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利用可重复使用的URA3标记基因建立热带假丝酵母基因敲除系统
被引量：
14
1
作者
项峥
陈献忠
+3 位作者
张利华
沈微
樊游
陆茂林
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期1053-1061,共9页
热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力,但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以...
热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力,但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以C.tropicalis ATCC 20336为出发菌株,通过化学诱变筛选获得了尿嘧啶缺陷型突变株C.tropicalis XZX(ura3/ura3)。以丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)基因作为靶基因构建了两端包含同源臂并在选择性标记C.tropicalis URA3(Orotidine-5′-phosphate decarboxylase,乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶)基因两侧同向插入源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的hisG序列的基因敲除盒PDC1-hisG-URA3-hisGPDC1(PHUHP),并转化宿主菌株C.tropicalis XZX,筛选获得PHUHP片段正确整合到染色体的PDC基因位点的转化子XZX02。在此基础上,将转化子XZX02涂布于5-FOA(5-氟乳清酸)选择培养基上,筛选得到URA3基因从PHUHP片段中丢失的营养缺陷型菌株XZX03。进一步构建了第2个PDC等位基因的删除表达盒PDCmURA3-PDCm,并转化C.tropicalis XZX03菌株,获得转化子C.tropicalis XZX04。经PCR和DNA测序确认转化子C.tropicalis XZX04细胞染色体上的两个PDC等位基因被成功敲除。文章建立了一种营养缺陷型标记可重复使用的热带假丝酵母遗传转化技术,利用该技术成功敲除了细胞的PDC基因,为进一步利用代谢工程改造热带假丝酵母奠定了基础。
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关键词
热带假丝酵母
遗传转化
同源重组
URA3基因
基因敲除
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职称材料
玉米浆对丁二酸发酵的影响
被引量：
11
2
作者
张乐
刘龙
+2 位作者
李江华
堵国成
陈坚
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期301-307,共7页
采用产琥珀酸放线杆菌NJ113为发酵菌种,研究了5种型号的玉米浆（由法国罗盖特公司提供的095K,048K,095E,No.120924和一种国产玉米浆）对丁二酸发酵的影响.研究了095K和No.120924玉米浆替代酵母膏作为廉价氮源的可行性.结果表明,095K玉...
采用产琥珀酸放线杆菌NJ113为发酵菌种,研究了5种型号的玉米浆（由法国罗盖特公司提供的095K,048K,095E,No.120924和一种国产玉米浆）对丁二酸发酵的影响.研究了095K和No.120924玉米浆替代酵母膏作为廉价氮源的可行性.结果表明,095K玉米浆可以完全替代酵母膏,No.120924的最适替代比例（体积分数）为60％～80％.测定095K玉米浆中氨基酸、维生素和金属离子的含量,并通过正交试验研究了玉米浆中关键组分对丁二酸发酵的影响,得到了6种关键组分（谷氨酸、苏氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、烟酸和生物素）的质量浓度优化组合,与对照组相比,丁二酸产量提高了41.8％.
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关键词
产琥珀酸放线杆菌NJ113
玉米浆
正交试验
丁二酸
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职称材料
乙醇对重组毕赤酵母表达猪α干扰素的性能及其碳源代谢关键酶活性的影响
3
作者
丁健
高敏杰
+4 位作者
侯国力
梁克学
史仲平
于瑞嵩
李震
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第21期150-153,158,共5页
本研究将细胞培养末期乙醇积累浓度低于2g/L的两个批次作为对照,探讨了长时间（大于4h）和瞬时的高乙醇浓度（10g/L以上）对猪α干扰素表达性能以及碳源代谢关键酶活性的影响。结果表明,长时间的高乙醇环境会大幅度降低甘油以及甲醇代...
本研究将细胞培养末期乙醇积累浓度低于2g/L的两个批次作为对照,探讨了长时间（大于4h）和瞬时的高乙醇浓度（10g/L以上）对猪α干扰素表达性能以及碳源代谢关键酶活性的影响。结果表明,长时间的高乙醇环境会大幅度降低甘油以及甲醇代谢过程中关键酶的比活性,最终导致猪α干扰素表达水平比对照组降低约4~12倍;高乙醇浓度的瞬时冲击后,上述关键酶比活性也会有一定程度的降低,猪α干扰素表达水平降低约8倍。
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关键词
毕赤酵母
乙醇积累
猪Α干扰素
酶活
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职称材料
题名
利用可重复使用的URA3标记基因建立热带假丝酵母基因敲除系统
被引量：
14
1
作者
项峥
陈献忠
张利华
沈微
樊游
陆茂林
机构
江南大学生物工程学院、工业生物技术教育部重点实验室
江苏省微
生物
研究所有限责任公司
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期1053-1061,共9页
基金
江苏省科技支撑计划项目(编号:BE2012618)资助
文摘
热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力,但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以C.tropicalis ATCC 20336为出发菌株,通过化学诱变筛选获得了尿嘧啶缺陷型突变株C.tropicalis XZX(ura3/ura3)。以丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)基因作为靶基因构建了两端包含同源臂并在选择性标记C.tropicalis URA3(Orotidine-5′-phosphate decarboxylase,乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶)基因两侧同向插入源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的hisG序列的基因敲除盒PDC1-hisG-URA3-hisGPDC1(PHUHP),并转化宿主菌株C.tropicalis XZX,筛选获得PHUHP片段正确整合到染色体的PDC基因位点的转化子XZX02。在此基础上,将转化子XZX02涂布于5-FOA(5-氟乳清酸)选择培养基上,筛选得到URA3基因从PHUHP片段中丢失的营养缺陷型菌株XZX03。进一步构建了第2个PDC等位基因的删除表达盒PDCmURA3-PDCm,并转化C.tropicalis XZX03菌株,获得转化子C.tropicalis XZX04。经PCR和DNA测序确认转化子C.tropicalis XZX04细胞染色体上的两个PDC等位基因被成功敲除。文章建立了一种营养缺陷型标记可重复使用的热带假丝酵母遗传转化技术,利用该技术成功敲除了细胞的PDC基因,为进一步利用代谢工程改造热带假丝酵母奠定了基础。
关键词
热带假丝酵母
遗传转化
同源重组
URA3基因
基因敲除
Keywords
Candida tropicalis
genetic transformation
homologous recombination
URA3 gene
gene disruption
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
玉米浆对丁二酸发酵的影响
被引量：
11
2
作者
张乐
刘龙
李江华
堵国成
陈坚
机构
江南大学生物工程学院、工业生物技术教育部重点实验室
江南大学
粮食发酵工艺与
技术
国家
工程
实验室
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期301-307,共7页
基金
江苏省优势学科973项目(2013CB733602)
文摘
采用产琥珀酸放线杆菌NJ113为发酵菌种,研究了5种型号的玉米浆（由法国罗盖特公司提供的095K,048K,095E,No.120924和一种国产玉米浆）对丁二酸发酵的影响.研究了095K和No.120924玉米浆替代酵母膏作为廉价氮源的可行性.结果表明,095K玉米浆可以完全替代酵母膏,No.120924的最适替代比例（体积分数）为60％～80％.测定095K玉米浆中氨基酸、维生素和金属离子的含量,并通过正交试验研究了玉米浆中关键组分对丁二酸发酵的影响,得到了6种关键组分（谷氨酸、苏氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、烟酸和生物素）的质量浓度优化组合,与对照组相比,丁二酸产量提高了41.8％.
关键词
产琥珀酸放线杆菌NJ113
玉米浆
正交试验
丁二酸
Keywords
Actinobacillus succinogenes NJ113
corn steep liquor
orthogonal test
succinic acid
分类号
TQ921.4 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
乙醇对重组毕赤酵母表达猪α干扰素的性能及其碳源代谢关键酶活性的影响
3
作者
丁健
高敏杰
侯国力
梁克学
史仲平
于瑞嵩
李震
机构
江南大学生物工程学院、工业生物技术教育部重点实验室
上海农业科
学院
畜牧兽医研究所
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第21期150-153,158,共5页
基金
国家自然科学基金(#31301408)
江苏省自然科学基金(#BK20130122)
文摘
本研究将细胞培养末期乙醇积累浓度低于2g/L的两个批次作为对照,探讨了长时间（大于4h）和瞬时的高乙醇浓度（10g/L以上）对猪α干扰素表达性能以及碳源代谢关键酶活性的影响。结果表明,长时间的高乙醇环境会大幅度降低甘油以及甲醇代谢过程中关键酶的比活性,最终导致猪α干扰素表达水平比对照组降低约4~12倍;高乙醇浓度的瞬时冲击后,上述关键酶比活性也会有一定程度的降低,猪α干扰素表达水平降低约8倍。
关键词
毕赤酵母
乙醇积累
猪Α干扰素
酶活
Keywords
P.pastoris
ethanol accumulation
porcine interferon α
enzymes activities
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用可重复使用的URA3标记基因建立热带假丝酵母基因敲除系统
项峥
陈献忠
张利华
沈微
樊游
陆茂林
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2014
14
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
玉米浆对丁二酸发酵的影响
张乐
刘龙
李江华
堵国成
陈坚
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
乙醇对重组毕赤酵母表达猪α干扰素的性能及其碳源代谢关键酶活性的影响
丁健
高敏杰
侯国力
梁克学
史仲平
于瑞嵩
李震
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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