circRAF1调节人卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡 被引量：2

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作者 李文昕 卢敏君 +2 位作者 林莉 刘月琴 朱小兰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期910-917,923,共9页

目的探讨circRAF1在早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)中的表达及对人卵巢颗粒细胞(GCs)系(KGN细胞)增殖、凋亡的影响。方法RT-qPCR检测正常卵巢储备功能的患者(n=50)和POI患者(n=50)卵巢GCs及血清中circRAF1的表... 目的探讨circRAF1在早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)中的表达及对人卵巢颗粒细胞(GCs)系(KGN细胞)增殖、凋亡的影响。方法RT-qPCR检测正常卵巢储备功能的患者(n=50)和POI患者(n=50)卵巢GCs及血清中circRAF1的表达,并分析其与卵巢储备功能指标的相关性;构建针对circRAF1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染至KGN细胞;利用CCK-8、EdU实验检测细胞增殖,JC-1、Tunel实验检测细胞凋亡;RT-qPCR和WB检测细胞增殖与凋亡相关基因(FSHR、PCNA、Bcl-2、Casp-9、Bax)的表达。结果circRAF1在POI患者GCs及血清中表达下降,circRAF1的表达与血清中基础E2和AMH水平呈正相关(P<0.001),而与血清中基础FSH、LH水平呈负相关(P<0.001),同时,circRAF1的表达与AFC呈正相关(P<0.001)。干扰circRAF1的表达可抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。结论POI患者GCs及血清中的circRAF1表达下调,且与卵巢储备功能下降有关;干扰circRAF1可以抑制GCs增殖,促进其凋亡。 展开更多

关键词 circRAF1 早发性卵巢功能不全 颗粒细胞 卵巢储备 细胞增殖与凋亡

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Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

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作者 卢敏君 李文昕 +2 位作者 林莉 刘月琴 朱小兰 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期479-485,共7页

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四... 目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。 展开更多

关键词 早发性卵巢功能不全 Y-box结合蛋白1 沉默信息调节因子1 颗粒细胞 细胞增殖和凋亡

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血清CA125联合ALDH1检测在子宫内膜异位症诊断和术后随访中的应用 被引量：16

3

作者 刘颂平 殷新明 温坚 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期578-581,共4页

目的 探讨血清糖类抗原125（CA125）、乙醛脱氢酶1（ALDH1）联合检测在子宫内膜异位症（EMs）的诊断及术后随访中的应用价值。方法 研究组选取2011年1月～2013年6月于我院妇科经手术及病理切片证实为EMs的患者105例,对照组选取同期于我... 目的 探讨血清糖类抗原125（CA125）、乙醛脱氢酶1（ALDH1）联合检测在子宫内膜异位症（EMs）的诊断及术后随访中的应用价值。方法 研究组选取2011年1月～2013年6月于我院妇科经手术及病理切片证实为EMs的患者105例,对照组选取同期于我院健康体检的育龄期女性100例,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组患者血清CA125、ALDH1水平。结果 研究组术前血清CA125、ALDH1均高于对照组（P〈0.05）,Ⅰ、Ⅱ期EMs患者血清ALDH1水平高于对照组（P〈0.05）,但血清CA125水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。以血清CA125≥35U/mL、ALDH1≥2.0pg/mL为阳性临界值,两者联合诊断的特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值分别为87.1%、91.6%、84.6%和89.3%。研究组随访发现术后1个月血清CA125、ALDH1较术前明显下降（P〈0.05）,但仍高于对照组（P〈0.05）,术后6个月血清CA125、ALDH1下降至正常水平,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后1年1例复发,术后2年6例复发,复发患者血清ALDH1水平均高于对照组,但血清CA125水平仅2例高于对照组。结论血清CA125、ALDH1联合检测较CA125单独检测能显著提高EMs诊断的敏感性,且血清ALDH1水平在轻度EMs及复发患者中均升高,有望成为早期诊断及监测复发更好的指标。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 血清糖类抗原125(CA125) 乙醛脱氢酶1(ALDH1)

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操作性肌电生物反馈疗法改善脑卒中患者运动功能的临床研究 被引量：17

4

作者 陆建霞 沈光宇 +2 位作者 高璀乡 张绍岚 吴静 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1154-1156,共3页

脑卒中导致的功能障碍以运动功能障碍为主,严重影响患者日常生活活动能力,给家庭和社会造成沉重负担。操作性肌电生物反馈疗法是一种较新的康复治疗技术,近年来逐渐应用于脑卒中后运动功能的康复。

关键词 肌电生物反馈疗法 运动功能障碍 脑卒中患者 操作性 临床研究 日常生活活动能力 康复治疗技术 生物反馈仪

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Beclin-1在稽留流产中的表达模式及临床意义 被引量：13

5

作者 谢冰 陈霞 +5 位作者 于骏 颜一丹 栾晓瑾 刘佳佳 乔晨 方杰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第1期78-81,共4页

目的自噬在稽留流产中的相关研究鲜有报道。文中通过检测自噬相关因子Beclin-1及LC3在正常妊娠者和稽留流产者的绒毛及蜕膜中的表达情况,探讨稽留流产与细胞自噬之间的关系,为稽留流产的早期防治提供理论依据。方法选取2017年1月至3月... 目的自噬在稽留流产中的相关研究鲜有报道。文中通过检测自噬相关因子Beclin-1及LC3在正常妊娠者和稽留流产者的绒毛及蜕膜中的表达情况,探讨稽留流产与细胞自噬之间的关系,为稽留流产的早期防治提供理论依据。方法选取2017年1月至3月在江苏大学第四附属医院妇科收治的30例稽留流产患者作为稽留组,同期收治的30例正常妊娠患者作为对照组。利用荧光定量PCR方法检测2组绒毛及蜕膜组织中Beclin-1 mRNA的表达水平,利用Western Blot检测两组绒毛及蜕膜组织中Beclin-1、LC3II/LC3I蛋白的表达水平,利用免疫组化观察Beclin-1在2组绒毛及蜕膜组织中的定位情况。结果与对照组相比,Beclin-1 mRNA在稽留流产绒毛(1.00±0.28 vs 2.17±0.87)及蜕膜组织(1.75±0.41 vs 4.74±0.93)中显著性上调,差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白在稽留流产绒毛及蜕膜组织中均呈上调趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示Beclin-1蛋白在稽留流产绒毛及蜕膜组织中的表达水平均呈现上调趋势。结论Beclin-1 mRNA及蛋白、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在稽留流产的绒毛及蜕膜组织中均上调,提示细胞自噬参与了稽留流产的发生,为研究稽留流产的发病机制提供新的理论依据。 展开更多

关键词 BECLIN-1 LC3 稽留流产 自噬 细胞死亡

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经皮冠状动脉介入治疗近期疗效与风险研究 被引量：5

6

作者 赵文强 王俊 +2 位作者 谢红珍 吴艳君 潘啸东 《实用医学杂志》 CAS 2008年第10期1747-1748,共2页

目的:研究冠心病经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)+支架术近期临床疗效及安全性。方法:对98例经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者分术前、术后即刻、1年组对比研究临床疗效和冠脉造影资料差异,对PCI全组与溶栓组、不同PCI类型的再通率、血流达... 目的:研究冠心病经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)+支架术近期临床疗效及安全性。方法:对98例经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者分术前、术后即刻、1年组对比研究临床疗效和冠脉造影资料差异,对PCI全组与溶栓组、不同PCI类型的再通率、血流达标率、并发症、疗效积分、事件积分和安全/风险比进行对比分析。结果:PCI术前、术后即刻心绞痛分级、心功能分级、心血管事件及6min步行、直径狭窄百分比(PDS)、最小管腔直径(MLD)、TIMI血流Ⅲ级率有极显著的改善(均P<0.01),PCI1年组比术后即刻组PDS显著增高、MLD显著缩小,但临床及血流指标无显著变化;易化PCI比直接PCI和择期PCI并发症及安全/风险比有显著改善;择期PCI比前两PCI组安全/风险比显著降低;药物支架组比裸支架组再狭窄率、晚期腔径丢失显著降低。结论:冠心病患者PCI再灌注治疗可获较高的近期疗效和安全性,但有隐匿性靶管腔丢失;不同PCI方案和支架类型可对支架再狭窄和安全性产生不同的影响。 展开更多

关键词 冠状动脉疾病 血管成形术 经腔 经皮冠状动脉 支架植入术

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OX40L/OX40基因组变异与早发冠心病风险之间的关系 被引量：2

7

作者 赵文强 王俊 +4 位作者 孙光明 欧阳星文 谢红珍 陈辉 吴艳君 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2010年第6期432-436,共5页

目的:研究OX40L/OX40基因组变异与早发冠心病风险之间的关系。方法:用序列特异性引物—聚合酶链反应技术对243例年龄<55岁早发急性冠状动脉(冠脉)综合征(PACS)的患者为PACS组、209例早发稳定性心绞痛(PSAP)为PSAP组和138例对照组检测... 目的:研究OX40L/OX40基因组变异与早发冠心病风险之间的关系。方法:用序列特异性引物—聚合酶链反应技术对243例年龄<55岁早发急性冠状动脉(冠脉)综合征(PACS)的患者为PACS组、209例早发稳定性心绞痛(PSAP)为PSAP组和138例对照组检测OX40L基因rs3850641 A/G变异位点和OX40基因rs2298212 G/A位点变异的基因型、等位基因及其单倍型;用冠脉造影测量病变血管支数和狭窄程度积分;用酶链免疫吸附法(ELISA)测试血浆可溶性OX40L(sOX40L)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1);用散射比浊法测试血浆C反应蛋白(CRP)水平;分析OX40L/OX40基因变异与冠心病风险、冠脉病变程度和血浆3个细胞因子之间的关系。结果:OX40L GG基因型和G等位基因发生PACS风险比AA基因型和A等位基因显著增高(OR=1.99,1.83;P=0.021,P=0.0001);而OX40 A等位基因比G等位基因发生PACS风险显著降低(OR=0.49,P=0.002);单倍型GGGG比AAGG(野生型)的PACS风险显著增加(OR=2.11,P=0.033);在4种高危因素(高血压、高脂血症、糖尿病和吸烟)被校正后OX40L G等位基因和GG基因型及单倍型GGGG与PACS风险仍具有独立关联性(OR=1.97、1.78、2.01,P=0.026、0.001、0.038),OX40 A等位基因和AA基因型对PACS风险仍有独立的关联性(OR=0.31、0.45;P=0.043、0.0001);OX40L基因型GG+AG比AA型血管病变支数≥3支的百分率和狭窄程度积分均显著增加;OX40基因型AA+GA比GG型血管病变支数≥3支的百分率和狭窄程度积分显著减低;差异均有统计学意义(P<0.05)。基因型变异与炎性细胞因子表达:OX40L基因型GG+AG比AA型血浆可溶性OX40L、C反应蛋白、血管细胞黏附分子1水平均显著增高;OX40基因型AA+GA比GG型三指标显著降低。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:OX40L/OX40基因组变异可能与PACS风险、冠脉病变程度及炎性因子的表达的正反调节有关。 展开更多

关键词 冠状动脉疾病 聚合酶链反应 基因型 OX40配体

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LTA 804C/A基因变异与冠心病易感性、严重度和分子标志物之间的关系 被引量：2

8

作者 赵文强 王俊 +4 位作者 谢红珍 欧阳星文 王士强 陈辉 吴艳君 《中国心血管杂志》 2008年第1期17-20,共4页

目的研究淋巴毒素-α(LTA)804C/A基因变异与冠心病(CHD)易感性、病变严重度和分子标志物之间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性扩增技术(PCR-SSP)对184例CHD患者和118例对照组(CTL)分别检测LTA 804位点基因型、等位基因及其分布频... 目的研究淋巴毒素-α(LTA)804C/A基因变异与冠心病(CHD)易感性、病变严重度和分子标志物之间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性扩增技术(PCR-SSP)对184例CHD患者和118例对照组(CTL)分别检测LTA 804位点基因型、等位基因及其分布频率;用冠状动脉造影测试病变血管支数(DVN)和狭窄程度积分(SSI);用ELISA法和散射比浊法测试血浆LTA、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和C-反应蛋白(CRP)水平;分析LTA基因变异与CHD易感风险、DVN、SSI、血浆LTA、CRP、VCAM-1水平之间的关系。结果LTA 804C/A变异与CHD患病风险显著关联(AA+CA基因型OR=1.47,A等位基因OR=1.54,均P<0.05),AA基因型和A等位基因的频率在CHD组比CTL组显著增高(均P<0.01);804位点变异型(AA+CA)比野生型(CC)的DVN、SSI、VCAM-1及CRP显著增高(P均<0.05);但血浆LTA无显著变化。结论LTA 804C→A基因变异可能是CHD患病的易感基因型,且与冠状动脉病变程度和炎性细胞因子过度表达有关,但与LTA转录无关。 展开更多

关键词 冠状动脉粥样硬化性心脏病 基因型 单核苷酸多态性 聚合酶链反应 淋巴毒素-α

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半乳糖凝集素-2基因变异与急性冠状动脉综合征风险关联研究 被引量：1

9

作者 赵文强 王俊 +3 位作者 谢红珍 欧阳星文 程辉 吴艳君 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2008年第5期360-363,共4页

目的:研究半乳糖凝集素-2(LGALS2)基因变异与急性冠状动脉综合征(ACS)惟患风险之间的关系。方法:采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性法对248例ACS组患者、212例稳定性心绞痛组患者和138例对照组患者检测LGALS2基因C3279T位点基因... 目的:研究半乳糖凝集素-2(LGALS2)基因变异与急性冠状动脉综合征(ACS)惟患风险之间的关系。方法:采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性法对248例ACS组患者、212例稳定性心绞痛组患者和138例对照组患者检测LGALS2基因C3279T位点基因型、基因型频率,等位基因、等位基因频率,用冠状动脉造影测定病变血管支数和狭窄程度积分,用酶联免疫吸附法测试血浆淋巴毒素α和血管细胞黏附分子-1水平;用散射比浊法测试血浆C反应蛋白水平;探索基因型变异与ACS风险、病变血管支数、狭窄程度积分和3个细胞因子水平之间的关系。结果:ACS组与对照组比TT基因型频率和T等位基因频率显著减低(P<0.01和P<0.001),差异有统计学意义;稳定性心绞痛组与对照组比TT基因型频率和T等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。CT+TT基因型发生ACS的危险性与CC基因型发生ACS的危险性比(OR=0.73,P<0.01)、T等位基因发生ACS的危险性与C等位基因发生ACS的危险性比(OR=0.67,P<0.001)差异均有统计学意义;但CT+TT基因型发生稳定性心绞痛的危险性与CC基因型发生稳定性心绞痛的危险性比(OR=0.84,P>0.05)、T等位基因发生稳定性心绞痛的危险性与C等位基因发生稳定性心绞痛的危险性比(OR=0.84,P>0.05)差异均无统计学意义。基因型与冠状动脉病变程度:TT基因型与CC基因型比血管病变支数频率和狭窄程度积分均显著降低(P<0.05和P<0.001)。基因型变异与炎性细胞因子:TT基因型与CC基因型比血浆淋巴毒素α、C反应蛋白、血管黏附分子-1水平均显著降低(均P<0.001)。结论:LGALS2基因C3279T位点变异对ACS易患风险、血管病变程度和炎症级联反应起保护作用。 展开更多

关键词 冠状动脉疾病 基因多态性 基因型 易感性

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荷瘤小鼠卵巢癌细胞miRNA和髓源性抑制细胞的检测及相关性分析 被引量：1

10

作者 刘月琴 林新 +6 位作者 包婷郡 倪萍 谢婵娟 沈慧玲 许文林 许化溪 苏兆亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期467-469,473,共4页

目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测... 目的检测卵巢癌荷瘤小鼠癌组织miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平和外周血和脾脏中髓源性抑制细胞(MDSC)的数量,并分析它们的相关性。方法 12例卵巢癌荷瘤小鼠的癌组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p的水平,流式细胞术检测上述荷瘤小鼠中外周血和脾脏中MDSC的表达。采用Spearman法分析MDSC和microRNA的相关性。结果与正常小鼠相比,荷瘤小鼠外周血和脾脏中的MDSC明显增加。miR-21a-5p、miR-218-5p和miR-222-3p在癌组织中含量高于癌旁组织,相反miR-155a-5p和miR-494-3p在癌组织中的表达低于癌旁组织。miR-222-3p与MDSC的数量无相关性,miR-494-3p的水平与MDSC的数量负相关,miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p在癌组织与癌旁组织的表达差值与MDSC的数量呈正相关。结论卵巢癌荷瘤小鼠癌组织中miR-21a-5p、miR-155a-5p、miR-218-5p、miR-494-3p水平和外周血及脾脏中MDSC的数量有一定的相关性。 展开更多

关键词 微小RNA 髓源性抑制细胞 相关性

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异丙酚与硫喷妥钠用于无抽搐电休克的临床观察 被引量：1

11

作者 汤建高 马震祥 曹兆霞 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期750-751,共2页

关键词 无抽搐电休克治疗 异丙酚 硫喷妥钠

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疑似异位妊娠腹腔镜术后意外诊断绒癌1例

12

作者 刘颂平 殷新明 +2 位作者 田鑫 许跃 石琳 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1475-1476,共2页

绒癌是一种高度恶性的滋养细胞肿瘤，早期症状无明显特异性，与异位妊娠相似，可能于腹腔镜探查中意外发现并诊断。现将我院l例疑似异位妊娠腹腔镜术后意外诊断绒癌报道如下。

关键词 腹腔镜探查 异位妊娠 术后意外 绒癌 诊断 疑似 滋养细胞肿瘤 早期症状

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冠心病左心室能量和能量效率与心脏功能之间的关系

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作者 赵文强 王俊 +2 位作者 赵风兰 马继湘 朱秋菊 《中国临床医学影像杂志》 CAS 北大核心 2007年第9期614-616,645,共4页

目的:研究冠心病左心室能量(LVE)及能量效率(EE)与心力储备之间的关系。方法:根据心导管压力-容积势能理论建立心超声技术下LVE和EE的改良模型,采用心超声法与心导管法对比对70例冠心病人(按冠脉造影病变血管支数分3组和按NYHA心功能分... 目的:研究冠心病左心室能量(LVE)及能量效率(EE)与心力储备之间的关系。方法:根据心导管压力-容积势能理论建立心超声技术下LVE和EE的改良模型,采用心超声法与心导管法对比对70例冠心病人(按冠脉造影病变血管支数分3组和按NYHA心功能分级分4组)和28例正常人的LVE指标和射血分数(EF)进行对比研究,绘制不同NYHA分级的压力-容积环能量图。结果:超声法与导管法测得总能量(TE)、搏功(SW)、收缩末势能(ESE)、充盈能(FE)和EE均高度吻合及相关(r=0.80￣0.91),随病变血管支数和心功能分级增加ESE、FE、TE逐渐递增、EE和EF逐渐降低,P-V环右上移位,EE在不同心功能分级异常的敏感性较EF显著增高(P<0.05)。结论:超声法LVE和EE评价冠心病人心力储备功能可靠易行,且较EF具有更大的优势。 展开更多

关键词 冠状动脉硬化 超声心动描记术 多普勒 彩色 心室功能 左

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4T1乳腺癌细胞培养上清液促进ANA-1巨噬细胞精氨酸酶1分泌

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作者 谢婵娟 沈慧玲 +6 位作者 林新 郎亚坤 朱小兰 包婷郡 刘月琴 苏兆亮 许文林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期577-580,共4页

目的通过模拟体内乳腺癌微环境,探讨4T1小鼠乳腺癌细胞培养上清液在体外对ANA-1巨噬细胞中精氨酸酶1(Arg-1)含量的影响。方法用添加或不添加4T1培养上清液培养ANA-1巨噬细胞,分别在6、8、10、24 h用光学显微镜观察ANA-1细胞形态变化。... 目的通过模拟体内乳腺癌微环境,探讨4T1小鼠乳腺癌细胞培养上清液在体外对ANA-1巨噬细胞中精氨酸酶1(Arg-1)含量的影响。方法用添加或不添加4T1培养上清液培养ANA-1巨噬细胞,分别在6、8、10、24 h用光学显微镜观察ANA-1细胞形态变化。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、Arg-1 mRNA水平,免疫荧光染色、Western blot法检测i NOS、Arg-1蛋白水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,添加4T1上清液的巨噬细胞i NOS mRNA表达水平较对照组减少,Arg-1 mRNA水平较对照组显著升高,且在8 h最显著。与对照组相比,免疫荧光染色和Western blot实验也发现Arg-1表达增强,但添加或不添加4T1培养上清液的细胞i NOS的表达差异不明显。结论 4T1乳腺癌细胞培养上清液诱导ANA-1细胞Arg-1分泌增加。 展开更多

关键词 乳腺癌 肿瘤微环境 巨噬细胞 精氨酸酶1

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突变A53Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析

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作者 王颖 钱进军 +4 位作者 赵康仁 马瑞 徐敏芳 熊御云 高静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期618-620,共3页

目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,... 目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞。方法:PCR扩增法获得含有SalI和NotI的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,SalI、NotI双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,酶切、PCR鉴定重组质粒pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES。重组质粒通过Lipofactamine2000转染SH-SY5H细胞,免疫荧光法鉴定瞬转细胞。结果:真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES构建成功,NLS、NES能介导突变基因A53T-SNCA翻译的α-synuclein蛋白在核内表达或胞质表达。结论:基因A53T-SNCA翻译的突变α-synuclein蛋白核内高表达或胞质高表达可能是家族性帕金森氏病发病机制中关键因素之一。 展开更多

关键词 pRK5 核输入信号 核输出信号

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