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小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究被引量：2: 1; 作者马洁王胜军 +9 位作者毛朝明杨敏王锁英许小朋邱谷风胡正军姜旭淦邵启祥丁庆许化溪《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期675-677,683,共4页; 目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性... 展开更多; 关键词 GITRL 蛋白表达融合蛋白小鼠; 在线阅读下载PDF 职称材料

T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：1: 2; 作者薛渊王胜军 +6 位作者何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期453-455,共3页; 目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染... 展开更多; 关键词 T-BET 小发卡结构RNA 真核表达树突状细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究: 3; 作者赵银霞王楷文 +5 位作者杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期862-864,共3页; 目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤... 展开更多; 关键词肺癌细胞系 mT-bet 质粒小鼠; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白生物信息学分析被引量：1: 4; 作者沈培苏兆亮 +1 位作者王胜军许化溪《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1205-1208,共4页; 目的获取小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白（GITR）氨基酸序列,并预测其结构和功能。方法利用网络平台及相关生物学软件对小鼠GITR氨基酸序列进行生物信息学分析。结果小鼠GITR氨基酸序列与人等其他物种具有56%的同源性,... 展开更多; 关键词小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白氨基酸生物信息技术; 在线阅读下载PDF 职称材料

牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3: 5; 作者郑东孔凡芝 +6 位作者王胜军苏兆亮仝佳杨恒赵银霞王楷文许化溪《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期572-574,共3页; 目的:克隆牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB基因、原核表达并制备牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB多克隆抗体。方法:根据牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的DNA序列,设计特异性引物并经PCR扩增其基因。扩增产物经鉴定和测序分析后,与质粒pET-32a(+)重组形成pET-32a... 展开更多; 关键词牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB 原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的筛查与Ⅰ类整合子结构分析被引量：2: 6; 作者戴晓莉苏兆亮 +3 位作者陈建国彭素芳李雅贞许化溪《中国感染与化疗杂志》 CAS 2009年第1期52-55,共4页; 目的调查镇江地区临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的检出情况,分析I类整合子-基因盒结构特征。方法对临床收集的细菌采用PCR方法、T-A克隆以及基因测序技术对3类整合酶基因以及I类整合子的结构进行分析。结果296株革兰阴性肠杆菌科... 展开更多; 关键词整合子基因盒革兰阴性菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立: 7; 作者何志强王胜军 +6 位作者薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期285-287,290,共4页; 目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定... 展开更多; 关键词 mHlx DC2.4 EGFP; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究被引量：2: 1; 作者马洁王胜军毛朝明杨敏王锁英许小朋邱谷风胡正军姜旭淦邵启祥丁庆许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室江苏大学附属医院; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期675-677,683,共4页; 基金国家自然科学基金(30871193) 江苏省自然科学基金(BK2004405) 江苏大学拔尖人才培养工程和高级人才启动基金(05JDG042)资助; 文摘目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性克隆经鉴定后用IPTG诱导GITRL蛋白表达,经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE、West-ernblot进行特异性鉴定,CD4+CD25+T细胞免疫抑制试验验证其生物学功能。采用弗氏完全佐剂常规免疫方案,制备抗GITRL抗血清,抗血清的效价和特异性测定采用双向琼脂免疫扩散法。结果:经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Westernblot结果显示,在40kD处呈现单一蛋白条带,该蛋白具有阻断CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能的作用,双向免疫扩散结果显示兔抗小鼠GITRL抗血清效价为1∶16。结论:成功构建GITRL原核表达质粒,制备和纯化的GITRL融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,制备并获得特异性抗血清,可用于GITRL融合蛋白生物学活性的进一步研究。; 关键词 GITRL 蛋白表达融合蛋白小鼠; Keywords GITRL Protein expression Fusion protein Mice; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：1: 2; 作者薛渊王胜军何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期453-455,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871193 30972748) 江苏省大学生创新计划资助(2007-09); 文摘目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用RealtimePCR和Westernblot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;RealtimePCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CD80、CD86与MHCⅡ类分子表达情况。结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达下调,IFN-γmRNA水平显著下降。结论:成功地构建了T-betshRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能。; 关键词 T-BET 小发卡结构RNA 真核表达树突状细胞; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究: 3; 作者赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期862-864,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871193 30972748); 文摘目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。; 关键词肺癌细胞系 mT-bet 质粒小鼠; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白生物信息学分析被引量：1: 4; 作者沈培苏兆亮王胜军许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室镇江市免疫学重点实验室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1205-1208,共4页; 基金国家自然科学基金(30972748,31100648,81072453) 江苏省普通高校研究生科研创新计划(CXLX12_0677); 文摘目的获取小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白（GITR）氨基酸序列,并预测其结构和功能。方法利用网络平台及相关生物学软件对小鼠GITR氨基酸序列进行生物信息学分析。结果小鼠GITR氨基酸序列与人等其他物种具有56%的同源性,具有信号肽、胞外区、跨膜区及胞内区等结构;小鼠GITR蛋白胞外区位于第22-153号氨基酸序列区间;可能含有4个N-糖基化位点、4个丝氨酸磷酸化位点、1个苏氨酸磷酸化位点以及1个酪氨酸磷酸化位点。结论小鼠GITR氨基酸序列的生物信息学分析为进一步表达该蛋白及其相关功能研究奠定了基础。; 关键词小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白氨基酸生物信息技术; Keywords mouse glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor-related protein amino acid bioinformatic technology; 分类号 Q811.4 [生物学—生物工程] R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3: 5; 作者郑东孔凡芝王胜军苏兆亮仝佳杨恒赵银霞王楷文许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室江苏大学附属人民医院口腔科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期572-574,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871193 30972748) +2 种基金江苏大学大学生科研立项(08A018); 文摘目的:克隆牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB基因、原核表达并制备牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB多克隆抗体。方法:根据牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的DNA序列,设计特异性引物并经PCR扩增其基因。扩增产物经鉴定和测序分析后,与质粒pET-32a(+)重组形成pET-32a-ragB,继而转化大肠埃希菌。IPTG诱导重组蛋白的表达,再通过Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定;获得的重组蛋白行常规家兔免疫,以制备多克隆抗体,并应用ELISA测定抗体效价。结果:PCR扩增获得编码区全长为1506bp可编码501个氨基酸的RagB基因,测序结果与GenBank公布的序列(AJ130872)完全一致;构建了pET-32a-ragB原核表达载体,获得了高表达的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blot表明具有较高的纯度;ELISA结果显示,特异性兔抗RagB的多克隆抗体效价为1×105。结论:在成功构建牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB原核表达载体的基础上,高效表达及纯化了RagB融合蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体。为进一步开展牙龈卟啉菌疫苗研究、建立牙龈卟啉菌感染的实验室诊断方法奠定了基础。; 关键词牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB 原核表达多克隆抗体; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的筛查与Ⅰ类整合子结构分析被引量：2: 6; 作者戴晓莉苏兆亮陈建国彭素芳李雅贞许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室; 出处《中国感染与化疗杂志》 CAS 2009年第1期52-55,共4页; 基金江苏省社会发展资助项目(编号:BS2007041) 镇江市社会发展项目(编号:SH2008042); 文摘目的调查镇江地区临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的检出情况,分析I类整合子-基因盒结构特征。方法对临床收集的细菌采用PCR方法、T-A克隆以及基因测序技术对3类整合酶基因以及I类整合子的结构进行分析。结果296株革兰阴性肠杆菌科细菌和不发酵糖菌中I类整合酶基因的检出率最高为43.2%。其中在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌中的检出率分别为61.0%、14.3%、37.3%和20.0%,而Ⅱ、Ⅲ类基因的检出率较低。对I类整合子基因盒结构分析发现共检测到5种不同基因盒,分别为:dfrA17、aadA5、aadA1、aadA2、dhrfⅪ,有4种不同的基因盒排列方式。结论镇江地区临床分离的细菌I类整合子-基因盒检出率较高。; 关键词整合子基因盒革兰阴性菌; Keywords integron gene cassette gram-negative bacteria; 分类号 R378.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立: 7; 作者何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪; 机构江苏大学检验医学研究所免疫学研究室江苏大学附属人民医院检验科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期285-287,290,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871193 30972748) 江苏省卫生厅资助项目(H200952/200859); 文摘目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。; 关键词 mHlx DC2.4 EGFP; 分类号 Q2-33 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究	马洁王胜军毛朝明杨敏王锁英许小朋邱谷风胡正军姜旭淦邵启祥丁庆许化溪	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究	薛渊王胜军何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究	赵银霞王楷文杨恒郑东苏兆亮仝佳王胜军许化溪	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白生物信息学分析	沈培苏兆亮王胜军许化溪	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备	郑东孔凡芝王胜军苏兆亮仝佳杨恒赵银霞王楷文许化溪	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2010	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	临床分离的革兰阴性菌3类整合酶基因的筛查与Ⅰ类整合子结构分析	戴晓莉苏兆亮陈建国彭素芳李雅贞许化溪	《中国感染与化疗杂志》 CAS	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
7	Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立	何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2010	0	在线阅读下载PDF 职称材料