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巯基-烯反应在糖化学合成中的应用 被引量:1
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作者 许姗姗 姚卫蓉 +1 位作者 毛建卫 崔艳丽 《科技通报》 北大核心 2016年第3期1-4,33,共5页
巯基-烯反应以光引发自由基反应,不需要重金属参与催化,具有化学选择性高、快速、原子经济性等优点,是绿色化学方法。同时对氧和湿都不敏感,反应条件温和,对生物分子具有良好的相容性,因此逐渐引起了糖化学家的广泛兴趣。综述了近几年TE... 巯基-烯反应以光引发自由基反应,不需要重金属参与催化,具有化学选择性高、快速、原子经济性等优点,是绿色化学方法。同时对氧和湿都不敏感,反应条件温和,对生物分子具有良好的相容性,因此逐渐引起了糖化学家的广泛兴趣。综述了近几年TEC反应在寡糖合成、糖基氨基酸的合成、多肽和蛋白质的糖基化修饰及环糊精-糖簇分子的合成领域的应用,并展望了其未来发展。 展开更多
关键词 巯基-烯反应 糖化学 合成 光反应 区域选择性
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氨基甲酸乙酯水解酶的分离纯化及酶学性质 被引量:14
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作者 李京京 方芳 +3 位作者 张继冉 刘龙 堵国成 陈坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1239-1245,共7页
氨基甲酸乙酯是发酵食品生产过程中的副产物,具有致癌性和遗传毒性,影响食品安全.酶法降解氨基甲酸乙酯是一种高效安全的去毒方法.从小鼠肠道筛选得到一株具有降解氨基甲酸乙酯活性的赖氨酸芽孢杆菌.通过对其细胞破碎上清液进行硫酸铵... 氨基甲酸乙酯是发酵食品生产过程中的副产物,具有致癌性和遗传毒性,影响食品安全.酶法降解氨基甲酸乙酯是一种高效安全的去毒方法.从小鼠肠道筛选得到一株具有降解氨基甲酸乙酯活性的赖氨酸芽孢杆菌.通过对其细胞破碎上清液进行硫酸铵沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶层析分离纯化,得到了氨基甲酸乙酯水解酶纯酶.SDS-PAGE电泳图显示,该酶亚基分子量约为50 kDa.该酶最适反应温度为35℃,最适pH值为7.0,在10~45℃时,具有良好的热稳定性.以氨基甲酸乙酯为底物反应,其Km和Kcat分别为37.2 mmol/L和1 176.4 s-1.金属离子显著抑制酶活力,而EDTA对酶活力无影响,表明此酶为非金属酶.此外,该酶对低浓度的NaC1和乙醇有一定的耐受性,具有在酱油和黄酒中去除氨基甲酸乙酯的应用潜力. 展开更多
关键词 赖氨酸芽孢杆菌 氨基甲酸乙酯 氨基甲酸乙酯水解酶 分离纯化 酶学性质
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鸡精调味料加工过程中微生物检测及安全控制 被引量:3
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作者 宗红 陆信曜 +5 位作者 诸葛斌 方慧英 孙进 冯倩 诸葛健 张慢慢 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期129-132,共4页
为提高鸡精调味品卫生质量,根据生产工艺特点分别对鸡精生产原辅料、加工流程及主要加工设备进行了微生物检测。食用玉米淀粉和葱姜混合物是鸡精生产原辅料中的主要微生物来源,水分含量是直接影响玉米淀粉微生物污染的主要因素,当水分含... 为提高鸡精调味品卫生质量,根据生产工艺特点分别对鸡精生产原辅料、加工流程及主要加工设备进行了微生物检测。食用玉米淀粉和葱姜混合物是鸡精生产原辅料中的主要微生物来源,水分含量是直接影响玉米淀粉微生物污染的主要因素,当水分含量>10%时,100 g玉米淀粉大肠菌群>70 MPN;葱姜混合物经30%质量分数的食用盐处理后可控制微生物的数量。鸡精生产工序过程中的搅拌后、造粒前后及流化干燥前微生物污染严重,其中搅拌后菌落总数最高,为1.2×104CFU/g,造粒前大肠菌群最高,为167 MPN/100g,搅拌和造粒是鸡精生产过程中的关键控制环节。另外,造粒机筛网及侧槽的菌落总数达到908 CFU/cm2,高于食品车间卫生标准,表明造粒岗位是鸡精生产的一个关键控制点。 展开更多
关键词 鸡精调味品 微生物检测 菌落总数 安全控制
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自组装固定化多聚磷酸激酶用于合成ATP和GTP
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作者 胥睿睿 杨凤玲 +4 位作者 孙晓源 卢杰 王阳 康振 李江华 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第2期77-82,共6页
多聚磷酸激酶(polyphosphate kinase)能够利用广泛分布、成本低廉且稳定的多聚磷酸盐作为磷酸基供体,用于合成ATP和GTP,后者为细胞提供必要的能量并参与合成众多含磷酸重要化合物。该文旨在借助合成生物学新技术,通过多聚磷酸激酶催化... 多聚磷酸激酶(polyphosphate kinase)能够利用广泛分布、成本低廉且稳定的多聚磷酸盐作为磷酸基供体,用于合成ATP和GTP,后者为细胞提供必要的能量并参与合成众多含磷酸重要化合物。该文旨在借助合成生物学新技术,通过多聚磷酸激酶催化、高效廉价地合成ATP和GTP。首先根据不同多聚磷酸激酶家族对不同底物催化能力的分析,筛选了属于多聚磷酸激酶第二家族、来源于耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)的聚磷酸激酶Dr PPK2,验证了其同时合成ATP和GTP的活性。接着优化了反应体系中的pH值、Mg^(2+)浓度和催化温度,大幅提高了其合成GTP的效率,最高转化率>92%。为了简化催化流程、节约合成成本,通过添加自组装标签CipA,实现了Dr PPK2的自组装固定化,通过离心可获得高纯度蛋白并实现酶的重复利用,首轮转化率>90%,有效重复效率超过10次。该研究提供了一种方便、高效且易于扩大规模的ATP和GTP生物合成自组装固定化系统,为其他含磷酸的化合物合成提供了借鉴。 展开更多
关键词 聚磷酸激酶 ATP GTP 催化体系优化 自组装固定化
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酱香型白酒酿造过程中氨基甲酸乙酯前体来源解析
5
作者 尹子瑞 赵鑫锐 堵国成 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第4期170-176,共7页
氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)广泛存在于白酒中,由于其具有致癌性,对我国白酒品质和国民健康产生了负面影响,因此明确其形成机制十分必要。但酱香型白酒生产工艺复杂,EC的形成机制尚不清楚。该研究旨在明确酱香型白酒酿造过程中EC... 氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)广泛存在于白酒中,由于其具有致癌性,对我国白酒品质和国民健康产生了负面影响,因此明确其形成机制十分必要。但酱香型白酒生产工艺复杂,EC的形成机制尚不清楚。该研究旨在明确酱香型白酒酿造过程中EC前体的来源,分析不同工艺阶段中的EC前体含量变化规律,为进一步明确EC的形成机制奠定基础。通过检测分析不同原辅料中EC前体含量,明确了EC前体的主要来源是大曲。通过检测分析不同工艺节点的EC及其前体的含量,明确了酱香型白酒中EC的主要形成阶段是蒸馏阶段,氰化物是蒸馏阶段的主要前体。模拟反应实验表明,高粱中的蜀黍糖苷是氰化物的主要来源,这一结论也与氰化物在发酵过程中的含量变化规律相符。最后,从白酒酒醅中筛选得到了一株与生氰糖苷形成氰化物密切相关的热带假丝酵母(Candida tropicalis)。该结果为后续调控酱香型白酒中的EC含量提供了思路。 展开更多
关键词 氨基甲酸乙酯 酱香型白酒 尿素 氰化物 瓜氨酸 生氰糖苷
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蜡样芽孢杆菌胶原蛋白水解酶异源表达与胶原蛋白肽酶法制备
6
作者 刘平 胥睿睿 +3 位作者 黄浩 唐瑶 王阳 康振 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第7期9-15,39,共8页
胶原蛋白肽广泛应用于化妆品与保健品,主要依赖于物理和化学降解法制备。相比较,酶法降解制备胶原蛋白肽由于降解条件温和、分子质量可控等特点具有更大优势。该研究旨在挖掘并实现一种具有商业化潜在价值的胶原蛋白水解酶的高效表达制... 胶原蛋白肽广泛应用于化妆品与保健品,主要依赖于物理和化学降解法制备。相比较,酶法降解制备胶原蛋白肽由于降解条件温和、分子质量可控等特点具有更大优势。该研究旨在挖掘并实现一种具有商业化潜在价值的胶原蛋白水解酶的高效表达制备,实现胶原蛋白肽的酶法制备。首先,通过密码子优化合成了蜡样芽孢杆菌来源的胶原蛋白水解酶ColVD021编码基因,通过N-端序列截短优化,实现了ColVD021-Δ30在大肠杆菌中的活性表达(8.96±0.21) U/mL。进一步通过优化添加金属离子Zn^(2+)和Ca^(2+),ColVD021-Δ30的表达水平提高至(16.24±0.21) U/mL。在此基础上,确定了ColVD021-Δ30的最适pH为7.5,最适温度为37℃。酶解结果表明,重组ColVD021-Δ30对不同来源的胶原蛋白均具有高降解活力,胶原蛋白肽分子质量均低于1 000 Da。此外,农副产品鸡胸软骨的酶解结果表明,ColVD021-Δ30可以直接水解粉碎的新鲜鸡胸软骨生产胶原蛋白肽。该研究实现了蜡样芽孢杆菌胶原蛋白水解酶的高效表达,并建立了胶原蛋白肽的酶法制备工艺,为工业化酶法生产胶原蛋白肽提供了解决方案。 展开更多
关键词 胶原蛋白水解酶 表达优化 金属离子 水解条件优化 低分子质量胶原蛋白肽
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无花果多糖提取、分离纯化及生物活性的研究进展 被引量:30
7
作者 潘悠优 花佩 +2 位作者 王允祥 范丽 王贺 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第17期289-295,共7页
无花果作为一种传统的药食同源的天然保健果品,已有几百年的食用历史。现代研究发现无花果多糖是无花果的重要活性成分之一,具有抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等功能。本文系统综述了国内外最近十几年来关于无花果多糖提取、分离纯化、结构... 无花果作为一种传统的药食同源的天然保健果品,已有几百年的食用历史。现代研究发现无花果多糖是无花果的重要活性成分之一,具有抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等功能。本文系统综述了国内外最近十几年来关于无花果多糖提取、分离纯化、结构及生物活性的研究进展,并指出当前无花果多糖研究中存在的不足以及下一步的研究方向。 展开更多
关键词 无花果 多糖 提取 纯化 结构 生物活性
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泡菜微生物演替与风味物质变化的研究进展 被引量:24
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作者 张锡茹 关慧 +2 位作者 邢少华 刘文丽 李华敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第23期294-305,共12页
泡菜的发酵是微生物不断演替变化的过程,微生物对泡菜风味的形成发挥着重要作用。随着发酵时间的延长,泡菜中微生物的种类和数量发生变化,不同生长阶段的优势微生物在泡菜发酵过程中所发挥的作用也会不同。本文综述了最近几年关于泡菜... 泡菜的发酵是微生物不断演替变化的过程,微生物对泡菜风味的形成发挥着重要作用。随着发酵时间的延长,泡菜中微生物的种类和数量发生变化,不同生长阶段的优势微生物在泡菜发酵过程中所发挥的作用也会不同。本文综述了最近几年关于泡菜微生物演替及泡菜风味变化的研究进展,重点论述了泡菜微生物群落的组成与动态变化,外界因素对泡菜微生物演替的影响与作用,以及不同微生物在泡菜发酵过程中的动态变化对泡菜风味的影响,以期对泡菜的深入理论研究及产业应用提供参考。 展开更多
关键词 泡菜 微生物群落 动态变化 影响因素 风味物质
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利用酶解-发酵联用技术提高猪骨泥的功能性 被引量:8
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作者 王帅楠 宗红 +6 位作者 陆信曜 诸葛斌 方慧英 党艺文 孙进 楼笑笑 冯倩 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期87-90,共4页
通过对酶解-发酵组合处理猪骨泥的可溶性胶原蛋白、可吸收钙、小肽、功能性氨基酸以及抗氧化活性的分析发现:与蛋白酶酶解样品相比,经酶解-发酵处理的猪骨泥产物中可溶性胶原蛋白、小肽、可吸收性钙含量显著提高;必需氨基酸含量提高了... 通过对酶解-发酵组合处理猪骨泥的可溶性胶原蛋白、可吸收钙、小肽、功能性氨基酸以及抗氧化活性的分析发现:与蛋白酶酶解样品相比,经酶解-发酵处理的猪骨泥产物中可溶性胶原蛋白、小肽、可吸收性钙含量显著提高;必需氨基酸含量提高了2倍以上,鲜味氨基酸、抗氧化氨基酸分别提高了112%、142%,抗氧化活性提高了45.32%~164.23%。研究表明,酶解-发酵联用技术不仅可以提高猪骨泥原料利用率及风味,还可增强其营养保健功能。 展开更多
关键词 猪骨泥 酶解-发酵 可溶性胶原蛋白 抗氧化活性
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生物酶法改性提高植物组织化蛋白的产品特性 被引量:4
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作者 李占方 诸葛斌 +5 位作者 宗红 陆信曜 方慧英 许乔 张静 张润杰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期66-71,共6页
以低温脱脂豆粕、大豆分离蛋白、谷朊粉和小麦淀粉为原料,研究生物酶[菠萝蛋白酶、转谷氨酰胺酶(TG)酶]法改性对植物组织化蛋白产品特性的影响,并探讨了酶改性对植物蛋白组织化过程中化学键和蛋白质二级结构的变化规律。研究表明:经菠... 以低温脱脂豆粕、大豆分离蛋白、谷朊粉和小麦淀粉为原料,研究生物酶[菠萝蛋白酶、转谷氨酰胺酶(TG)酶]法改性对植物组织化蛋白产品特性的影响,并探讨了酶改性对植物蛋白组织化过程中化学键和蛋白质二级结构的变化规律。研究表明:经菠萝蛋白酶酶解处理的植物组织化蛋白的产品特性优于TG酶,当菠萝蛋白酶加酶量为12.0 U/g时,组织化蛋白的弹性、咀嚼度分别提高了48%和71%;植物蛋白经菠萝蛋白酶酶解处理后,组织化蛋白中二硫键、氢键与疏水键三者交互作用增强,同时蛋白质二级结构中β-折叠向无规则卷曲转变,无规则卷曲含量提高43%,表明二硫键、氢键和疏水键三者交互作用和二级结构中的无规则卷曲有利于植物组织化蛋白弹性和咀嚼度的改善,其中无规则卷曲含量起关键性作用。 展开更多
关键词 酶改性 植物组织化蛋白 化学键 二级结构
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双歧杆菌胆盐水解酶基因的重组表达、纯化与酶学性质 被引量:5
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作者 周晓玲 张娟 +1 位作者 陈坚 堵国成 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期792-800,共9页
为了提高胆盐水解酶在大肠杆菌中的表达量,研究重组胆盐水解酶的酶学性质。利用大肠杆菌表达系统,对双歧杆菌来源的胆盐水解酶进行了表达。将PCR获得的胆盐水解酶基因克隆至表达载体p ET-22b(+),得到重组质粒p ET-22b(+)-bsh,并转化大... 为了提高胆盐水解酶在大肠杆菌中的表达量,研究重组胆盐水解酶的酶学性质。利用大肠杆菌表达系统,对双歧杆菌来源的胆盐水解酶进行了表达。将PCR获得的胆盐水解酶基因克隆至表达载体p ET-22b(+),得到重组质粒p ET-22b(+)-bsh,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经发酵优化,重组菌在20℃、IPTG 1 mmol/L条件下诱导32 h可达最高酶活,对甘氨脱氧胆酸钠和牛磺酸脱氧胆酸钠的酶活分别为135.2 U/m L和121.3 U/m L。采用镍亲和层析柱对重组胆盐水解酶进行纯化,经SDS-PAGE分析,胆盐水解酶相对分子质量(Mr)为35.0×103。酶学性质研究表明,重组胆盐水解酶偏好水解甘氨结合胆盐,对甘氨胆酸钠的催化活性最高,达到220.1 U/mg。酶催化反应的动力学参数经Hill方程拟合,希尔系数大于1,表明底物与酶之间存在协同作用,且不同底物与重组胆盐水解酶之间存在不同的协同作用,表明重组胆盐水解酶属于变构酶。研究结果为其他来源胆盐水解酶在基因工程菌中的表达,和进一步研究胆盐水解酶的结构和催化反应机理提供了参考。 展开更多
关键词 胆盐水解酶 双歧杆菌 大肠杆菌 重组表达 酶学性质
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生物反应器中表达ScFv大肠杆菌细胞自溶的分析 被引量:3
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作者 胡卫国 安展飞 +3 位作者 刘秀霞 戴晓峰 杨艳坤 白仲虎 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期978-986,共9页
表达外源蛋白细菌培养过程中的细胞自溶现象是一个普遍性的过程工程问题。在相同发酵培养条件下,研究生物反应器中大肠杆菌W3110表达全人源化单链抗体片段(Single chain antibody fragments,ScFv)工程菌和野生菌的外源蛋白表达及细胞活... 表达外源蛋白细菌培养过程中的细胞自溶现象是一个普遍性的过程工程问题。在相同发酵培养条件下,研究生物反应器中大肠杆菌W3110表达全人源化单链抗体片段(Single chain antibody fragments,ScFv)工程菌和野生菌的外源蛋白表达及细胞活性的差异,发现外源蛋白高效表达并积累在细胞内,大部分活细胞较野生菌提前6 h进入活着但不可培养(Viable but nonculturable,VBNC)状态,进而发生细胞自溶。分析工程菌与野生菌中胁迫应激和自溶途径基因转录水平表达谱,发现外源蛋白表达过程中热激途径rpo H,dna K,dna J,gro EL,gro ES;酸胁迫途径rpoS,gadE,gadX;氧胁迫途径sodA,katE均出现表达波峰,而发酵罐中细胞自溶过程中外膜蛋白基因ompA,ompC,ompW,ompX表达量显著下降,但rpoE并未出现持续高表达。这些发现为后续ScFv表达宿主细胞抗胁迫和自溶控制策略提供了新思路。 展开更多
关键词 工程菌细胞自溶 活的不可培养状态 cte途径 胁迫应激生物反应器
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D-甘露糖异构酶的酶学性质探究和热稳定性改造 被引量:2
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作者 沈玲 赵丽婷 +6 位作者 沈昱 陈磊 李军训 顾正华 李由然 石贵阳 丁重阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第24期103-110,124,共9页
D-甘露糖异构酶可以催化D-果糖与D-甘露糖之间的相互转化,在D-甘露糖的生物酶法制备中具有应用前景,但是目前报道的D-甘露糖异构酶热稳定性较差,无法满足工业生产高温的需求。该研究将大肠杆菌(Escherichia coli)Dh5α来源的D-甘露糖异... D-甘露糖异构酶可以催化D-果糖与D-甘露糖之间的相互转化,在D-甘露糖的生物酶法制备中具有应用前景,但是目前报道的D-甘露糖异构酶热稳定性较差,无法满足工业生产高温的需求。该研究将大肠杆菌(Escherichia coli)Dh5α来源的D-甘露糖异构酶异源表达后进行酶学性质研究,并对其进行热稳定性改造。研究结果显示D-甘露糖异构酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH值为6.0~7.0,K_(m)、k_(cat)和k_(cat)/K_(m)分别为963.4 mmol/L、1.38 s^(-1)、1.4×10^(-3)L/(mmol·s)。通过理性改造该研究获得了一株热稳定性显著提高的突变体A241P/A116V/G253A/Q379P,其最适反应温度提高了15℃,在50℃条件下,半衰期为野生型的33倍,相对酶活力比野生型高60%。分子动力学模拟分析表明脯氨酸的引入和疏水作用的增强,提高了蛋白质的刚性,从而使热稳定性提高。该研究通过对主流来源的D-甘露糖异构酶进行酶学性质探究及热稳定性改造,为生物酶法高效制备D-甘露糖提供了理论依据,为D-甘露糖异构酶结构-稳定性的研究奠定基础。 展开更多
关键词 D-甘露糖异构酶 异源表达 酶学性质 热稳定性改造 分子动力学模拟
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可降解大豆过敏原蛋白酶的纯化与酶学性质 被引量:1
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作者 付欧 张娟 +1 位作者 堵国成 陈坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期350-356,共7页
将前期筛选获得的芽孢杆菌Bacillus sp.BBE201108发酵培养后,以其发酵上清液作为蛋白酶的粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、透析除盐、Q FF阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析,蛋白酶的比酶活达到2 575.45 U/mg,纯化倍数为10.55,回收率为... 将前期筛选获得的芽孢杆菌Bacillus sp.BBE201108发酵培养后,以其发酵上清液作为蛋白酶的粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、透析除盐、Q FF阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析,蛋白酶的比酶活达到2 575.45 U/mg,纯化倍数为10.55,回收率为6.48%,经SDS-PAGE电泳显示为单一条带,该蛋白酶的表观相对分子质量约为46 000。该酶与大豆分离蛋白在p H8.0,50℃下反应30 min,可有效降解β-伴大豆球蛋白的α亚基和α'亚基。在p H 7.0-9.0以及30-40℃下的稳定较好;Ca2+存在的情况下,酶活提高了5%左右,而Mn2+、Fe2+和Cu2+在不同程度上对该蛋白酶有抑制作用;苯甲基磺酰氟(PMSF)对该蛋白酶的抑制作用较为显著。酶学性质分析表明,该蛋白酶的Km为4.19 g/L,Vmax为4.04 g/(L·s),Kcat为107.73 s-1,Kcat/Km为25.71 L/(g·s)。 展开更多
关键词 大豆过敏原 芽孢杆菌 蛋白酶 分离纯化 酶学性质
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血清铁蛋白化学发光免疫分析方法的建立及临床应用 被引量:1
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作者 孙姗姗 李昕 +2 位作者 宋翠翠 杨艳坤 白仲虎 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期118-123,共6页
利用链霉亲和素-生物素放大系统及双抗夹心法,建立检测血清铁蛋白的化学发光免疫分析方法。将生物素、辣根过氧化物酶分别标记铁蛋白的一对抗体,以链霉亲和素包被96孔发光板,铁蛋白标准品与国际标准品进行溯源,并对本法的各项性能指标... 利用链霉亲和素-生物素放大系统及双抗夹心法,建立检测血清铁蛋白的化学发光免疫分析方法。将生物素、辣根过氧化物酶分别标记铁蛋白的一对抗体,以链霉亲和素包被96孔发光板,铁蛋白标准品与国际标准品进行溯源,并对本法的各项性能指标进行评价。收集300份临床血清样本,使用本法与进口试剂盒同时检测,检测结果显示:相关系数r为0.97,本法的线性测量范围为10~800 ng/mL,灵敏度为0.2 ng/mL,批内、批间的变异系数(CV%)分别为3.4%~5.5%及5.0%~7.3%,与癌胚抗原、人白蛋白、人类心脏铁蛋白以及血红蛋白交叉反应率均小于1%。本法37℃、9 d热稳定性良好。表明所建立的方法各项指标均满足临床检测要求,抗体及样本用量少,操作简便,反应迅速,便于临床应用,可替代国外同类试剂盒。 展开更多
关键词 血清铁蛋白 化学发光免疫分析 生物素 亲和素 双抗夹心
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结核分枝杆菌腺苷磷酰硫酸激酶的异源活性表达和酶学性质
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作者 胥睿睿 王阳 +1 位作者 史仲平 康振 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期49-56,共8页
PAPS是生物体内磺化反应的惟一活性磺酸基团供体。腺苷磷酰硫酸激酶是催化APS和ATP生成PAPS和ADP的一类酶。为实现PAPS的酶法合成,作者通过密码子优化来自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis AUSMDU00018547)的腺苷磷酰硫酸激酶... PAPS是生物体内磺化反应的惟一活性磺酸基团供体。腺苷磷酰硫酸激酶是催化APS和ATP生成PAPS和ADP的一类酶。为实现PAPS的酶法合成,作者通过密码子优化来自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis AUSMDU00018547)的腺苷磷酰硫酸激酶编码基因与共表达硫氧还蛋白TrxB,实现了腺苷磷酰硫酸激酶在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的异源高活性表达。采用His-Tag标签实现了对腺苷磷酰硫酸激酶的纯化,进一步酶学性质分析结果表明,重组腺苷磷酰硫酸激酶最适温度、最适pH以及比酶活分别为35℃、7.5和(1.26±0.08)U/mg。腺苷磷酰硫酸激酶的异源活性表达与酶学性质分析为未来实现酶法合成PAPS奠定了基础。 展开更多
关键词 PAPS 腺苷磷酰硫酸激酶 结核分枝杆菌 活性表达 活性分析
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基于ARTP技术快速选育番茄红素高效合成突变株 被引量:2
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作者 罗玮 周雅 +2 位作者 巩尊洋 杜瑶 余晓斌 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期802-806,共5页
为了提高番茄红素的生物合成水平,本研究利用常压室温等离子体注入技术对番茄红素生产菌三孢布拉霉负菌(Blakeslea trispora(-))进行诱变选育。首先建立了番茄红素含量分析的标准曲线和等离子体诱变致死率曲线。通过构建的"马鞍形&... 为了提高番茄红素的生物合成水平,本研究利用常压室温等离子体注入技术对番茄红素生产菌三孢布拉霉负菌(Blakeslea trispora(-))进行诱变选育。首先建立了番茄红素含量分析的标准曲线和等离子体诱变致死率曲线。通过构建的"马鞍形"致死率曲线确定了合适的诱变处理时间,经过数轮肉眼初筛和摇瓶复筛,获得了一株产量为0.85±0.04 g/L的突变株ARTP-3,比出发菌株番茄红素的产量提高51.4%,且传代实验表明该菌株的番茄红素产量遗传稳定性较好。本研究不仅获得了一株具有较大经济价值的番茄红素高效合成突变株,建立的育种方法也可为其他工业微生物特别是丝状真菌的选育提供有益的参考。 展开更多
关键词 常压室温等离子体 番茄红素 三孢布拉霉 高效合成突变株
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生物转化合成N-乙酰神经氨酸的关键因素 被引量:1
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作者 朱德强 詹晓北 +3 位作者 吴剑荣 郑志永 赵忠胜 王永远 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期64-70,共7页
在前期工作中已构建了一株能以外源N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和胞内磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,生物转化合成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的重组大肠杆菌,但其合成Neu5Ac的效率有待进一步提高。通过调整生物转化阶段培养基中氮源和碳源的组... 在前期工作中已构建了一株能以外源N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和胞内磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)为底物,生物转化合成N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)的重组大肠杆菌,但其合成Neu5Ac的效率有待进一步提高。通过调整生物转化阶段培养基中氮源和碳源的组成,探寻Neu5Ac合成过程中的关键限制性因素。结果表明,增加唾液酸合成酶NeuB活性的措施没有提高Neu5Ac的产率,而底物之一胞内PEP的供给不足是限制Neu5Ac合成的关键性因素。通过限制转化培养基中的氮源,抑制重组大肠杆菌的生长,避免了PEP被用于细胞自身生长而更多地流向Neu5Ac合成方向;通过改用不依赖PTS跨膜转运系统的甘油作为碳源,在甘油/无氮转化培养基中Neu5Ac合成量最终达到(4.42±0.08) g/L,比初始合成条件高出10.3倍。 展开更多
关键词 唾液酸 N-乙酰神经氨酸 磷酸烯醇式丙酮酸 N-乙酰氨基葡萄糖 全细胞生物转化
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内源性物质对不同品种大米淀粉消化性的影响 被引量:1
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作者 高品涵 薛薇 +4 位作者 李婷 张新霞 王莉 王俊仁 陈正行 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期33-41,共9页
近年来低血糖生成指数(GI)大米品种被培育出来,但是其产生低GI作用机理并不明确,内源性非淀粉物质作为大米关键成分,对不同GI大米淀粉消化率的影响值得探讨。本研究以典型的2种不同GI大米作为研究对象,探究了去除内源性非淀粉物质对大... 近年来低血糖生成指数(GI)大米品种被培育出来,但是其产生低GI作用机理并不明确,内源性非淀粉物质作为大米关键成分,对不同GI大米淀粉消化率的影响值得探讨。本研究以典型的2种不同GI大米作为研究对象,探究了去除内源性非淀粉物质对大米淀粉体外消化性、理化性质和微观结构的影响。结果表明,对于低GI品种,蛋白质和膳食纤维的去除显著促进了淀粉消化,使最终消化率提升了7.37%~13.28%,但高GI品种的内源性非淀粉物质对于淀粉消化性的影响并不显著。在理化性质上,蛋白质和膳食纤维的去除将淀粉的膨胀力显著提升至(17.83±0.30)~(13.44±0.27)g/g,显著改变了米粉的糊化特性和热力学特性,从而使其更容易糊化和消化。在微观结构上,去除蛋白质和膳食纤维使淀粉颗粒结构减小了3~8μm,蛋白质、膳食纤维和淀粉的相互作用提高了米粉的有序度和聚集结构。 展开更多
关键词 大米 淀粉消化性 内源性非淀粉物质 血糖生成指数
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聚二乙炔囊泡用于饮料酒中乙醇的可视化检测
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作者 陈荦 张雨婷 +1 位作者 王晓丽 周楠迪 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期50-57,共8页
随着人们生活水平的提升,饮料酒的消费逐渐上升,引起了市场监管和更多消费者对其品质和乙醇检测方面的关注。因此开发一种操作简单、检测迅速且结果直观的新型乙醇检测器十分必要。作者设计并制备了用于检测饮料酒中乙醇的聚二乙炔(poly... 随着人们生活水平的提升,饮料酒的消费逐渐上升,引起了市场监管和更多消费者对其品质和乙醇检测方面的关注。因此开发一种操作简单、检测迅速且结果直观的新型乙醇检测器十分必要。作者设计并制备了用于检测饮料酒中乙醇的聚二乙炔(polydiacetylene,PDA)囊泡,通过饮料酒中乙醇对PDA囊泡结构的扰动和基团的作用,使囊泡由无乙醇存在时的蓝色逐渐转变为有乙醇时的红色,从而检测产品的乙醇体积分数。结果表明,乙醇体积分数为30%~90%时,与PDA囊泡的比色响应(colorimetric response,CR)值具有良好的线性关系,在实际酒样检测中的相对标准偏差为1.45%~2.23%,裸眼识别颜色变化效果较好。此方法具有高效便捷、结果可视化、反应迅速的优点,为饮料酒中乙醇的检测提供了新方法。 展开更多
关键词 饮料酒 聚二乙炔囊泡 可视化检测
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