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人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备
1
作者
蒋茜
施良
+1 位作者
牟笑
毛朝明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1300-1302,共3页
目的:表达人UL16结合蛋白1(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1。测序鉴定正确后转化入大肠...
目的:表达人UL16结合蛋白1(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,对表达产物进行鉴定。用镍柱对人ULBP1重组蛋白进行纯化,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法对制备的多克隆抗体进行生物学鉴定。结果:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP1(aa81～244),并获得了高纯度的人pQE30-ULBP1(aa81～244)重组蛋白。制备的多克隆抗体能够识别肺癌细胞株A549表面表达的天然构象ULBP1分子。结论:成功表达了人ULBP1(aa81～244)重组蛋白并成功制备了兔抗人ULBP1的多克隆抗体。
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关键词
UL16结合蛋白1
重组蛋白
多克隆抗体
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题名
人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备
1
作者
蒋茜
施良
牟笑
毛朝明
机构
江苏大学附属医院免疫学重点实验室
江苏
大学
附属
医院
核医
学
科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1300-1302,共3页
基金
镇江市社会发展支撑计划项目(SH2011019)
江苏大学临床医学发展项目(JLY2010157)
文摘
目的:表达人UL16结合蛋白1(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,对表达产物进行鉴定。用镍柱对人ULBP1重组蛋白进行纯化,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法对制备的多克隆抗体进行生物学鉴定。结果:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP1(aa81～244),并获得了高纯度的人pQE30-ULBP1(aa81～244)重组蛋白。制备的多克隆抗体能够识别肺癌细胞株A549表面表达的天然构象ULBP1分子。结论:成功表达了人ULBP1(aa81～244)重组蛋白并成功制备了兔抗人ULBP1的多克隆抗体。
关键词
UL16结合蛋白1
重组蛋白
多克隆抗体
分类号
R593.2 [医药卫生—内科学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备
蒋茜
施良
牟笑
毛朝明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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