法采用脑内定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,随机分为Sham组、模型组、美多芭组(20 mg/kg)和GB低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg),另... 目的探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠的保护作用。方法采用脑内定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,随机分为Sham组、模型组、美多芭组(20 mg/kg)和GB低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg),另将大鼠随机分为Sham组、Model组、GB 60 mg/kg组、LY294002组和(GB 60 mg/kg+LY294002)组,旋转实验检测大鼠行为学,试剂盒检测MDA、SOD、GSH水平,ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot检测大鼠黑质和纹状体组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达情况。结果治疗后,美多芭组和GB中、高剂量组大鼠旋转圈数明显少于模型组(P<0.05),MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组(P<0.05),SOD、GSH水平、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显高于模型组(P<0.05);与LY294002组比较,(GB 60 mg/kg+LY294002)组大鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显上调(P<0.05),MDA和IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05),SOD、GSH水平明显升高(P<0.05)。结论高剂量GB可改善PD大鼠行为学,增强抗氧化应激能力,减轻炎性损伤,起到一定保护作用,其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 银杏内酯B 帕金森病 神经功能 PI3K/AKT信号通路

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白藜芦醇对脂多糖诱导的BV2细胞炎症与凋亡反应的保护机制 被引量：4

10

作者 陈二华 朱慧芳 +3 位作者 谭东明 张建华 丁旭 殷紫 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3663-3667,共5页

目的研究白藜芦醇对脂多糖诱导的BV2细胞炎症与凋亡反应的保护机制。方法脂多糖刺激BV2细胞建立炎症模型,随机分为对照组、脂多糖组、脂多糖+白藜芦醇组、白藜芦醇组。采用Western blot、RT-qPCR、荧光染色与细胞流式分析,检测白藜芦醇... 目的研究白藜芦醇对脂多糖诱导的BV2细胞炎症与凋亡反应的保护机制。方法脂多糖刺激BV2细胞建立炎症模型,随机分为对照组、脂多糖组、脂多糖+白藜芦醇组、白藜芦醇组。采用Western blot、RT-qPCR、荧光染色与细胞流式分析,检测白藜芦醇对BV2细胞的保护作用及分子机制。结果白藜芦醇可抑制脂多糖引起的细胞凋亡及IL-6、IL-1、TNF-αmRNA表达升高,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,降低SQSTM1蛋白表达,减少脂多糖引起的溶酶体细胞器损伤,提高BV2细胞中溶酶体的荧光强度。结论白藜芦醇对脂多糖引起BV2细胞的炎症与凋亡反应有保护作用,其分子机制可能是通过调控TLR4-FOXO3信号通路影响细胞的自噬水平,从而减轻炎症因子的释放与细胞的凋亡反应。 展开更多

关键词 白藜芦醇 BV2细胞 脂多糖 炎症 凋亡 自噬

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鼠尾草酸对慢性不可预见性轻度应激诱导的抑郁大鼠的抗抑郁作用及其SIRT1/ERS调控机制 被引量：4

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作者 谭东明 尹红英 +1 位作者 邓祥敏 丁旭 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期360-368,共9页

目的:探讨鼠尾草酸(CA)对慢性不可预见性轻度应激(CUMS)诱导的抑郁大鼠内质网应激(ERS)的影响,并阐明其抗抑郁机制。方法:采用随机数字表法从66只SD大鼠中随机选取12只为对照组,剩余54只大鼠采用CUMS联合孤养诱导建立抑郁模型,取48只建... 目的:探讨鼠尾草酸(CA)对慢性不可预见性轻度应激(CUMS)诱导的抑郁大鼠内质网应激(ERS)的影响,并阐明其抗抑郁机制。方法:采用随机数字表法从66只SD大鼠中随机选取12只为对照组,剩余54只大鼠采用CUMS联合孤养诱导建立抑郁模型,取48只建模成功的大鼠随机分为模型组、氟西汀(3.17 mg·kg^(-1))组、CA (40 mg·kg^(-1))组和CA (40 mg·kg^(-1))+EX527沉默信息调节因子1 (SIRT1)抑制剂(5 mg·kg^(-1))组,每组12只。给予相应的药物干预后,旷场实验(OFT)检测大鼠运动总距离和中间停留时间;强迫游泳实验(FST)检测大鼠强迫游泳时的不动时间;糖水偏好实验(SPT)检测大鼠糖水偏好度;TUNEL法检测各组大鼠海马组织中TUNEL阳性细胞百分率;免疫荧光法检测各组大鼠海马组织中C/EBP同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)阳性表达强度;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组大鼠海马组织中SIRT1、GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA表达水平;Western blotting法检测各组大鼠大脑海马组织CA1区中SIRT1、 GRP78、 CHOP、 Caspase-12和裂解的Caspase-12 (cleavedCaspase-12)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠OFT中的总距离、中间停留时间、糖水偏好百分率及海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,氟西汀组和CA组大鼠OFT中的运动总距离、中间停留时间、糖水偏好度及海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与CA组比较,CA+EX527组大鼠OFT中的总距离,中间停留时间,糖水偏好度,大脑海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:CA可减轻CUMS引起的大鼠抑郁样行为,其抗抑郁机制可能与SIRT1介导的ERS抑制有关。 展开更多

关键词 鼠尾草酸 抑郁症 内质网应激 沉默信息调节因子1

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黄秋葵多糖缓冻协同微波提取工艺优化及其降血糖作用 被引量：4

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作者 张艳军 李靖 +1 位作者 张玉领 韩永红 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期161-167,共7页

本文采用缓冻协同微波辅助提取手段,通过单因素实验,确定合适的因素,采用响应面优化方法对黄秋葵多糖提取工艺条件进行优化;采用对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)法测定黄秋葵多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响,通过小鼠实验,测定黄秋... 本文采用缓冻协同微波辅助提取手段,通过单因素实验,确定合适的因素,采用响应面优化方法对黄秋葵多糖提取工艺条件进行优化;采用对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)法测定黄秋葵多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响,通过小鼠实验,测定黄秋葵多糖对肾上腺素引起高血糖小鼠血糖水平的影响,从而探索黄秋葵多糖的降血糖作用。结果表明:通过响应面优化提取条件,确定黄秋葵多糖的最佳提取工艺条件是缓冻时间16 h,液料比40∶1(mL/g),浸提时间2.2 h;浸提温度65℃,微波功率310 W,在此条件下,黄秋葵多糖的得率可达到17.17%,明显高于相对单一的提取工艺。黄秋葵多糖能够明显抑制α-葡萄糖苷酶的活性,在10 mg·mL^-1剂量下抑制率达68.26%;且极显著降低肾上腺素引起高血糖小鼠的血糖水平(P<0.01)。缓冻协同微波处理能够显著提高黄秋葵多糖的得率,黄秋葵多糖具有良好的降血糖作用,具备开发成为预防和治疗糖尿病的市场应用与开发前景。 展开更多

关键词 黄秋葵多糖 响应面分析 Α-葡萄糖苷酶 肾上腺素 降血糖

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lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量：1

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作者 谢奇 樊鑫梅 +3 位作者 韩永红 陶娟 刘旭 刘家秀 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第4期492-501,共10页

目的:探讨长链非编码RNA⁃核富集转录本1(long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched abundant transcript 1,lnc⁃NEAT1)对黑色素瘤(melanoma,MM)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法:体外培养MM细胞系(A375、A875、M14、B16)和人表皮黑色... 目的:探讨长链非编码RNA⁃核富集转录本1(long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched abundant transcript 1,lnc⁃NEAT1)对黑色素瘤(melanoma,MM)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法:体外培养MM细胞系(A375、A875、M14、B16)和人表皮黑色素细胞(HEMa⁃LP),采用实时荧光定量PCR(real⁃time quantitative PCR,RT⁃qPCR)检测细胞中lnc⁃NEAT1、microRNA⁃29c⁃3p(miR⁃29c⁃3p)、硫酸软骨素蛋白多糖4(chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)mRNA表达。取对数生长期B16细胞,分为对照组(control组)、si⁃NC组、si⁃NEAT1组、si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组、si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组,用Lipofectamine 3000将相应质粒转染到细胞中。RT⁃qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞CSPG4及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测miR⁃29c⁃3p与lnc⁃NEAT1、CSPG4的靶向关系。裸鼠移植瘤实验探究lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞体内生长的影响。结果:MM细胞系中lnc⁃NEAT1和CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa⁃LP细胞,miR⁃29c⁃3p水平显著低于HEMa⁃LP细胞(P均<0.05)。敲低lnc⁃NEAT1可显著升高miR⁃29c⁃3p表达,降低CSPG4 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并降低Ki⁃67、N⁃cadherin与Vimentin蛋白水平,升高E⁃cadherin蛋白水平(P均<0.05);下调miR⁃29c⁃3p表达可显著升高CSPG4 mRNA和蛋白水平,减弱lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR⁃29c⁃3p mimic后,细胞中NEAT1⁃WT和CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,敲低lnc⁃NEAT1可显著抑制体内移植瘤生长,而抑制miR⁃29c⁃3p可显著减弱lnc⁃NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用(P均<0.05)。结论:lnc⁃NEAT1可能通过调节miR⁃29c⁃3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 黑色素瘤 长链非编码RNA核富集转录本1 microRNA⁃29c⁃3p 硫酸软骨素蛋白多糖4 增殖 迁移 侵袭

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