目的:建立一种新的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因分型方法。方法:利用16对KIR序列特异性引物和两对内参照引物及荧光染料SYBR Green I进行实时聚合酶链反应(real-time PCR),分析各扩增产物的熔解曲线,确定各个KIR基因熔解温度和特...目的:建立一种新的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因分型方法。方法:利用16对KIR序列特异性引物和两对内参照引物及荧光染料SYBR Green I进行实时聚合酶链反应(real-time PCR),分析各扩增产物的熔解曲线,确定各个KIR基因熔解温度和特征,并以此为依据判断16种KIR基因的出现或缺失。对样本DNA进行不同倍数稀释检测该方法的敏感性。结果:分析熔解曲线能有效地进行KIR基因分型。该方法甚至可以对0.1 ng DNA的样本成功进行KIR分型。利用该方法成功地对10例外周血基因组DNA和10例宫颈细胞基因组DNA进行了KIR分型。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR应用于KIR基因分型,具有简单、快速、敏感、实时和环保的特点,为实现KIR分型的自动化提供可能性。展开更多
目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的...目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGB1 B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性)。结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2。2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1 D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085。结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础。展开更多
目的:通过检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中let-7a-3基因的表达水平,探讨其与临床变量的相关性。方法:应用RQ-PCR方法检测83例初诊AML患者BMMNC中let-7a-3基因表达水平,分析其与患者年龄、性别、血象、诊断分型和7...目的:通过检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中let-7a-3基因的表达水平,探讨其与临床变量的相关性。方法:应用RQ-PCR方法检测83例初诊AML患者BMMNC中let-7a-3基因表达水平,分析其与患者年龄、性别、血象、诊断分型和7个基因(FLT3-ITD,NPM1,C-KIT,IDH1/IDH2,DNMT3A,C/EBPA and N/K-RAS)突变的关系。结果:20例(24%)AML患者存在着let-7a-3转录本的过表达;let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组在年龄、性别、血象、FAB亚型和突变基因之间均无显著性差异(P>0.05);let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组的总体生存(OS)时间并无显著差异(P>0.05),但在治疗后获得完全缓解的患者中let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组的总体生存时间差异有显著性(P=0.003)。结论:let-7a-3基因过表达是AML中的一个常见分子事件。展开更多
文摘目的:建立一种新的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因分型方法。方法:利用16对KIR序列特异性引物和两对内参照引物及荧光染料SYBR Green I进行实时聚合酶链反应(real-time PCR),分析各扩增产物的熔解曲线,确定各个KIR基因熔解温度和特征,并以此为依据判断16种KIR基因的出现或缺失。对样本DNA进行不同倍数稀释检测该方法的敏感性。结果:分析熔解曲线能有效地进行KIR基因分型。该方法甚至可以对0.1 ng DNA的样本成功进行KIR分型。利用该方法成功地对10例外周血基因组DNA和10例宫颈细胞基因组DNA进行了KIR分型。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR应用于KIR基因分型,具有简单、快速、敏感、实时和环保的特点,为实现KIR分型的自动化提供可能性。
文摘目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGB1 B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性)。结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2。2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1 D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085。结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
文摘目的:通过检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中let-7a-3基因的表达水平,探讨其与临床变量的相关性。方法:应用RQ-PCR方法检测83例初诊AML患者BMMNC中let-7a-3基因表达水平,分析其与患者年龄、性别、血象、诊断分型和7个基因(FLT3-ITD,NPM1,C-KIT,IDH1/IDH2,DNMT3A,C/EBPA and N/K-RAS)突变的关系。结果:20例(24%)AML患者存在着let-7a-3转录本的过表达;let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组在年龄、性别、血象、FAB亚型和突变基因之间均无显著性差异(P>0.05);let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组的总体生存(OS)时间并无显著差异(P>0.05),但在治疗后获得完全缓解的患者中let-7a-3基因过表达阳性组与阴性组的总体生存时间差异有显著性(P=0.003)。结论:let-7a-3基因过表达是AML中的一个常见分子事件。
