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慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定
被引量：
1
1
作者
戴胜兰
卓萌
+1 位作者
汤正好
臧国庆
《科学技术与工程》
北大核心
2017年第6期147-151,共5页
研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)...
研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。
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关键词
慢病毒
乙型肝炎核心抗原
P815细胞株
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题名
慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定
被引量：
1
1
作者
戴胜兰
卓萌
汤正好
臧国庆
机构
江苏大学附属人民医院消化内科
上海交通
大学
附属
第六
人民医院
感染病科
出处
《科学技术与工程》
北大核心
2017年第6期147-151,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(81270502)资助
文摘
研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。
关键词
慢病毒
乙型肝炎核心抗原
P815细胞株
Keywords
lentivirus hepatitis B core antigen P815 cell line
分类号
R512.62 [医药卫生—内科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定
戴胜兰
卓萌
汤正好
臧国庆
《科学技术与工程》
北大核心
2017
1
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