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牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
被引量：
3
1
作者
黄金
李思远
+6 位作者
毛立
蔡旭航
谢玲玲
王府
周华
李基棕
李彬
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期2050-2060,共11页
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫Hi...
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125μg·mL^(-1),血清稀释度为1∶200;采用1%明胶,于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25000,37℃孵育45 min;37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD_(450 nm)为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88%(31/32),特异性为87.50%(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P<0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00%(31/31),特异性为88.89%(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91%。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。
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关键词
牛冠状病毒
昆虫杆状病毒表达系统
S1蛋白
间接ELISA
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职称材料
题名
牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
被引量：
3
1
作者
黄金
李思远
毛立
蔡旭航
谢玲玲
王府
周华
李基棕
李彬
机构
江苏
省农业
科学
院兽医研究所
南京农业
大学
动物医
学院
江苏大学生命科学学院/食品与生物工程学院
贵州省种畜禽种质测定中心
黔西市动物疫病预防控制中心
西北农林科技
大学
动物医
学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期2050-2060,共11页
基金
“十四五”国家重点研发计划(2021YFD1801101)
贵州省种业发展项目(肉牛遗传改良与高效养殖技术研究)。
文摘
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125μg·mL^(-1),血清稀释度为1∶200;采用1%明胶,于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25000,37℃孵育45 min;37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD_(450 nm)为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88%(31/32),特异性为87.50%(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P<0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00%(31/31),特异性为88.89%(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91%。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。
关键词
牛冠状病毒
昆虫杆状病毒表达系统
S1蛋白
间接ELISA
Keywords
bovine coronavirus
insect baculovirus expression system
S1 protein
indirect ELISA
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
黄金
李思远
毛立
蔡旭航
谢玲玲
王府
周华
李基棕
李彬
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
3
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