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黄鳝来源阿氏芽孢杆菌的筛选及发酵条件优化
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作者 郑菲菲 何鑫 +5 位作者 尹丽 张靖悦 祝东梅 高坚 宋玉峰 赵玉华 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第3期73-78,共6页
试验旨在从人工养殖的黄鳝体内分离高产蛋白酶菌株,为后续微生物蛋白酶的制备和微生态制剂的开发提供菌种资源,以解决黄鳝摄食率低、消化不完全及水体氮污染等问题。通过采用脱脂奶粉培养基透明圈法初筛和Folin-酚法测定酶活复筛相结合... 试验旨在从人工养殖的黄鳝体内分离高产蛋白酶菌株,为后续微生物蛋白酶的制备和微生态制剂的开发提供菌种资源,以解决黄鳝摄食率低、消化不完全及水体氮污染等问题。通过采用脱脂奶粉培养基透明圈法初筛和Folin-酚法测定酶活复筛相结合的方式筛选人工养殖黄鳝肠道中的高产蛋白酶菌株,通过溶血试验与药敏试验检测菌株安全性,并进行常规生化和分子生物学鉴定。通过单因素和正交试验优化其发酵条件,筛选到一株高产蛋白酶、产过氧化氢酶的菌株Ma-4,初步鉴定其为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)。该菌株最适产酶条件为发酵时间48 h、发酵温度36℃、可溶性淀粉添加量15 g/L、牛肉浸粉添加量15 g/L和pH值6.0。优化后菌株酶活力为288.14 U/mL,较优化前提高了3.34倍。研究表明,菌株Ma-4为高产蛋白酶、产过氧化氢酶、不溶血、不耐药的阿氏芽孢杆菌,该菌株为开发黄鳝微生态制剂开拓了菌种资源。 展开更多
关键词 黄鳝 阿氏芽孢杆菌 筛选鉴定 安全性评价 发酵条件优化
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黄颡鱼朗格汉斯细胞的鉴定及其功能基因的表达分析 被引量:1
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作者 王辉 李思思 +3 位作者 吴志新 许荔立 田丁 陈孝煊 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期173-179,共7页
为研究黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构特点以及细菌感染对其功能相关基因表达的影响,采用免疫组化技术对黄颡鱼免疫器官中朗格汉斯细胞进行鉴定,通过透射电镜进一步观察到黄颡鱼朗格汉斯细胞的超微结构,并采用荧光定量PCR检测鲶爱德华氏菌感... 为研究黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构特点以及细菌感染对其功能相关基因表达的影响,采用免疫组化技术对黄颡鱼免疫器官中朗格汉斯细胞进行鉴定,通过透射电镜进一步观察到黄颡鱼朗格汉斯细胞的超微结构,并采用荧光定量PCR检测鲶爱德华氏菌感染后黄颡鱼免疫相关组织内朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4的表达情况。结果显示,黄颡鱼头肾和脾脏中具有朗格汉斯细胞的特异性分子标记CD207蛋白,且黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构与其他脊椎动物类似,即细胞质中大量的伯贝克颗粒围绕着中心粒呈放射状排列。在鲶爱德华氏菌感染后,朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4在黄颡鱼免疫器官内的表达量显著上调。上述结果表明,黄颡鱼含有朗格汉斯细胞,并且其可能参与了机体抗鲶爱德华氏菌感染的免疫反应。 展开更多
关键词 黄颡鱼 朗格汉斯细胞 鲶爱德华氏菌 荧光定量PCR 基因表达 超微结构 免疫反应 免疫组化
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微生物复合发酵对豆粕营养品质的影响 被引量:12
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作者 李锡阁 周成翀 +3 位作者 吴志新 王辉 罗燕儿 陈孝煊 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期123-131,共9页
从4种具有优良发酵豆粕能力的微生物(枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、米根霉、产黄青霉)中筛选最优发酵菌株组合,以粗蛋白含量和大豆肽含量为评价标准,对发酵工艺条件进行优化,并对豆粕固态发酵前后的营养物质含量和抗营养因子变化进行分析。... 从4种具有优良发酵豆粕能力的微生物(枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、米根霉、产黄青霉)中筛选最优发酵菌株组合,以粗蛋白含量和大豆肽含量为评价标准,对发酵工艺条件进行优化,并对豆粕固态发酵前后的营养物质含量和抗营养因子变化进行分析。结果显示:枯草芽孢杆菌B-8和米根霉M-1为最优发酵菌株组合。复合发酵最佳发酵工艺条件为:枯草芽孢杆菌和米根霉同时接入到豆粕中,两菌株接种比例2∶1,发酵总接种量10%,发酵温度40℃,料水比1.0∶1.4(质量比),发酵时间96 h。豆粕经复合发酵后,发酵产物中大豆肽、粗蛋白、粗灰分、粗脂肪含量较发酵前均得到显著提升,水分含量显著下降,大分子蛋白质基本降解为10 ku以下的小分子,大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量显著低于未发酵豆粕。结果表明,豆粕经复合发酵后营养成分显著增加,抗营养因子含量显著降低,营养品质得到改善。 展开更多
关键词 豆粕 复合发酵 工艺优化 大豆肽 营养品质
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不同温度下恩诺沙星在克氏原螯虾体内的药代动力学 被引量:8
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作者 王欢 许荔立 +4 位作者 陈孝煊 袁军法 田丁 蒋飞 吴志新 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期112-119,共8页
在18℃和25℃2种温度下,对克氏原螯虾注射剂量为20μg/kg的恩诺沙星药液,分析恩诺沙星和环丙沙星在克氏原螯虾体内的药物动力学特征和残留规律。结果显示,恩诺沙星及环丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺中回收率80%~110%,检测值日内变异系... 在18℃和25℃2种温度下,对克氏原螯虾注射剂量为20μg/kg的恩诺沙星药液,分析恩诺沙星和环丙沙星在克氏原螯虾体内的药物动力学特征和残留规律。结果显示,恩诺沙星及环丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺中回收率80%~110%,检测值日内变异系数均小于5%,日间变异系数均小于6%,检测限均在0.01μg/mL(μg/g)以下。18℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T max分别为0.0830、0.3447、1.9335 h,25℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T max分别为0.0830、0.2634、1.1658 h,温度提高加快了克氏原螯虾中恩诺沙星的吸收。消除半衰期T 1/2β大小顺序为肝胰腺(55.7403 h)>肌肉(52.7437 h)>血浆(18.6087 h)。以恩诺沙星和环丙沙星作为残留标志物,25℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为311.47 h,18℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为417.77 h,根据本试验结果,以国家标准0.2μg/g为残留标准,建议恩诺沙星休药期为325(℃·d)。 展开更多
关键词 恩诺沙星 环丙沙星 克氏原螯虾(小龙虾) 药代动力学 药物残留 合理用药量 休药期 食品安全 疾病防控
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益生芽孢杆菌对草鱼肠上皮细胞的黏附及对嗜水气单胞菌的抑制 被引量:4
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作者 孔维光 吴志新 +3 位作者 李思思 赵慧 李锡阁 陈孝煊 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期67-73,共7页
为探讨益生性枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞黏附及对嗜水气单胞菌的抑制作用,以草鱼肠上皮细胞为研究对象,检测了枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞的黏附率、对嗜水气单胞菌的黏附抑制率和对各种生理生化指标的影响。结果显示:枯草芽孢杆菌对草鱼... 为探讨益生性枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞黏附及对嗜水气单胞菌的抑制作用,以草鱼肠上皮细胞为研究对象,检测了枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞的黏附率、对嗜水气单胞菌的黏附抑制率和对各种生理生化指标的影响。结果显示:枯草芽孢杆菌对草鱼肠上皮细胞形态、细胞中四甲基偶氮唑盐(MTT)OD值、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)和谷草转氨酶(GOT)活性等各种生理指标无显著影响,但在孵育3h和6h后分别显著降低了Na+,K+-ATP酶和谷丙转氨酶(GPT)的活性;与嗜水气单胞菌孵育3h后,肠上皮细胞由椭圆变成不规则形态,培养液的死细胞增多,并且在多数时间点上显著降低了MTT OD值以及谷草转氨酶、Na+,K+-ATP酶和谷丙转氨酶的活性,细胞中MTT OD值和细胞上清中乳酸脱氢酶的活性显著提高(P<0.05);枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌共孵育对肠上皮细胞形态及各种生理指标的影响明显小于嗜水气单胞菌组;黏附抑制实验显示枯草芽孢杆菌可以显著降低嗜水气单胞菌对肠上皮细胞的黏附率。提示枯草芽孢杆菌可以抑制嗜水气单胞菌对草鱼肠上皮细胞的黏附,并减轻嗜水气单胞菌对细胞的损伤。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 嗜水气单胞菌 黏附 细胞损伤 肠上皮细胞 草鱼
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发酵有机肥对主养草鱼池塘水质调控效果研究 被引量:8
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作者 季英杰 邓闵 +3 位作者 陈杰玉 王海鹏 缑敬伟 何绪刚 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期171-181,共11页
在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)主养池塘中,对比检测了发酵有机肥实验塘与未施肥对照塘水质理化指标、浮游生物及微生物群落结构差异,以分析发酵有机肥肥效及其对池塘水环境产生的影响。结果如下:发酵有机肥显著提高了浮游生物种类... 在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)主养池塘中,对比检测了发酵有机肥实验塘与未施肥对照塘水质理化指标、浮游生物及微生物群落结构差异,以分析发酵有机肥肥效及其对池塘水环境产生的影响。结果如下:发酵有机肥显著提高了浮游生物种类数、生物量和细菌丰度,增加了浮游植物多样性;实验期间,实验塘浮游植物、浮游动物平均生物量和细菌平均丰度分别为(68.21±25.13)mg/L、(9.83±5.74)mg/L和(6.53±2.13)×10~6 ind./mL,分别是对照塘的2.78倍、4.35倍和1.29倍;发酵有机肥促进有益菌增殖作用显著,施肥后期,实验塘乳酸菌、芽孢杆菌和节杆菌属相对比例分别为(0.61±0.17)%、(0.89±0.29)%和(0.04±0.0082)%,分别是对照塘的3倍、3倍和4倍;发酵有机肥平抑NH_4^+-N、NO_2-N效果显著,在NH_4^+-N、NO_2^--N快速积累季节,实验塘NH_4^+-N、NO_2^--N浓度均显著低于对照塘(P<0.05);发酵有机肥增氧效果显著,而对pH、TN、TP、NO_3^--N、PO_4^(3-)-P等无显著影响。研究结果表明,发酵有机肥肥效突出,具有显著改善池塘水环境作用。 展开更多
关键词 发酵有机肥 精养池塘 浮游生物 细菌 水质理化指标
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大口黑鲈源产蛋白酶菌的筛选与发酵条件优化
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作者 郑菲菲 应可 +2 位作者 杨波 祝东梅 赵玉华 《微生物学杂志》 2025年第5期35-42,共8页
为筛选高产蛋白酶菌株以解决大口黑鲈(Micropterus salmoides)集约化养殖过程中高蛋白饵料残留导致的系列问题,采用脱脂奶粉培养基透明圈法和Folin-酚法测酶活相结合的方式,从零排放圈养模式养殖的大口黑鲈肠道和水体中初步分离得到4株... 为筛选高产蛋白酶菌株以解决大口黑鲈(Micropterus salmoides)集约化养殖过程中高蛋白饵料残留导致的系列问题,采用脱脂奶粉培养基透明圈法和Folin-酚法测酶活相结合的方式,从零排放圈养模式养殖的大口黑鲈肠道和水体中初步分离得到4株具有高产蛋白酶活力的菌株。经过溶血实验和药敏试验的生物安全性评价,得到一株具有良好生物安全性的高产蛋白酶菌株Wa-7。采用CTAB法提取该菌株DNA进行16S rRNA扩增和测序,根据系统进化树鉴定菌株Wa-7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株Wa-7的发酵条件通过单因素试验和正交试验优化,确定最适产酶条件为温度37℃,接种量10%,NaCl浓度8 g/L,发酵时间24 h,碳源为果糖,氮源为牛肉浸粉;确定最适果糖添加量15 g/L,牛肉浸粉添加量15 g/L,pH 6.0。优化后的酶活力提高3.5倍,为375.87 U/mL。本研究可为大口黑鲈绿色健康养殖益生菌的开发与应用提供优质资源,从而推动其绿色健康生态养殖的快速发展。 展开更多
关键词 大口黑鲈 产蛋白酶菌株 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 安全性评价 发酵条件优化
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