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小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定
被引量：
1
1
作者
马洁
田洁
+5 位作者
刘艳
刘青玲
毛朝明
焦志军
许化溪
王胜军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1075-1077,共3页
目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌...
目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。
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关键词
GITRL
重组腺病毒
病毒滴度
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职称材料
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定
2
作者
马洁
田洁
+4 位作者
刘青玲
刘艳
杨先知
许化溪
王胜军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期405-407,共3页
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化...
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒。反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定。结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒。在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得重组杆状病毒。Western blot法鉴定显示,在Mr20000处有特异性的蛋白条带。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础。
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关键词
GITRL
杆状病毒
真核表达
小鼠
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职称材料
题名
小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定
被引量：
1
1
作者
马洁
田洁
刘艳
刘青玲
毛朝明
焦志军
许化溪
王胜军
机构
江苏大学免疫学和免疫检验学系
江苏
大学
附属医院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1075-1077,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30871193
30972748
+4 种基金
30910103087
81072453)
江苏省卫生厅科研基金资助项目(H2009052)
江苏省教育厅自然科学基金资助项目(08KJB320002)
江苏大学"拔尖人才"工程项目(2008年)
文摘
目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。
关键词
GITRL
重组腺病毒
病毒滴度
Keywords
GITRL
recombinant adenovirus
viral titer
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定
2
作者
马洁
田洁
刘青玲
刘艳
杨先知
许化溪
王胜军
机构
江苏大学免疫学和免疫检验学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期405-407,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30871193
81072453
+4 种基金
30972748
30910103087)
江苏省卫生厅科研基金资助项目(H2009052)
江苏省教育厅自然科学基金资助项目(08KJB320002)
江苏大学"拔尖人才"工程项目资助(2008年)
文摘
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒。反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定。结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒。在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得重组杆状病毒。Western blot法鉴定显示,在Mr20000处有特异性的蛋白条带。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础。
关键词
GITRL
杆状病毒
真核表达
小鼠
Keywords
GITRL
baculovirus
eukaryotic expression
mouse
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定
马洁
田洁
刘艳
刘青玲
毛朝明
焦志军
许化溪
王胜军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
2
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定
马洁
田洁
刘青玲
刘艳
杨先知
许化溪
王胜军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
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