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实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞t-PA mRNA方法的建立
被引量：
4
1
作者
赵砚婷
张莲芬
金坚
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期633-637,共5页
目的建立实时RT-PCR检测人微血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物（t-PA）mRNA的表达。方法提取人微血管内皮细胞总RNA，经RT-PCR获得靶基因（t—PA）及管家基因（β-actin）的PCR产物。纯化后，作为标准品梯度稀释，采用SYBR GreenⅠ定量...
目的建立实时RT-PCR检测人微血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物（t-PA）mRNA的表达。方法提取人微血管内皮细胞总RNA，经RT-PCR获得靶基因（t—PA）及管家基因（β-actin）的PCR产物。纯化后，作为标准品梯度稀释，采用SYBR GreenⅠ定量PCR检测，建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、精密度和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达t-PA mRNA的干预效果。结果定量方法特异性好，检测的灵敏度达10^3拷贝，线性范围为10^3～10^10拷贝，循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（r^2〉0．990），批内变异≤3．10％。批间变异≤4．93％。1．25～20．00μmol·L^-1的全反式维甲酸能明显上调内皮细胞t-PAmRNA的表达（P〈0．01），且呈剂量依赖性。结论实时荧光定量RT-PCR的方法可对t—PAmRNA的表达进行准确定量，有助于溶栓药物药理学研究和新药筛选。
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关键词
实时逆转录聚合酶链反应
组织型纤溶酶原激活物
人微血管内皮细胞
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题名
实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞t-PA mRNA方法的建立
被引量：
4
1
作者
赵砚婷
张莲芬
金坚
机构
江南大学教育部重点实验室.细胞与分子药理研究室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期633-637,共5页
文摘
目的建立实时RT-PCR检测人微血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物（t-PA）mRNA的表达。方法提取人微血管内皮细胞总RNA，经RT-PCR获得靶基因（t—PA）及管家基因（β-actin）的PCR产物。纯化后，作为标准品梯度稀释，采用SYBR GreenⅠ定量PCR检测，建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、精密度和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达t-PA mRNA的干预效果。结果定量方法特异性好，检测的灵敏度达10^3拷贝，线性范围为10^3～10^10拷贝，循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（r^2〉0．990），批内变异≤3．10％。批间变异≤4．93％。1．25～20．00μmol·L^-1的全反式维甲酸能明显上调内皮细胞t-PAmRNA的表达（P〈0．01），且呈剂量依赖性。结论实时荧光定量RT-PCR的方法可对t—PAmRNA的表达进行准确定量，有助于溶栓药物药理学研究和新药筛选。
关键词
实时逆转录聚合酶链反应
组织型纤溶酶原激活物
人微血管内皮细胞
Keywords
real-time RT-PCR
tissue plasminogen activator
human microvascular endothelial cells,
分类号
R332.12 [医药卫生—人体生理学]
R340 [医药卫生—基础医学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞t-PA mRNA方法的建立
赵砚婷
张莲芬
金坚
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
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