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微管抑制及尾桥蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞U2OS微核形成
1
作者
阮荻
孙林
+3 位作者
潘高
周文豪
林怡然
龚业莉
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期207-213,共7页
目的探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率;利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后,DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block,CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2O...
目的探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率;利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后,DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block,CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2OS中微核形成情况;免疫荧光多重染色检测诺考达唑处理不同时间对U2OS细胞中微管及尾桥蛋白的影响;在U2OS细胞中过表达尾桥蛋白或利用collybistin使尾桥蛋白磷酸化,再利用免疫荧光及DAPI染色检测其对微管及微核形成的影响。结果相对于人胚肾HEK293细胞和原代神经细胞,U2OS自发微核率更高;诺考达唑处理使U2OS细胞微核数量增加,且与释放时间相关;诺考达唑处理使尾桥蛋白分布改变,逐渐聚集于细胞核;U2OS细胞中磷酸化尾桥蛋白主要表达于分裂期细胞;过表达尾桥蛋白和(或)增加其磷酸化水平并不影响U2OS细胞中微管蛋白的表达,但过表达尾桥蛋白并增加其磷酸化水平可使微核数量增多。结论肿瘤细胞内微核形成与微管聚集能力关系密切,可形成于细胞周期不同时期,具有积累效应。尾桥蛋白磷酸化后细胞中微核数量增多,提示其可能参与调节肿瘤细胞微核形成。
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关键词
微管
微核
尾桥蛋白
诺考达唑
collybistin
U2OS
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职称材料
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
2
作者
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期649-655,共7页
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业...
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPCs),即MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果经PCR及测序鉴定证实pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]载体中MR1/IgG1Fc与β2m具有正确序列。ELISA、Western blot及流式细胞术检测结果表明MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载DH5α来源代谢物的MR1aAPCs能够促进MAIT细胞活化和增殖。结论成功构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在Sf9细胞中表达MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得MR1aAPCs,为研究MAIT细胞反应性代谢物及MAIT细胞功能提供了新的工具。
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关键词
黏膜相关恒定T细胞
MR1/IgG1Fc二聚体
人工抗原提呈细胞
反应性代谢物
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职称材料
题名
微管抑制及尾桥蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞U2OS微核形成
1
作者
阮荻
孙林
潘高
周文豪
林怡然
龚业莉
机构
江汉大学
医学
部
口腔
医学
系
江汉大学医学部免疫学教研室
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期207-213,共7页
基金
国家级大学生创新训练项目(No.202211072019)
湖北省中医药管理局科研项目(No.ZY2023F142)
江汉大学校级自然科学基金项目(No.2021yb135)。
文摘
目的探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率;利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后,DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block,CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2OS中微核形成情况;免疫荧光多重染色检测诺考达唑处理不同时间对U2OS细胞中微管及尾桥蛋白的影响;在U2OS细胞中过表达尾桥蛋白或利用collybistin使尾桥蛋白磷酸化,再利用免疫荧光及DAPI染色检测其对微管及微核形成的影响。结果相对于人胚肾HEK293细胞和原代神经细胞,U2OS自发微核率更高;诺考达唑处理使U2OS细胞微核数量增加,且与释放时间相关;诺考达唑处理使尾桥蛋白分布改变,逐渐聚集于细胞核;U2OS细胞中磷酸化尾桥蛋白主要表达于分裂期细胞;过表达尾桥蛋白和(或)增加其磷酸化水平并不影响U2OS细胞中微管蛋白的表达,但过表达尾桥蛋白并增加其磷酸化水平可使微核数量增多。结论肿瘤细胞内微核形成与微管聚集能力关系密切,可形成于细胞周期不同时期,具有积累效应。尾桥蛋白磷酸化后细胞中微核数量增多,提示其可能参与调节肿瘤细胞微核形成。
关键词
微管
微核
尾桥蛋白
诺考达唑
collybistin
U2OS
Keywords
microtubule
micronucleus
gephyrin
nocodazole
collybistin
U2OS
分类号
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
2
作者
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
机构
江汉大学医学部免疫学教研室
华中科技
大学
同济
医学
院基础
医学
院
免疫
学
系
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期649-655,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.32170920)
江汉大学校级自然科学基金项目(N0.2021yb135)。
文摘
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPCs),即MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果经PCR及测序鉴定证实pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]载体中MR1/IgG1Fc与β2m具有正确序列。ELISA、Western blot及流式细胞术检测结果表明MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载DH5α来源代谢物的MR1aAPCs能够促进MAIT细胞活化和增殖。结论成功构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在Sf9细胞中表达MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得MR1aAPCs,为研究MAIT细胞反应性代谢物及MAIT细胞功能提供了新的工具。
关键词
黏膜相关恒定T细胞
MR1/IgG1Fc二聚体
人工抗原提呈细胞
反应性代谢物
Keywords
mucosal associated invariant T cell
MR1/IgG1Fc dimer
artificial antigen presenting cell
reactive metabolite
分类号
R392.9 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微管抑制及尾桥蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞U2OS微核形成
阮荻
孙林
潘高
周文豪
林怡然
龚业莉
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
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