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题名银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析
被引量：1
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作者
刘云华
周秋虎
张灵芝
常振战
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机构
江生态工程职业学院生物技术系
北京大学基础医学院生物物理系
北京大学药学院天然药物学系
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期76-82,共7页
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基金
国家自然科学基金资助项目(31070650)
北京市自然科学基金资助项目(5102023)
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文摘
植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性。
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关键词
银胶菊(Parthenium
argentatum)
丙二烯氧化物合成酶
细胞色素P450
表达纯化
酶活性分析
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Keywords
Guayule （ Parthenium argentatum ）
Allene oxide synthase
Cytochrome P450
Expression and purification
Enzymeactivity assay
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分类号
S576
[农业科学—作物学]
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