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王不留行提取物对内皮细胞增殖、迁移及其黏附的作用评价 被引量:12
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作者 夏明星 张莲芬 +2 位作者 王一君 李英 金坚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期817-819,共3页
目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对... 目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对细胞染色体的影响。结果王不留行有效部位对HMEC增殖抑制的IC50为3.60mg.L-1,加药4h后起作用。加药48h后HMEC迁移受到明显抑制(迁移率为40.33%,对照组迁移率为77.68%)。加药组细胞黏附受到明显抑制,且呈浓度依赖关系。结论王不留行提取物能明显抑制内皮细胞增殖、迁移及黏附,因此具有潜在的价值用于抑制血管生成。 展开更多
关键词 细胞增殖 细胞迁移 细胞黏附 作用评价
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王不留行中抗人微血管内皮细胞增殖的有效组分的分离和纯化 被引量:3
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作者 夏明星 冯磊 +3 位作者 张莲芬 李英 储敏 金坚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期93-97,共5页
从中药王不留行中筛选具有抑制内皮细胞增殖的有效单一组分。大孔树脂吸附法进行总皂甙的分离纯化,分别收集不同浓度乙醇溶液洗脱液用SRB法进行细胞活性检测,选择有效部分用AKTA Resource柱分离,按紫外吸收峰收集洗脱液并进行活性验证,... 从中药王不留行中筛选具有抑制内皮细胞增殖的有效单一组分。大孔树脂吸附法进行总皂甙的分离纯化,分别收集不同浓度乙醇溶液洗脱液用SRB法进行细胞活性检测,选择有效部分用AKTA Resource柱分离,按紫外吸收峰收集洗脱液并进行活性验证,通过蒸发光散射检测组分复杂程度,选择活性高、丰度大、成份简单的峰进行C18柱分离。结果表明,王不留行提取液经大孔树脂分离和细胞活性检测发现50%~90%乙醇浓度洗脱液具有细胞活性,经AKTA Resource柱分离得7种组份群(0~6),细胞活性测得3~6号组分有活性,选择4号组分过C18柱得5组分(A~E),B组分为有紫外吸收的主峰,但无细胞活性,其活性分布于D和E组分中,其IC50值为3.75μg/ml,D组分经蒸发光散射检测为单峰。经上述方法分离纯化获得抑制人微血管内皮细胞增殖的单一组分群,其单一化合物具有潜在的利用价值。 展开更多
关键词 王不留行 内皮细胞 分离纯化
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二肽基肽酶Ⅳ抑制剂体外筛选模型的建立及应用 被引量:17
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作者 苗雷 许泓瑜 +2 位作者 雷楗勇 金坚 许正宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期411-414,共4页
目的建立二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的筛选模型。方法以Gly-Pro-PNA为反应底物,通过发色底物法检测DPPIV的活性,对酶量、底物浓度、最佳温度、pH及反应时间进行了优化。结果确定反应条件为酶量0.5U.L-1、底物浓度0.262μmol·L-1、温度37℃... 目的建立二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的筛选模型。方法以Gly-Pro-PNA为反应底物,通过发色底物法检测DPPIV的活性,对酶量、底物浓度、最佳温度、pH及反应时间进行了优化。结果确定反应条件为酶量0.5U.L-1、底物浓度0.262μmol·L-1、温度37℃、pH8.2。在上述反应条件下对多种中药进行了筛选,发现中药水蛭、茯神、密蒙花提取物具有DPPIV抑制作用。结论此方法可作为DPPIV抑制剂的体外筛选模型。 展开更多
关键词 DPPⅣ抑制剂 比色法
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人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究 被引量:4
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作者 窦文芳 张莲芬 +3 位作者 雷楗勇 张立操 陈蕴 金坚 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期139-143,共5页
以人胰高糖素样肽-1(human glucagons-like peptide-1,GLP-1))为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/(GLP-1A2G)2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表... 以人胰高糖素样肽-1(human glucagons-like peptide-1,GLP-1))为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/(GLP-1A2G)2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度>90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。 展开更多
关键词 人胰高糖素样肽-1 突变体 表达 生物活性
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