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RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响 被引量:2
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作者 倪国华 范钰 +5 位作者 陈坚 钱立平 林庚金 陈功星 丁佳逸 郑树 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期14-18,共5页
目的探讨polo-like kinase-1(PLK1)基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子(small interfering RNA,si RNA),转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Wester... 目的探讨polo-like kinase-1(PLK1)基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子(small interfering RNA,si RNA),转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。结果所设计的5个si RNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4si RNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。结论PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用;以PLK1 si RNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 polo—like kinase-1 RNA干扰 小干扰RNA 端粒酶
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靶向survivin基因RNAi沉默表达对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响 被引量:2
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作者 史德刚 范钰 +1 位作者 朱夫 张积仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1156-1158,1162,共4页
目的探讨存活素(survivin)基因对胶质瘤细胞侵袭的影响和可能机制。方法应用survivin基因小干扰RNA(siRNA)转染处理胶质瘤SNB19细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测survivin基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培... 目的探讨存活素(survivin)基因对胶质瘤细胞侵袭的影响和可能机制。方法应用survivin基因小干扰RNA(siRNA)转染处理胶质瘤SNB19细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测survivin基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞集落生长数和侵袭力。采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)蛋白水平。结果survivin siRNA转染组细胞的survivin基因mRNA和蛋白水平明显下调,转染组胶质瘤细胞集落生长数和癌细胞穿膜细胞数明显下调,且与浓度相关。转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降。结论Survivin基因在胶质瘤细胞侵袭中起着重要作用,采用靶向survivin siRNA转染可抑制其侵袭能力,其机制可能与下调uPA基因表达有关。 展开更多
关键词 胶质瘤 存活素 侵袭 尿激酶纤溶酶原激活物
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促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控 被引量:1
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作者 范钰 钟锡明 +1 位作者 陈坚 林庚金 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期323-327,共5页
目的探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量R... 目的探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况。结果转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带。结论PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 促肝细胞再生磷酸酶-3 侵袭 失巢凋亡
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RNA干扰Bcl-xL基因表达对大肠癌细胞侵袭的影响 被引量:1
4
作者 庞利群 范钰 +3 位作者 蒋鹏程 俞力 陈坚 林庚金 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期74-78,共5页
目的探讨Bcl-xL基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用Bcl-xL基因小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染处理人大肠癌HT29细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平,分别采用软... 目的探讨Bcl-xL基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用Bcl-xL基因小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染处理人大肠癌HT29细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。另外,采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)蛋白变化。结果转染组癌细胞Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性。转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降,且与浓度相关。结论Bcl-xL基因在大肠癌细胞侵袭中起着重要的作用;以si RNA下调Bcl-xL基因表达,可明显抑制大肠癌细胞恶性侵袭,其机制可能与下调uPA表达有关。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 Bcl—xL 侵袭 尿激酶纤溶酶原激活物
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靶向cripto siRNA转染对裸鼠实验性大肠癌细胞肝转移的影响
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作者 钟锡明 范钰 +2 位作者 周永静 陈坚 林庚金 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期202-206,共5页
目的研究cripto基因对人大肠癌细胞迁移、侵袭和肝转移的影响。方法以cripto基因mRNA小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测cripto基因mRNA和蛋白水平,以划痕... 目的研究cripto基因对人大肠癌细胞迁移、侵袭和肝转移的影响。方法以cripto基因mRNA小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测cripto基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立裸鼠大肠癌肝转移模型,以cripto siRNA转染48h后的癌细胞接种裸鼠,观察对大肠癌细胞体内肝转移的影响。结果siRNA转染组cripto基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性(P<0.001;P<0.001)。体外实验发现,cripto siRNA转染组癌细胞迁移距离和穿膜细胞数目明显低于对照组,且呈浓度依赖性(P<0.05)。体内实验发现,cripto基因siRNA转染组SW480细胞转移率和肿瘤结节数均明显低于对照组(P<0.05;P<0.05)。结论cripto基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以siRNA下调cripto基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 肝转移 畸胎瘤衍生生长因子-1 小干扰RNA
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